大鼠脊髓心房利钠肽的基因表达

用地高辛配基标记的ＡＮＰｃＤＮＡ作为探针,与大鼠脊髓腰段切片原位杂交,观察到杂交反应阳性神经元主要分布于前角（ⅨⅧ层）,少数中间带（Ⅶ层）和后角基部（Ⅶ层）。脊髓中央管室管膜上皮呈弱阳性反应。结果提示脊髓前角神经元和中央管室管膜上皮存在着ＡＮＰｍＲＮＡ,能内源性合成ＡＮＰ。     

心房利钠肽的受体为结合型鸟苷酸环化酶

鸟苷酸环化酶(GC)有两种形式:位于细胞膜中的结合型和分布于胞浆中的游离型。有许多报道,心房利钠肽(ANP)能刺激GC活性,使cGMP增高。最近,Chinkers等证明,ANP的受体即为结合型的GC。他们提取并克隆出大鼠GC完整的cDNA,该基因包括1057个氨基酸编码区,其中从N末端起有441个氨基酸位于细胞膜外,567个氨基酸位于细胞膜内。该酶的分子量为115852,与曾报道的结合型GC的分     

中枢神经系统中的心房利钠多肽

放射免疫及免疫组织化学等方法显示:大鼠中枢神经系统广泛存在心房利钠多肽样免疫活性物质,其密度以下丘脑和隔区最高。中枢神经系统中的某些神经元可能在核周体合成心房利钠多肽,参与水、电解质平衡以及心血管活动等多种生理功能的中枢调节过程。提示心房利钠多肽可能既是一种激素,又是中枢神经系统一种新的肽类神经递质或调节因子。     

胰岛素诱导低血糖大鼠心房肌细胞特殊颗粒的形态计量和心房利钠肽免疫组织化学研究

通过形态计量学和免疫组织化学方法发现胰岛素诱导低血糖大鼠心房肌细胞核周区特殊颗粒（ＡＳＧ）的体密度、面数密度和数密度及平均直径均高于对照组（Ｐ＜０．０５）,但高尔基复合体各参数与对照组比较没有差别（Ｐ＞０．０５）。实验组的心房利钠肽（ＡＮＰ）的免疫反应强度比对照组强（Ｐ＜０．００１）。提示胰岛素诱导低血糖对心房利钠肽的释放具有抑制作用,表明ＡＮＰ作为生理和病理调节递质与代谢刺激相拮抗。     

心房感受器,心房肽和肾脏的钠尿反应

早在1956年,Henry等就提出:心房参与肾功能调节,如扩张麻醉狗的左心房,可引起尿量增加。这种利尿反应在颈部迷走神经冷阻断后就不出现,因而证明这种利尿的反射性质。他们又进一步提出,当体内血容量增加时,心房压升高,使心房容量感受器兴奋,传入冲动经迷走神经传入到下丘脑,抑制抗利尿激素分泌,引起肾脏的利尿反应而使血容量减少。这就是所谓容量感受器假说。他们认为,左心房牵张感受器是这种心—肾之间反射性控制机制的重要部分。抗利尿激素的直接测定(最初是生物测定,后来是放射免疫测定)证实,在左心房压升高时,血浆中抗利尿激素的浓度确实降低。另外,Lydtin等报道,在清醒和麻醉的狗,左心房牵张除了引起利尿反应外,还引起尿钠排出增加。1975年Goetz等系统地总结了关于心房感受器和肾功能方面的文献,详细分析了支持左心房容量感受器     

重组人心房利钠肽 (ANP) 的原核表达、纯化及鉴定

为提高重组人心房利钠肽(Atrial natriuretic peptide,ANP)的表达量,将3个ANP通过赖氨酸(Lysine,K)串联,并构建相对应的重组表达载体p ET28a(+)/ANP3。转染大肠杆菌进行诱导表达,目的蛋白约占菌体总蛋白的60%。经过包涵体变复性,赖氨酸酶(Lys-C)和羧肽酶(CPB)水解,以及一系列层析纯化,每升培养液可获得约16 mg的ANP蛋白。最终,纯化后的ANP经UPLC及Tricine SDS-PAGE鉴定,纯度大于90%,LC-MS鉴定显示其分子量为3 080 Da,且为二硫键正确形成的ANP单体,通过ELISA试剂盒检测,其具有和参比品一致活性。本研究为ANP的大规模制备打下了基础。同时,所采用的串联表达技术也为其他多肽类药物的重组表达提供了新的思路。     

心房肽

1984年美国Currie和日本Kangawa实验室分别从5000只大鼠和40g人的心房组织中提取、分离、纯化出一类活性肽,称为心房肽(atripeptins)。心房肽的发现已经引起了全世界许多科学家的普遍重视和广泛兴趣。由于这种肽具有强烈的利尿、利钠作用,也称为心钠素(cardionatrin)和心房利钠多肽(atrial natrinretic polypeptide,ANP)。早在1964年,Jamieson和Palade曾发现,在心房组织中,含有一些能分泌蛋白或激素的颗粒。但长期以来,关于这种分泌颗粒的内容、特性及功能,并不了解。直至1979年DeBold才提出,这种颗粒可能与水、电解质平衡和细胞外液量的调节有关。他发现,禁水、忌钠的大鼠,心房内这种分泌颗粒明显增加;给试验大鼠静脉注射这种心房提取物,可有效地促进尿钠和尿量的排泄。以后,他们进一步发现,这种心房内的活性物质具有热稳定     

采用微渗透泵测定清醒大鼠肾小球滤过率

目的分析以荧光素异硫氰酸酯标记的菊粉（FITC．菊粉）作为标记物,通过微渗透泵,在大鼠清醒状态下,采用菊粉尿排泄率方法测定肾小球滤过率的可行性。方法将FITC-菊粉溶解在生理盐水中配成浓度为24％的溶液,经滤过后（浓度降至8％）装在微渗透泵内。大鼠腹腔植入2个盛有上述FITC-菊粉溶液的微渗透泵,随机分成2组（需要收集24h尿量组及无需收集尿量组每组各10只）,分别关在代谢笼内。植泵后第7天,需要收集24h尿量组收集24h尿量及代谢笼上残留的FITC-菊粉,在大鼠清醒状态下采集血液标本;无需收集尿量组仅采集血液标本。分别根据不同的公式计算GFR。GFR的计量单位为mL／min,分别用大鼠体重及双肾重量校正后的单位为mL／min·kg体重和mL／min·g体重。结果需要收集24h尿量和无需收集尿量2种方法计算出来的GFR分别为（2．31±0．33）mL／min和（2．53±0．33）mL／min,P=0．564,两者之间差异无统计学意义;与已发表文献相比大鼠GFR平均值3．24mL／min降低了30％,说明麻醉对GFR有较明显影响,去除麻醉因素的影响后,两者数值相近。结论采用微渗透泵方法,用FITC-菊粉作为标记物,可以比较准确地测定清醒状态下大鼠GFR,尤其是无需收集尿量方法更加简便。     

人脑利钠肽的Fmoc固相合成

探讨生物活性肽人脑利钠肽(BNP)的固相合成工艺,并为工业化合成提供理论依据.本文以二氯三甲基树脂(以下简称为二氯树脂)为载体,采用9-芴甲氧羰基(Fmoc)保护的氨基酸,以1-氧-3-双二甲胺羰基苯骈三氮唑四氟化硼盐(TBTU)/1-羟基苯并三氮唑(HOBT)/二异丙基乙胺(DIEA)缩合,以碘作为环化试剂,用切割试剂将BNP粗品从树脂上切割下来.通过MALDI-MS质谱仪检测,所合成环肽的分子量与理论分子量一致,使用RP-HPLC液相色谱仪对合成的环肽进行纯化,得到的BNP纯度达到97%以上.本合成工艺具有快捷、简便、高效的特点,适合于大批量的生产目的肽.     

重组人脑利钠肽的临床应用进展

近年来,随着心力衰竭、肺动脉高压的病理生理及分子机制的深入研究,使上述疾病在临床药物治疗方面有了很大的进步,其中人脑利钠肽(BNP)作为体内唯一天然的肾素-血管紧张素-醛固酮拮抗剂在诊断及治疗心力衰竭等方面均引起了广泛关注,但由于其在心衰状态下降解快且生物活性明显减弱而限制了临床应用。因此,在心力衰竭治疗上补充外源性BNP成为了又一研究热点。重组人脑利钠肽(rhBNP)是一种人工合成的内源性激素,具有扩张血管、排钠利尿、降低心脏前后负荷、抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统和交感神经系统等作用,能够有效的改善充血性心力衰竭患者的血流动力学障碍。新近研究表明,rhBNP在治疗心血管疾病方面疗效显著,本文将就其在临床中的应用予以综述。     

心房肽基因

<正> 心房利钠因子(ANF)发现以后,许多实验室陆续分离出了具有ANF活性的多肽,并测定了其氨基酸序列。ANF有大分子和小分子形式。大分子肽代表ANF前体(或称原),其一级结构已确定,如图1所示。人ANE前体包含151个氨基酸残基,大鼠ANF前体多一个氨基酸,分子量为16556道尔顿。这个肽链有至今报告的所     

循环血容量对人血浆心房利钠多肽有影响

心房利钠多肽(ANP),有强大的利钠和利尿作用,对调节体液平衡有重要作用。1984年由Kangawa等确定其结构,并开始用RIA 法测定其浓度。作者用生理盐水持续静脉滴注或注射速尿后步行试验,使循环血容量增加或减少,以观察血浆ANP 的浓度。试验以8例19～20岁的健康男性为观察对象。盐水负荷试验为晨起空腹,2小时内静滴生理盐水1000 ml,静滴前及静滴后30、60及120分钟分别测定血浆ANP     

人胚心肌细胞心房利钠多肽的免疫电镜观察

用包埋后免疫电镜方法对14例人胚心肌细胞内的ANP分布进行了观察。2个月人胚心肌细胞内开始出现SG,3个月人胚心房肌细胞的SG已可见ANP免疫反应性和分泌现象。6个月人胚心室肌细胞内仍含少数SG,但ANP免疫反应性弱。A、B、D三型SG内ANP的分布与其机能状态有关。     

慢性肾衰竭患者肠道菌群改变与肾小球滤过率的关系

探究慢性肾衰竭患者肠道菌群结构改变与肾小球滤过率的关系。

选取2017年3月至2020年3月我院收治的202例慢性肾衰竭患者作为试验组, 并选取198例同期健康体检者作为对照组。收集两组入选者粪便标本并进行检测, 对比两组入选者肠道菌群数量; 同时对比两组入选者体质量、肾小球滤过率、血肌酐、血尿素氮、血胱抑素C水平, 采用Pearson相关性分析肠道菌群改变与肾小球滤过率的相关性。

相比于对照组, 试验组患者肠道双歧杆菌(t=21.915, P < 0.001)、大肠埃希菌数量显著降低(t=18.220, P < 0.001), 肠球菌数量显著增高(t=16.782, P < 0.001)。相比于对照组, 试验组患者肾小球滤过率(t=147.035, P < 0.001)显著降低, 血肌酐(t=43.129, P < 0.001)、血尿素氮(t=170.206, P < 0.001)、血胱抑素C(t=22.432, P < 0.001)水平显著增高。Spearman相关性分析显示, 慢性肾衰竭患者肠道双歧杆菌(r=-0.695, P < 0.001)和大肠埃希菌(r=-0.631, P < 0.001)与肾小球滤过率呈负相关。Logistic回归分析显示, 双歧杆菌、大肠埃希菌、肠球菌、血肌酐、血尿素氮和血胱氨酸均是慢性肾衰竭患者肾小球滤过率降低的独立危险因素。

慢性肾衰竭患者肠道双歧杆菌和大肠埃希菌数量降低、肠球菌数量升高, 且与肾小球滤过率呈显著负相关。

     

心房利钠肽样免疫反应神经元在大鼠中脑和脑桥中某些锥体外系神经核内的分布

采用PAP免疫组织化学方法对大鼠中脑和脑桥内心房利钠肽(ANP)样免疫反应神经元的分布进行了研究,结果显示阳性神经元除存在于其他作者报导过的导水管周围灰质、Edinger-Westphal核、中缝核、脚间核和蓝斑核外,还存在于属于锥体外系的红核、黑质和脑桥核内,因此,推测脑内的ANP可能在锥外系对躯体运动的调节中起着一种神经递质或神经调质的作用。这为脑内ANP可能具有与液体和电解质平衡以及心血管功能的调节无关的其它作用提供了部分形态学证据。     

重组人脑利钠肽的纯化与活性测定

目的:建立重组人脑利钠肽(BNP)的纯化方法,筛选疏水作用层析纯化介质并优化纯化条件。方法:根据带有6×His标签的Dsb A-BNP融合蛋白的特性,采用金属螯合亲和层析(IMAC)、凝血酶酶切去除His-Dsb A、阳离子交换层析等步骤进行粗纯;利用BNP的疏水性,分别选用不同疏水性质的介质Hi Trap Butyl FF、Hi Trap Phenyl(HS)及Source 15进行精纯;用SDS-PAGE和HPLC检测纯化获得的BNP的含量及纯度;用细胞法对BNP进行活性检测。结果:经IMAC、酶切去除标签蛋白及阳离子交换层析纯化后,获得纯度为60%的BNP;Hi Trap Butyl FF、Hi Trap Phenyl(HS)等疏水介质与BNP的吸附效果不佳,而经Source 15反相层析后,BNP的纯度可达98.98%,活性检测与对照品一致。结论:利用Source 15反相层析可获得高纯度、活性优的BNP原液,可满足后期制剂处方实验的要求,为后续研究奠定了基础。     

心房肽的研究进展

<正> 近三十年来,人们对心脏激素进行了各种研究。Park及lno-oka等曾对心脏脂类物质做了基础和临床方面的研究,但未能形成完整而系统的概念。多数人是在心肌肽类物质方面的研究,付出了更多的精力。Kisch、Jamieson先后于     

恒河猴心房利钠多肽的分离、纯化及活性研究

<正> 1983年以来,人们相继从人和大鼠等动物的心房中分离到心房利钠多肽(ANP)。但对非人灵长类动物——恒河猴的ANP了解甚少。由于ANP对机体循环系统的调节起着重要作用,其强大的降压、利钠、利尿的生理功能,在心血管疾病的防治方面具有重要意义。我们曾报导过恒河猴心房肌细胞中存在着大量的ANP样物质,随后对此物质进行了分离、纯化及活性检测,现简报如下。