菰物种专化DNA序列的克隆及其在检测菰DNA导入水稻中的应用

根据两个植物抗病基因Ｎ和ＲＰＳ２中核酸结合位点（ＮＢＳ）和富亮氨酸重复区（ＬＲＲ）中的保守序列设计了一对特异引物,用ＰＣＲ从具有水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）改良所需要的许多优良性状的水稻近缘野生种菰（Ｚｉｚａｎｉａ ｌａｔｉｆｏｌｉａ（Ｇｒｉｓｅｂ．）Ｔｕｒｃｚ．ｅｘ Ｓｔａｐｆ）的基因组ＤＮＡ中扩增同源片段。ＰＣＲ产物经克隆后,分别以菰和水稻的基因组ＤＮＡ为探针,通过点杂交对所得克隆进     

天麻特异DNA序列的克隆及其在天麻鉴定中的应用

应用改进的RAPD方法测定了名贵中药材天麻基因组DNA指纹图谱;通过选择和回收各种天麻种群共有和优良种群特有的DNA片段,加以克隆、测序和生物信息学分析,证明其中5个DNA序列是未报道的,已被美国基因数据库收录,并运用高效液相色谱技术测定了天麻样本的有效成分天麻素含量。运用PCR技术研究了这些DNA序列在9个天麻种群中的分布及其与天麻素含量的关系。结果表明这5个DNA序列在这些天麻种群中的分布各不相同,其中DNA序列1是所研究的全部天麻种群共有、而其伪品没有的特异DNA分子标记;DNA序列2可能与天麻的天麻素含量高有关。这些DNA标记序列可用于天麻的真伪鉴别、品种鉴定和优选优育等。     

簇毛麦端体6VS的显微切割及其专化DNA序列的克隆和分析

从簇毛麦（Haynaldia villosa (L.)Schur.)组合CA9211／RW15（6D／6V异代换系）幼胚培养SC2后代中,用原位杂交方法鉴定出T240－6为6VS端体异代换系。以此为材料,采用微细玻璃针切割法及“单管反应”技术体系,对6VS进行切割分离及LA（Linker adaptor)-PCR扩增。扩增带在100－3000bp之间,大部分集中在600－1500bp。利用^32P标记的簇毛麦基因组为探针进行Southern杂交,证实扩增产物来源于簇毛麦。扩增产物纯化后,连续到pGEM-T载体上,构建了6VS DNA质粒库。对库的分析表明,库大约有17000个白色克隆;插入片段分布在100－1500bp,平均600bp。点杂交结果表明,37％克隆有中度到强烈的杂交信号,证明含有中度或高度重复序列;63％克隆有较弱的信号或没有信号,证明为单／低拷贝序列克隆。从库中获得8个簇毛麦特异克隆,对其中两个克隆pHVMK22和pHVMK134进行了RFLP分析和序列分析,并利用该探针对小麦抗白粉病基因Pm21进行了检测。RFLP结果表明,两个克隆一个为低拷贝序列克隆（pHVMK22),另一个为高度重复序列克隆,均为簇毛麦专化DNA序列。以pHVMK22为探针对抗、感病小麦（Triticum aestivum L.)品系的Southern杂交发现抗病品系有一条2kb的特征带,该探针可能作为检测抗病基因Pm21的探针。     

簇毛麦端体6VS的显微切割及其专化DNA序列的克隆和分析

从簇毛麦(Haynaldia villosa (L.) Schur.)组合CA9211/RW15(6D/6V异代换系)幼胚培养SC2后代中,用原位杂交方法鉴定出T240-6为6VS端体异代换系. 以此为材料,采用微细玻璃针切割法及"单管反应"技术体系,对6VS进行切割分离及LA (Linker adaptor)-PCR扩增.扩增带在100～3 000 bp 之间,大部分集中在600～1 500 bp.利用32P标记的簇毛麦基因组为探针进行Southern杂交,证实扩增产物来源于簇毛麦.扩增产物纯化后,连接到pGEM-T载体上,构建了6VS DNA质粒文库.对文库的分析表明,文库大约有17 000个白色克隆;插入片段分布在100～1 500 bp,平均600 bp.点杂交结果表明,37%克隆有中度到强烈的杂交信号,证明含有中度或高度重复序列;63%克隆有较弱的信号或没有信号,证明为单/低拷贝序列克隆.从文库中获得8个簇毛麦特异克隆,对其中两个克隆pHVMK22和 pHVMK134进行了RFLP分析和序列分析,并利用该探针对小麦抗白粉病基因Pm21进行了检测.RFLP 结果表明,两个克隆一个为低拷贝序列克隆(pHVMK22),另一个为高度重复序列克隆,均为簇毛麦专化DNA序列.以pHVMK22为探针对抗、感病小麦(Triticum aestivum L.)品系的Southern杂交发现抗病品系有一条2 kb的特征带, 该探针可能作为检测抗病基因Pm21的探针.     

野生稻DNA导入水稻后代的SSR检测分析

以宁夏地区水稻主栽品种‘宁粳16号’、‘宁粳23号’为受体,普通野生稻(Oryza rufipogon,2n=2x=24, AA)为供体,利用花粉管通道导人法与茎注射法相结合的导入方法,将普通野生稻DNA导入宁夏水稻栽培品种, 对筛选出的21份形态、农艺性状典型变异的D2代材料及其对照利用SSR分子标记进行分子鉴定,结果表明,有 17份变异材料扩增出野生稻特有的DNA片段,而2个对照均不能扩增出野生稻特异的DNA片段,证明这些材料就是野生稻DNA片段导入的后代。另外有些材料出现受体DNA条带的减少,可能是由于野生稻DNA片段整合到水稻基因组中该引物结合位点或附近,原有的结合位点破坏而造成的。     

微型DNA条形码在水产类物种掺假检测中的应用

水产类物种掺假导致了商业欺诈、食品安全等问题,建立一种快速高效的水产类物种掺假检测技术迫在眉睫.目前,标准DNA条形码(FDB)在水产类物种掺假检测中已经得到了广泛应用,但是食品加工中的高温、高压、反复冻融和酸碱变化等因素均会使DNA发生降解,导致标准DNA条形码扩增失败.微型DNA条形码(MDB)可以利用相对较短(＜...     

线粒体DNA 序列分析在中国水域真海豚物种鉴定中的初步应用

真海豚包括长喙真海豚( Delphinus capensis) 和短喙真海豚( D. delphis) 2 种, 而中国水域的真海豚到底是哪一个种或是否同时有两个种的存在, 并不清楚。本研究测定了12 头中国水域真海豚mtDNA 控制区(control region) 366 bp 和细胞色素b (cytochrome b , cyt b) 基因336 bp 的序列, 并与已发表的其它真海豚的序列合并分析,初步鉴定中国水域真海豚的分类地位。结果表明, 中国水域的真海豚与东太平洋的长喙真海豚有相同的鉴别位点, 且两者之间的核苷酸歧异度(控制区: 1.93 ±0.22 % , cyt b 基因: 0.68 ±0.19 %) 显著低于与短喙真海豚之间的差异(控制区: 2.92 ±0.41 % , cyt b 基因: 0.95 ±0.27 %) 。通过MEGA (molecular evolutionary genetic analysis) 软件中的邻接法(neighbor joining) 进行的系统发生分析中, 中国水域的真海豚与长喙真海豚聚成一支, 有明显较近的亲缘关系。因此, 中国水域的真海豚在分类上应归属于长喙真海豚。     

CpG免疫刺激DNA序列及其在疫苗佐剂中的应用

CpG免疫刺激DNA序列（ISS）是一种新型疫苗佐剂,可不同程度地提高多种类型疫苗的抗原特异性的免疫反应。按照结构特点的不同,可将CpGISS分为3种类型。CpGISS能够刺激B细胞和浆样树突状细胞,促进机体产生Th1和前炎症细胞因子,且促进抗原呈递细胞的激活和成熟。目前已完成的临床实验结果表明,CpG作为人用佐剂安全,且在一定程度上能够增加疫苗的免疫反应。     

几条水稻MAR序列的克隆及其功能分析

利用水稻基因组数据库和MAR预测技术,快速筛选和克隆到10条水稻MAR序列。将其分别构建到转基因结构的两侧并整合到水稻中,分析所克隆的序列对转基因表达的功能效应。结果表明:其中的3条序列具有MAR序列的功能,能明显地提高外源转基因的表达水平和表达稳定性,转基因的表达水平平均提高约2~19倍,最高可达28.9倍。     

Sixteen polymorphic microsatellite markers from Zizania latifolia Turcz. (Poaceae)

Sixteen polymorphic microsatellite markers were isolated and identified in Zizania latifolia Turcz. (Poaceae), a perennial aquatic plant widespread in Eastern Asia. The microsatellite-enriched library was constructed using the fast isolation by AFLP of sequences containing repeats method. These markers revealed two to 14 alleles, with an average of 5.6 alleles per locus. The observed and expected heterozygosities varied from 0.071 to 0.690 and from 0.174 to 0.812, respectively. These markers will be useful for studying of gene flow and evaluating the genetic diversity of the Zizania latifolia population.     

菰核基因组SSR引物的开发及其在稻族植物中的通用性检测

利用数据库中已有的部分菰(Zizania latifolia Turcz.)核基因组序列,采用in silico方法开发其SSR引物,并选取我国不同纬度的5个菰野生种群,对合成的64对引物进行筛选。结果显示:64对引物中有15对至少在一个种群中表现出多态性;共发现84个等位基因,每个位点平均有5.6个等位基因。在5个种群中,观察杂合度为0.000~0.941,预期杂合度为0.072~0.625。种群间的基因流(Nm=0.576)水平较低导致了种群间表现出较高的遗传分化(FST=0.432)。进一步对稻族其他物种的通用性检测发现,15个多态位点中,有8个位点在亚洲栽培稻(Oryza sativa L.)中得到扩增,有9个位点在普通野生稻(O.rufipogon Griff.)中得到扩增。     

菰（Zizania latifolia）ISSR反应体系的建立及优化

菰是一种稻族野生资源,水生或沼生,在我国有着广泛的分布。野生菰群体不仅是一种重要的育种基因资源,同时还有着巨大的生态作用。为建立适宜于菰的ISSR反应体系,以菰DNA基因组为模板对ISSR反应体系中的主要影响因子进行优化。采用单因素变量法在12个不同梯度水平上设计正交试验针对体系中d NTPs浓度、Mg2+浓度、Taq聚合酶浓度、引物浓度、模板DNA浓度及引物退火温度等6个因子进行优化,确定了在20μL ISSR反应体系中各组分的最适因素水平分别为:3.0 mmol Mg2+(10×Buffer),0.5 mmol d NTPs、1.0μmol引物浓度、0.24 U/μL Taq聚合酶、1.5 ng/μL DNA模板以及55℃退火温度。应用该优化体系对80个菰材料进行扩增,证实了该体系的适用性和稳定性,为菰遗传资源的鉴定、评价与利用提供了技术支撑。     

中国菰资源研究现状及应用前景

中国菰(Zizania latifolia(Griseb.)Turcz.ex Stapf)是一种多年生禾本科稻亚科稻族菰属挺水植物。研究表明,菰具有现代水稻栽培品种所需要的许多优良性状,在生态治理方面表现出应用潜力;菰米营养价值高于普通稻米,且兼具保健功效。菰的这些特性使其在水稻种质改良、重金属离子污染土壤治理以及功能性食品开发方面表现出诱人的前景。近年来,菰属植物的研究工作取得了一定的进展,主要涉及菰的起源进化、菰的经济价值、菰与生态环境的关系、菰遗传多样性分析、菰组学及育种应用等五方面。因文献报道的时间跨度大,涉及面广,目前未见详尽的有关该物种研究进展的专门论述。本文从上述5个方面进行总结,促进对菰的了解,为这种重要野生资源的研究、保护和开发利用提供借鉴,进而加速该物种的研究进程。     

菰和菖蒲对富营养化水体净化效率的比较

研究了菰〔Zizania latifolia(Griseb.)Stapf〕、菖蒲(Acorus calamusL.)及它们的复合体系对富营养化水体的净化效果。结果表明,菰和菖蒲在供试富营养化水体中均能正常生长,二者单独种植体系或等量混合种植体系对富营养化水体均有一定的净化能力。单独种植的菰和菖蒲及二者的混合种植体系对供试水体中总氮的去除率分别为92.8%、92.7%和94.9%;对氨氮的去除率分别为95.5%、97.4%和96.6%;对总磷的去除率分别为83.9%、94.3%和84.7%;对CODCr的去除率分别为83.0%、85.5%和86.7%。单独种植的菖蒲对总磷的去除效果明显好于单独种植的菰和二者的混合种植体系。菰和菖蒲的混合种植体系对富营养化水体的净化效果与单独种植体系无明显差异。     

杀菌剂敌磺钠及植物生长调节剂对茭白孕茭的影响

以‘龙茭二号’为研究对象,通过在茭白植株不同生长发育阶段分别喷施杀菌剂敌磺钠和植物生长调节剂,比较分析其对茭白结茭的促进效果。对6个不同处理组合及对照材料的株高、内源激素含量变化及结茭情况的统计分析发现：喷施一定浓度的敌磺钠对茭白结茭具有明显的促进作用,以敌磺钠（标准浓度）＋营养液和敌磺钠（标准浓度）对茭白结茭产量的提高最为明显。植物生长调节剂处理能明显促进茭白早期植株生长,但对最终株高影响不大。采用间接酶联免疫法对茭白茎部3种激素（IAA、ABA和GA3）含量进行的比较分析表明：敌磺钠处理能够明显降低ABA含量,但对IAA和GA3含量没有明显影响;茭白结茭前ABA含量的降低可能有助于茭白结茭。     

复合胁迫下茭白体内镉、铅的亚细胞分布和植物络合素的合成

以茭白（Zizania latifoliaTurcz.）的单季茭品种‘蒋墅茭’和双季茭品种‘葑红早’为试材,进行Cd2＋、Pb2＋的单一及复合胁迫处理,测定了茭白根系和叶片中的非蛋白巯基（NPT）、谷胱甘肽（GSH）、植物络合素（PCs）的含量,同时测定了茭白植株各亚细胞组分中Cd2＋、Pb2＋的积累量,以探讨茭白对重金属镉、铅胁迫的耐性机理。结果表明：Cd2＋、Pb2＋的单一及其复合胁迫均能促进两茭白品种根系和叶片中NPT、GSH、PCs的含量及茭白各亚细胞组分中Cd2＋、Pb2＋积累量的显著增加;复合胁迫时两茭白品种的NPT、GSH、PCs含量及各亚细胞组分中Cd2＋、Pb2＋的积累量均高于单一胁迫,茭白的不同部位间,以根系中的NPT、GSH、PCs含量显著高于叶片;茭白各亚细胞组分中Cd2＋、Pb2＋的积累量表现为：细胞壁高于原生质体,而可溶性部分高于细胞器。