洋葱鳞茎内表皮细胞中的微管

用超薄切片和原生质体负染的方法,在电镜下观察到洋葱鳞茎内表皮细胞周质微管的存在。其出现时间、分布状况以及排列形态,基本上与考马斯亮蓝染色法观察到的网状结构物相一致。讨论了包被囊泡和微管组织中心可能的作用。     

低温胁迫诱导玉米根尖细胞凋亡的形态和生化证据

近来体外培养细胞体系研究的结果表明,一定条件的低温胁迫可导致植物细胞凋亡。本文利用ＤＮＡ梯状图谱（ＤＮＡｌａｄｄｅｒｉｎｇ）以及染色体涂片的ＴＵＮＥＬ（ｔｅｒｍｉｎｄａｌ ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｙｌ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄＵＴＰｎｉｃｋ ｅｎｄ－ｌａｂｅｌｉｎｇ）原位检测,从原位以及生化水平和对低温胁迫下的玉米根尖细胞死亡作了研究,形态和生化方面的语气表明,同体外一样,     

快速诱导细胞凋亡及检测方法研究

目的：探讨Ca2＋和Na＋诱导细胞凋亡的最佳浓度及时间,并用甲基绿一派诺宁染色法检测凋亡细胞的形态变化。方法：分别用不同浓度梯度及时间梯度的Ca2＋和Na＋胁迫处理洋葱鳞茎内表皮细胞,得诱导的最佳浓度及时间;用甲基绿一派诺宁染色法检测诱导凋亡的洋葱鳞茎内表皮细胞、大蒜根尖细胞和鸡血红细胞的形态特征变化。结果：诱导处理的最佳Ca2＋和Na＋浓度为0．4mol／L,最适时间约为8h,且CaCl2的诱导效果较NaCl好;经甲基绿一派诺宁染色,洋葱鳞茎内表皮细胞、大蒜根尖细胞、鸡血红细胞凋亡细胞的细胞核均呈蓝紫色,细胞质呈红色。结论：找出了诱导细胞凋亡的最适Ca2＋和Na＋浓度和时间,并检测到细胞凋亡。     

洋葱内表皮细胞中的网状结构物

使用 Triton 抽提和卡马氏亮蓝染色方法,在洋葱鳞茎内表皮细胞中观察到网状结构物的存在。秋水仙素和细胞松弛素 B 的处理,进一步区分出两种不同的网状结构:近质膜较细的网状结构能被秋水仙素破坏;核周围与核成切线状结合的较粗的网状结构,经细胞松弛素 B 处理后,其形象更为突出。本文讨论了卡马氏亮蓝方法所揭示的带壁细胞的网状结构物。     

观察洋葱表皮细胞实验的改进

在实验过程中,教师可以想办法培养学生的竞争意识与创新意识。竞争意识的培养可以通过组间或个人间进行比赛的形式获得,如比比谁先观察到玻片标本上的东西。创新意识的培养主要体现在实验的设计方面,不拘泥于书本上的方案,根据现有条件重新设计方案。在此过程中,通过评选最佳方案又可以培养学生的竞争意识。诸如此类的情感教育,完全可以让学生全面体会到实验教学的功效,在情感的指引下唤起学生内部的学习动机,巩固实验的浓厚兴趣。     

洋葱鳞茎表皮Actin细胞骨架的Rh—Ph荧光和光学显微镜观察

洋葱鳞茎内表皮细胞经Triton X-100处理和多聚甲醛固定之后用Rh-Ph(Rhodamine-Phalloidin)染色,细胞质内可见较丰富的、直径为100—300nm的F-actin束。较粗的F-actin束沿细胞的长轴平行排列,并纵裂成较细的“分枝”,纵裂成的分枝又纵裂成更细的“分枝”。各种大小的F-actin束相互交织在一起构成一个三维的纤丝网络,并且与细胞膜、细胞核和其它细胞器相连。经同样方法处理和固定的细胞用考马斯亮兰R_(250)(Coomassie brilliant blue R_(250))染色之后,细胞质内可见直径为200—300nm的纤丝,形态特征和排列方式和上述在荧光显微镜下看到的F-actin束相同。本研究结果表明洋葱鳞茎内表皮的细胞骨架包含较丰富的F-actin系统;Pena的考马斯亮兰染色法(1980)所显示的结构主要代表F-actin束。     

低温胁迫诱导玉米根尖细胞凋亡的形态和生化证据

近来体外培养细胞体系研究的结果表明 ,一定条件的低温胁迫可导致植物细胞凋亡。本文利用DNA梯状图谱 (DNAladdering)以及染色体涂片的TUNEL(terminaldeoxynucleotidyltransferase mediateddUTPnickend labeling)原位检测 ,从原位以及生化水平对低温胁迫下的玉米根尖细胞死亡作了研究 ,形态和生化方面的证据表明 ,同体外一样 ,低温胁迫也能诱导体内植物细胞凋亡。同时对低温胁迫下植物细胞凋亡的形态及生化变化特征和变化次序做了初步观察。实验结果对植物抗低温的生理机制提供了新的研究思路     

盐胁迫诱导的植物细胞凋亡--植物抗盐的可能生理机制

近来的研究表明,一定条件的盐胁迫可导致植物细胞程序性死亡。本文利用DNALaddering、石蜡切片原位检测以及染色体涂片原位检测,从组织、细胞以及DNA等多个方面对盐胁迫下的玉米、水稻和烟草根尖细胞死亡作了研究,形态特别是生化方面的证据表明盐胁迫诱导的植物细胞凋亡可能在植物界具有一定的普遍性。但各个物种之间有一定差异。本实验结果对盐胁迫下的植物生理机制提供了新的研究思路。同时,我们还对基于染色体制片和石蜡切片的原位检测方法进行了比较和讨论。我们认为,基于染色体制片的原位标记技术适合于定性和定量检测单个细胞的凋亡,具有一些石蜡切片所不可及的优点。     

镉离子诱导BA/F3β细胞发生奇特的细胞凋亡

细胞凋亡一般都伴随有ＤＮＡ 片段化, 活性氧含量增加, 并能被过量的Ｂｃｌ２ 所抑制。以ＢＡ／Ｆ３β细胞为模型, 利用ＭＴＴ 检测、Ｈｏｃｈｅｓｔ 染色以及透射电镜检测等技术却发现, 镉离子虽然可以诱导该细胞凋亡, 但是这种凋亡没有ＤＮＡ 片段化, 也没有活性氧含量增加。此外, 过量Ｂｃｌ２ 对这种凋亡也没有保护作用。因此, 可以确认镉离子诱导ＢＡ／Ｆ３β细胞发生了奇特的细胞凋亡。     

活性氧诱导细胞凋亡

细胞凋亡是细胞主动的衰老和死亡方式。细胞凋亡过程极其复杂,其生化机制还不十分清楚。用活性氧如H_2O_2、ONOO及脂质过氧化物等可直接诱导某些细胞发生凋亡,抗氧化剂对细胞凋亡有抑制作用。细胞内产生活性氧的部位主要是线粒体电子传递链、黄嘌呤—黄嘌呤氧化酶途径、磷脂酶A_2激活的花生四烯酸代谢途径及精氨酸-NO合成酶途径。外源性活性氧或通过内源性活性氧的生成,导致细胞内氧化还原状态的失衡,诱导某些基因的表达,引起凋亡。     

氧化应激诱导内皮细胞凋亡microRNA表达改变的研究

目的:研究氧化应激诱导的内皮细胞micro RNA的表达变化。方法:ECM(Endothelial Cell Medium)培养人脐静脉内皮细胞,利用不同浓度双氧水(0μmol/L,200μmol/L,500μmol/L,800μmol/L)刺激24小时后应用流式细胞术检测其凋亡水平。提取细胞总RNA,利用实时定量PCR(Quantitive real-time PCR;q RT-PCR)检测micro RNA表达量变化,并利用生物信息学软件预测可能的靶基因。结果:加入不同浓度双氧水处理24 h后的内皮细胞总凋亡率均显著高于对照组,200μmol/L、500μmol/L和800μmol/L组的凋亡率分别为(13.31%vs 4.75%,35.9%vs 4.75%,89.75%vs 4.75%,P0.01)。200μmol/L的双氧水处理内皮细胞后,micro RNA的表达出现了明显的改变。其中mi R-92a、mi R-126的表达明显下调(P0.05),mi R-181a、mi R-217、mi R-34a和mi R-320的表达明显上调(P0.05)。靶基因预测显示mi R-320、mi R-92a可能调控多个和内皮细胞凋亡相关的基因表达。结论:在氧化应激诱导的内皮细胞凋亡中,mi RNA表达发生改变并可能参与调控内皮细胞功能。     

Prion Protein Protects Cancer Cells against Endoplasmic Reticulum Stress Induced Apoptosis

Unfolded protein response(UPR) is an adaptive reaction for cells to reduce endoplasmic reticulum(ER) stress. In many types of cancers, such as lung cancer and pancreatic cancer, cancer cells may harness ER stress to facilitate their survival and growth. Prion protein(PrP) is a glycosylated cell surface protein that has been shown to be up-regulated in many cancer cells. Since PrP is a protein prone to misfolding, ER stress can result in under-glycosylated PrP, which in turn may activate ER stress. To assess whether ER stress leads to the production of under-glycosylated PrP and whether underglycosylated PrP may contribute to ER stress thus leading to cancer cell apoptosis, we treated different cancer cells with brefeldin A(BFA), thapsigargin(Thps), and tunicamycin(TM). We found that although BFA, Thps, and TM treatment activated UPR, only ATF4 was consistently activated by these reagents, but not other branches of ER stress. However, the canonical PERK-eIF2α-ATF4 did not account for the observed activation of ATF4 in lung cancer cells. In addition, BFA,but neither Thps nor TM, significantly stimulated the expression of cytosolic PrP. Finally, we found that the levels of PrP contributed to anti-apoptosis activity of BFA-induced cancer cell death. Thus, the pathway of BFA-induced persistent ER stress may be targeted for lung and pancreatic cancer treatment.     

顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型的建立

目的：建立常见凋亡诱导剂顺铂（Cisplatin）诱导非洲绿猴肾细胞（Vero）凋亡的模型,为进一步研究抗凋亡基因在细胞凋亡中的分子机理打下基础。方法：分别以不同浓度的顺铂处理Veto细胞48h,用噻唑蓝（MTT）比色法、Gimesa染色、流式细胞术检测,观察处理后细胞的生长活力和凋亡情况。结果：以未处理的细胞作为对照组,1、2、3、4,5μg／mL的顺铂处理的Vero细胞生存率分别为（79．02±6．10）％、（68．84±4．42）％、（56．66±4．07）％、（46．83±3．76）％、（29．04±5．93）％（P〈0．01）;经顺铂诱导后细胞形态学发生明显改变,出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征;流式细胞仪检测,0、1、2、3、4、5μg／mL的顺铂处理的Vero细胞后凋亡率分别为1．66％±0．19％、16．65％±1．26％、24．82％±1．03％、36．22％±1．04％、48．49％±1．24％、43．34％±1．17％（P〈0．01）。结论：本实验成功建立顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型,将有助于进一步探讨目的基因在Vero细胞凋亡作用的的分子机制。     

顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型的建立

目的:建立常见凋亡诱导剂顺铂(Cisplatin)诱导非洲绿猴肾细胞(Vero)凋亡的模型,为进一步研究抗凋亡基因在细胞凋亡中的分子机理打下基础。方法:分别以不同浓度的顺铂处理Vero细胞48h,用噻唑蓝(MTT)比色法、Gimesa染色、流式细胞术检测,观察处理后细胞的生长活力和凋亡情况。结果:以未处理的细胞作为对照组,1、2、3、4、5μg/mL的顺铂处理的Vero细胞生存率分别为(79.02±6.10)%、(68.84±4.42)%、(56.66±4.07)%、(46.83±3.76)%、(29.04±5.93)%(P<0.01);经顺铂诱导后细胞形态学发生明显改变,出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征;流式细胞仪检测,0、1、2、3、4、5μg/mL的顺铂处理的Vero细胞后凋亡率分别为1.66%±0.19%、16.65%±1.26%、24.82%±1.03%、36.22%±1.04%、48.49%±1.24%、43.34%±1.17%(P<0.01)。结论:本实验成功建立顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型,将有助于进一步探讨目的基因在Vero细胞凋亡作用的的分子机制。     

IL-24选择性诱导肿瘤细胞凋亡机制

白细胞介素24/MDA-7基因是在黑色素瘤分化过程中被分离得到的,具有抑制黑色素瘤增生和促进其终末分化的能力。IL-24作为细胞因子不仅具有免疫调节功能,而且能选择性诱导多种肿瘤细胞凋亡。这种抑制作用不依赖p53、Rb和p16等抑癌基因,对正常细胞没有影响。白细胞介素24具有显著的选择性抗肿瘤特性,成为肿瘤治疗的研究新热点。     

硒对氧化应激诱导的胎盘滋养层细胞增殖与凋亡的影响

摘要 目的：检测硒（NaSe）对CoCl₂氧化应激诱导人胎盘滋养层细胞(JEG-3) 增殖与凋亡的影响及其可能机制。方法：体外培养JEG-3 细胞,在加入CoCl₂（500 μM）氧化应激诱导前先加入NaSe(100nM) 预处理24小时,MTT 实验检测硒对氧化应激JEG-3的增殖促进作用; 利用细胞流式术（FCM）检测硒对氧化应激JEG-3细胞凋亡的影响;用Western blot检测硒影响氧化应激JEG-3细胞增殖与凋亡的可能分子生物学机制。结果：MTT 提示硒能够增加氧化应激诱导的JEG-3细胞的增殖活性(P＜0.05) ,降低氧化应激JEG-3细胞凋亡率(P＜0.01) ,同时硒蛋白Gpx1表达上调(P＜0.05) ,脂质过氧化物MDA表达下降（P＜0.05）。结论：硒通过上调硒蛋白Gpx1 表达,降低脂质过氧化物MDA表达,进而降低氧化应激JEG-3细胞凋亡率而发挥其促进增殖活性,提示硒的补充对子痫前期的预防和治疗具有重要的意义。     

Daxx过表达对氧化应激诱导的肝肿瘤细胞凋亡的影响

死亡结构域相关蛋白Daxx可以敏化多种肿瘤细胞的凋亡过程,但对于肝肿瘤细胞株HepG2的影响未见报道．为了研究Daxx增加肝HepG2细胞对药物敏感性的影响及机制,为开发药物新的药理作用提供理论依据,分别转染pEGFP-C1和pEGFP-C1-Daxx这两个载体到HepG2细胞．实验分组如下：（1）正常对照组（未转染细胞组）;（2）pEGFP-C1空载体转染组（HepG2/GFP细胞）;（3）pEGFP-C1-Daxx表达载体转染组（nepG2/GFP-Daxx细胞）．筛选稳定细胞株,用逆转录聚合酶链反应检测mRNA的表达;用过氧化氢孵育24h诱导细胞凋亡,采用MTT法和流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测蛋白质的表达．经G418筛选稳定的细胞运用RT-PCR技术分析其mRNA,结果显示,转染绿色荧光蛋白Daxx表达载体的细胞Daxx的mRNA明显上调：用荧光显微镜观察到Daxx蛋白主要定位于细胞核．用过氧化氢诱导HepG2细胞凋亡,观察到过氧化氢呈浓度依赖性地抑制HepG2细胞活性．正常对照细胞、HepG2／GFP、HepG2／GFP-Daxx 3组细胞的IC50值分别是0．72、0．76、0．49mmol／L．并且运用流式细胞仪检测到HepG2／GFP-Daxx组细胞凋亡率明显高于转染空载体质粒组与未转染组（（42．9&#177;8．42）vs（27．3&#177;6．38）or（28．5&#177;4．71））．提示HepG2/GFP-Daxx细胞对过氧化氢的反应性较未转染细胞和HepG2/GFP敏感．还运用Western-blot检测到活化的caspase3在Daxx转染组细胞表达最强,达到（204．66&#177;19．68）％,而未转染和HepG2/GFP组细胞分别是（100&#177;3．1）％、（107．39&#177;20．1）％,进一步说明了Daxx可以增加HepG2细胞对于过氧化氢的敏感性．同时,观察到过氧化氢处理24h后,Daxx转染组细胞磷酸化的JNK表达明显高于空载体转染组和未转染细胞组．上述结果表明：a．Daxx可以增加肝HepG2细胞对过氧化氢诱导的细胞凋亡敏感性;b．Daxx蛋白敏化过氧化氢诱导的HepG2细胞凋亡可能与协同增加JNK活性有关．     

口蹄疫病毒诱导宿主细胞凋亡的研究

本文报道了口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV）在体外诱导PK－15细胞凋亡的研究结果,采用Hoechst33258荧光探针、DNA凝胶电泳、脱氧核糖核酸转移酶介导的制品末端标记（TUNEL）技术均检测到了典型的细胞凋亡,结果显示：使用感染性滴度为4.8lgTCID50/mL的口蹄疫病毒感染PK－15细胞,在培养32h后,荧光探针检测呈现典型的凋亡细胞核固缩和梅花状碎裂核,并伴随有凋亡小体出现,调亡率约为20％;DNA凝胶电泳显示ladder梯带;末端标记检测到强绿色荧光标记物结合于凋亡细胞核上。研究结果提示：口蹄疫病毒可以在体外诱导宿主细胞凋亡,细胞凋亡是其致细胞病变死亡的重要途径之一。     

砷暴露诱导人肝细胞氧化应激过程中NADPH氧化酶作用机制

目的：探讨砷暴露诱导细胞氧化应激的分子机制。方法：采用人正常肝细胞进行亚砷酸钠和砷酸钠的暴露处理,并设相应对照组,采用SOD模拟物MnTMPyP和还原型谷胱甘肽（reducedglutathione,GSH）预处理,检测细胞超氧阴离子（02。）和细胞整体ROS的水平。WestemBlot方法检测细胞氧化／抗氧化重要酶微粒体谷胱甘肽硫转移酶（microsomalglutathioneS-transferase-l,Mgst．1）、半胱氨酸双加氧酶l（cysteinedioxygenasel,Cd01）和NADPH氧化酶的催化亚基NOX4的表达。针对NADPH氧化酶,采用特异性抑制剂（diphenyleneiodoniumchloride,DPI）进行预处理,观察对砷暴露引起的细胞ROS水平及细胞凋亡的影响。结果：砷暴露能够显著诱导细胞超氧阴离子的产生,提高细胞整体ROS水平,其中三价砷（亚砷酸钠,A矿）诱导氧化应激作用显著强于五价砷（砷酸钠,As5＋）。亚砷酸钠能够显著提高NOX4的表达。针对NADPH氧化酶的抑制剂DPI能够显著抑制砷暴露引起的细胞ROS水平升高以及细胞凋亡的增加。结论：NADPH氧化酶是砷暴露诱导人肝细胞的作用靶点,砷能够通过NADPH氧化酶产生大量超氧阴离子,提高ROS水平,造成氧化应激,诱导人正常肝细胞凋亡。     

Methylprednisolone and Indomethacin Inhibit Oxidative Stress Mediated Apoptosis in Rat C6 Glioblastoma Cells

Glioblastoma patients receive anti-inflammatory agent for alleviation of vasogenic edema and pain prior to surgery, radiotherapy, and chemotherapy. Oxidative stress is an important mechanism of action of some chemotherapeutic agents in the treatment of glioblastoma. So, we examined the modulatory effects of methylprednisolone (MP, a steroidal anti-inflammatory agent) and indomethacin (IM, a non-steroidal anti-inflammatory agent) on apoptosis in rat C6 glioblastoma cells following oxidative stress with hydrogen peroxide (H₂O₂). Exposure of C6 cells to 1 mM H₂O₂ for 24 h caused significant amounts of morphological and biochemical features of apoptosis. Expressions of Bax and Bcl-2 at mRNA and protein levels were altered resulting in an increase in Bax : Bcl-2 ratio in apoptotic cells, which also exhibited overexpression of 80 kDa calpain and an increase in calpain-cleaved 145 kDa α-spectrin breakdown product. Immunofluorescent and propidium iodide labeling detected caspase-3-p20 fragment in apoptotic cells, indicating activation of caspase-3 as well. Treatment of cells with 1 μM MP or 10 μM IM alone did not induce apoptosis. Pretreatment (1 h) with either 1 μM MP or 10 μM IM significantly inhibited H₂O₂ mediated apoptosis in C6 cells. Thus, pretreatment of glioblastoma with an anti-inflammatory agent, either steroidal or non-steroidal, may compromise the action of a chemotherapeutic agent that mediates therapeutic action via oxidative stress.