抗HLJ1单克隆抗体的制备及抗原检测方法的建立

为制备抗人肝脏DnaJ-like蛋白(Human liver DnaJ-like protein, HLJ1)的单克隆抗体, 并建立免疫组化和双抗体夹心ELISA检测HLJ1的方法。采用淋巴细胞杂交瘤技术, 获得两株能稳定分泌抗HLJ1单克隆抗体的杂交瘤细胞株A4C7和 C4C8。经鉴定, 两株单抗的亚类均为IgG1, 并且效价高、特异性好。以单抗A4C7和C4C8作为一抗, 对人胎肝组织石蜡切片进行免疫组化染色, 结果表明, 两株单抗均为阳性染色, 且HLJ1主要定位于胎肝细胞的胞浆。选取A4C7进行HRP酶标记, 并以HRP- A4C7作为酶标抗体, 以C4C8作为包被抗体, 建立双抗体夹心ELISA方法, 并进行棋盘滴定确定抗体的最佳工作浓度。该检测方法的线性范围是15~750 ng/mL, 灵敏度下限达15 ng/mL, 特异性良好。所建立的免疫组化和双抗体夹心ELISA 法可用于快速、灵敏地检测组织及血清中的HLJ1蛋白, 为HLJ1的肿瘤相关性研究提供了有力的工具。     

抗人B7-H1单克隆抗体的制备和鉴定

目的:采用杂交瘤技术制备抗人B7-H1单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法:经抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞以常规方法融合;用间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株;阳性克隆用有限稀释法获得稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;扩增杂交瘤细胞注射进小鼠腹腔后制备腹水;纯化腹水中的单克隆抗体并对其亚型进行鉴定;用间接ELISA法测抗体效价;将肺癌组织制成石蜡切片,用抗人B7-H1抗体进行免疫组化染色。结果:获得1株稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型为IgG1;抗体效价为1×108,纯化后的抗体含量为6.76g/L;免疫组化实验中,单抗可与肺癌组织表面的B7-H1蛋白特异地结合。结论:制备了人B7-H1单克隆抗体,为B7-H1检测试剂盒的研制奠定了基础。     

汉滩病毒PS-6单克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立与应用

目的 制备汉滩病毒(Hantaan virus, HTNV)PS-6株小鼠单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb),建立HTNV抗原双抗体夹心ELISA检测方法,验证方法的检测性能并初步应用于疫苗抗原含量检测。方法 以HTNV PS-6株灭活全病毒原液作为免疫原,采用小鼠杂交瘤融合技术,筛选mAb杂交瘤细胞株,制备mAb;用间接ELISA测定mAb效价;用Western blot鉴定mAb特异性;用间接ELISA测定mAb相对亲和力;经抗体配对筛选,建立双抗体夹心ELISA病毒抗原检测方法。以I型肾综合征出血热疫苗标准品作为定量标准,验证该方法的检测限、线性范围、特异性、准确度、精密度;对6批次I型肾综合征出血热灭活疫苗原液进行检测,初步验证该方法的适用性。结果 获得4株稳定分泌抗HTNV PS-6特异性抗体的阳性杂交瘤细胞株：4B2、3H8、5D7及2A7;间接ELISA检测腹水抗体效价均在1×10⁶～1×106～1×10⁷;Western blot鉴定4株mAb均能特异性识别HTNV PS-6;相对亲和力为4B2>5D7>3H8>2A7;抗体ELISA配对筛选后,选用5D7作为包被抗体,4B2作为标记抗体,包被抗体工作浓度为10μg/mL,HRP标记抗体工作浓度为1∶5 000。该方法对HTNV PS-6抗原检测限为0.039 1μg/mL;检测线性范围为0.078 1～2.500 0μg/mL,R7;Western blot鉴定4株mAb均能特异性识别HTNV PS-6;相对亲和力为4B2>5D7>3H8>2A7;抗体ELISA配对筛选后,选用5D7作为包被抗体,4B2作为标记抗体,包被抗体工作浓度为10μg/mL,HRP标记抗体工作浓度为1∶5 000。该方法对HTNV PS-6抗原检测限为0.039 1μg/mL;检测线性范围为0.078 1～2.500 0μg/mL,R²> 0.97;检测与I型肾综合征出血热疫苗生产主要原辅料成分、II型肾综合征出血热疫苗、森林脑炎疫苗及甲肝疫苗均无交叉反应;准确度验证,病毒抗原回收率在95.8%～110.5%之间;试验内和试验间精密度,CV分别在6.72%～8.03%、8.24%～9.70%之间。用该方法检测6批次I型肾综合征出血热灭活疫苗原液,结果均呈剂量依赖性。结论 成功制备HTNV PS-6株mAb,建立病毒抗原双抗体夹心ELISA抗原检测方法,方法准确、可靠,可初步应用于I型肾综合征出血热灭活疫苗科研、生产过程病毒抗原检测。     

人C-反应蛋白磁微粒化学发光酶免疫测定法的建立

人C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP)是炎症以及各种相关疾病如病毒感染、心血管疾病等诊断、治疗和预后的临床检测指标。为了建立一种快速、准确的CRP定量免疫测定方法,将表达纯化的重组CRP作为抗原免疫小鼠,获得了5株稳定分泌抗体的单克隆抗体细胞株,采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay, DAS-ELISA)初步鉴定筛选的抗人CRP单克隆抗体,并分别选择m Ab 9D6和m Ab 9G4作为捕获抗体与检测抗体,建立用于人CRP检测的化学发光酶免疫测定法(chemiluminescence enzyme immunoassay, CLEIA),最后通过测定分析临床血清CRP样本,评价CLEIA的性能。结果显示,基于9D6/9G4-AP单克隆抗体对的CLEIA测定范围为0.176 7～500μg/L (可扩展至100 mg/L);所建立的CLEIA与医院采用的免疫散射比浊法(R2:0.949 6, P<0.000 1)表现出良好的相关性,且Bland...     

PTH单克隆抗体的制备与初步应用

甲状旁腺激素(parathyroid hormone, PTH)是一种只有84个氨基酸(amino acid, aa)的直链多肽激素,是调节钙磷代谢的主要激素之一。临床上通过测定PTH来评估骨转换、肾脏疾病以及血液透析患者的预后。本研究旨在通过制备抗PTH的单克隆抗体建立一种快速检测PTH的方法。首先,以化学合成法合成PTH多肽并将多肽偶联至血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)上,通过皮下注射的方式免疫BALB/c小鼠。其次,经过细胞融合以及杂交瘤细胞的筛选,共获得5株稳定分泌抗PTH的单克隆抗体,并对其进行了制备和纯化。再次,采用方阵棋盘滴定法进行抗体配对筛选,并以9B6和22E8抗体分别作为捕获抗体与酶标抗体,建立了检测PTH的双抗体夹心酶联免疫吸附测定(double-antibody sandwich enzyme linked immunosorbent assay, dsELISA)方法。最后,在保证灵敏度的情况下对所建立的方法进行了工作浓度的优化,该方法的检测灵敏度可达0.14ng/mL;在0.5～8.0 ng/mL的范围内,其R2达到了...     

ROS介导IL-17A诱导的TF表达或有助于治疗TF相关的肝硬化

为了评估白细胞介素IL-17A对肝硬化组织中内皮细胞(endothelial cells, EC)组织因子(tissue factor, TF)表达的调节作用,本研究选择50例肝硬化患者(肝硬化组)和9例创伤性脾破裂患者(对照组)作为研究对象,通过检测两组脾静脉内皮上的TF表达和血清IL-17A水平,以及IL-17A诱导后人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)中的TF表达和活性。另外,考察活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)对肝硬化患者血清中内皮细胞TF表达和活性的影响。研究显示,肝硬化组的脾静脉内皮上的TF表达显著高于对照组,与对照组(24.65±4.02) pg/m L相比,肝硬化组IL-17A水平显著升高(46.78±7.68) pg/mL。用不同浓度和时间的IL-17A诱导HUVEC,可导致TF表达和活性呈浓度和时间依赖性升高。IL-17A (100 ng/mL)处理可诱导HUVEC中活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)水平逐渐升高,6 h以后逐渐降低。使用10 mmol/L NAC (ROS清除剂)和2 mg/mL IL-17受体C抗体(Interleukin-17 receptor A, anti-IL-17RA)预处理HUVEC 2h,可抑制TF表达和活性。添加人IL-17抗体(1μg/mL)和NAC (10 mmol/L)的两组血清TF表达和活性显著降低。另外,对照组血清中IL-17A的添加量达到80 pg/mL时,TF活性及表达水平与肝硬化组一致。本研究初步结论表明IL-17A诱导的TF表达通过活化ROS介导,靶向IL-17A和ROS信号通路可能有助于治疗与TF相关的肝硬化。     

单克隆抗体夹心ELISA检测SARS病毒抗原的研究

目的:建立单克隆抗体(McAb)夹心ELISA法,用于检测SARS病毒(SARS-CoV)抗原。方法:用间接夹心ELISA法筛选捕捉和标记用单克隆抗体的组合,采用过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶(HRP),优化后用于检测SARS-CoV。结果:从12株抗SARS-CoV鼠单克隆抗体中筛选出2A3/1C5组合用于捕捉SARS-CoV,1A5/1B4组合标记HRP作为指示抗体。优化后2A3/1C5的最适工作浓度为1∶4000,HRP-1A5/1B4的最适工作浓度为1∶2000。本方法检测SARS-CoV的敏感度为105pfu/mL。结论:单克隆抗体夹心ELISA法可特异性检测SARS-CoV抗原。     

2019年河南省健康人群流行性脑脊髓膜炎A群、C群抗体水平监测

目的了解2019年河南省健康人群流行性脑脊髓膜炎(epidemic cerebrospinal meningitis,简称流脑)A群、C群抗体水平状况,为科学制定防控策略提供依据。方法采用分层随机抽样的方法采集健康人群血清,用间接ELISA检测流脑A群、C群抗体浓度。结果共检测1 689份健康人群血清标本,其中流脑A群抗体阳性率为54.23%,抗体质量浓度中位数为2.18μg/mL;流脑C群抗体阳性率为51.51%,抗体质量浓度中位数为2.07μg/mL。不同地区之间流脑A群、C群抗体水平的差异、阳性率的差异均有统计学意义(P<0.05)。不同年龄组之间流脑A群、C群抗体水平的差异、阳性率的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论河南省健康人群流脑A群、C群抗体水平和阳性率都比较低,有发生流脑暴发和流行的血清学基础,应加强流脑监测和预防接种的管理工作。     

蔓三七叶中分离绿原酸和异绿原酸及其抗氧化活性研究

以蔓三七叶为原料,制备其中的绿原酸和异绿原酸A、B和C,并对它们进行结构鉴定;同时,采用DPPH法、水杨酸比色法、邻苯三酚自氧化法来对其进行体外抗氧化活性研究。结果表明,分离制备的绿原酸和异绿原酸A、B和C质量分数分别为96. 8%、98. 2%、97. 6%和98. 7%。在0. 5～10μg/mL范围内,绿原酸和异绿原酸A、B和C对DPPH和羟基自由基表现出了较好的清除作用,随浓度升高而逐渐增大;但它们对超氧自由基的清除作用时,浓度从5μg/mL升高到100μg/mL时,清除作用都未出现明显的剂量依赖性,各样品与阳性对照组(VC)相比较而言,其清除超氧自由基的作用明显较弱。本文揭示了蔓三七叶中的绿原酸和异绿原酸A、B和C具有不同的抗氧化效果。     

MiniSOG蛋白的单克隆抗体制备及初步研究

单线态氧产生者(mini singlet oxygen generator,miniSOG)是改造于拟南芥向光素2蛋白而获得的小分子荧光黄素蛋白,由106个氨基酸残基组成。miniSOG被广泛用于电镜及荧光显微镜,并被广泛用于发色团辅助的光灭活(Chromophore-assisted light inactivation,CALI)蛋白、DNA或RNA,并结合免疫光敏用于癌症的治疗,以及结合细胞消融用于神经科学、免疫生物学等。但是目前国内并无商品化的miniSOG抗体,为了辅助课题研究,制备抗miniSOG蛋白的单克隆抗体,本研究根据miniSOG基因的ORF区序列构建miniSOG-GST重组蛋白的原核表达载体PGEX-4T-1-miniSOG,然后将该重组质粒转化于BL21感受态大肠杆菌中,异丙基硫代半乳糖苷(Isopropylβ-DThiogalactoside,IPTG)诱导融合蛋白的表达,并经亲和层析方法进行纯化。将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体。筛选获得稳定分泌抗miniSOG的单克隆抗体细胞株,最终选取性能最优的4F9细胞株进行小鼠腹水制备并纯化。单抗4F9亚型为IgG1/Kappa,腹水滴度达到1∶200 000,纯化抗体灵敏度达到5 ng/mL。并通过Western Blot、免疫荧光及免疫组化方法进行特异性鉴定,该单克隆抗体能特异性识别转染细胞和转基因小鼠脑组织中的miniSOG蛋白。本研究在国内首次制备了miniSOG单克隆抗体,将丰富其在其它方面的应用。     

33株抗心肌肌钙蛋白T (cTnT) 的单克隆抗体制备、鉴定及应用

旨在制备抗心肌肌钙蛋白T(cTnT)的单克隆抗体(m Ab),对单抗进行初步评价鉴定,并建立(cTnT)的化学发光定量检测试剂。首先利用外购的cTnT抗原免疫BALB/c小鼠,利用常规m Ab制备技术和间接ELISA法筛选m Ab,以表达和合成的cTnT片段对筛选到的m Ab进行表位鉴定。使用双抗体夹心ELISA方法筛选检测cTnT抗原的配对m Ab,并建立cTnT全自动化学发光定量检测试剂。使用220例临床标本评价该试剂与罗氏试剂的检测一致性,另外使用238例临床样本和784例体检人群样本评价该试剂的临床应用。我们成功筛选到33株稳定分泌抗cTnT抗体的杂交瘤细胞株,并对单抗的表位进行初步鉴定。我们筛选到能检测10 pg/m L cTnT抗原的配对m Ab E16H8和C8G11,并使用该配对研制出全自动化学发光定量试剂。该试剂与罗氏试剂相关系数r达到0.959 9,检测一致率95%,利用该试剂盒检测临床样本灵敏度为97.5%,特异性为99.15%,99%体检人群的cTnT浓度分布小于0.080 6 ng/m L,符合WHO对急性心肌梗死的定义标准。综上,初步建立了cTnT诊断优势表位单抗,并利用这些优势表位的单抗建立全自动管式化学发光定量检测试剂,与罗氏试剂检测结果符合率高。     

抗发热伴血小板减少综合征病毒结构蛋白单克隆抗体的制备和功能分析

为制备抗发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)结构蛋白的单克隆抗体,本研究用灭活纯化的SFTSV病毒颗粒免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得分别分泌抗糖蛋白单抗和核蛋白单抗的杂交瘤细胞株。用免疫荧光法和免疫沉淀方法对制备的单克隆抗体的抗原特异性进行鉴定,并初步进行单抗效价、中和活性及亲和力等功能分析。结果显示,通过细胞融合和克隆化,共筛选出13株稳定分泌抗糖蛋白(Glycoprotein,GP)单抗和7株稳定分泌抗核蛋白(Nucleoprotein,NP)单抗的杂交瘤细胞株。免疫荧光和免疫沉淀鉴定显示获得的单抗有良好的抗原特异性。抗GP单抗中6株针对Gn,7株针对Gc,大部分的间接免疫荧光(Indirect immunofluorescence assay,IFA)滴度在1 280~20 480之间,其中4株抗Gn单抗具有中和活性。获得的7株抗NP单抗均与NP特异性结合,IFA滴度范围在5 120~20 480,均无中和活性。此外,经非竞争ELISA检测的两株抗GP单抗(1C8和1G8)均有较高亲和力。本研究为SFTS诊断方法的发展及SFTSV致病机制研究奠定了基础。     

基于GII.4型诺如病毒P蛋白的GII型广谱单克隆抗体制备及应用

人源诺如病毒(Human noroviruses,HuNoVs)是全球引起急性胃肠炎的重要传染病原.该病毒遗传多样性丰富,包括了5个基因群以及39种基因型,免疫学检测受限.因此,本研究旨在制备广谱性的HuNoV单克隆抗体,并建立可检测多种基因型的双抗体夹心ELISA方法.本研究通过表达纯化流行毒株GII.4型HuNoVs衣壳蛋白P颗粒免疫Balb/c小鼠,筛选出3株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体并进行评价.利用辣根过氧化物酶对抗体进行标记及配对筛选,建立了HuNoVs双抗夹心ELISA检测方法,并进行验证.结果 显示:BI0、1D6、1C1细胞株可分泌广谱性单克隆抗体.所建立的双抗夹心ELISA方法酶标抗体最佳工作浓度为1∶5000,捕获抗体最佳包被浓度为2.0μg/mL,该方法检测GII.4型P颗粒最低检出限为125.0ng/mL,对常见HuNoVsGII.2、GII.3、GII.4、GII.6、GII.17基因型样本均能检出,而与轮状病毒、星状病毒、肠道病毒、札幌病毒无交叉反应.批间与批内重复变异系数均小于7％.临床样本检测结果显示,本方法与荧光定量RT-PCR结果的符合率为84％.本研究成功制备了广谱性的HuNoVs衣壳蛋白单克隆抗体,建立了可应用于HuNoVs流行毒株基因型的双抗夹心ELISA检测方法,为HuNoVs的诊断及流行病学调查提供了一种简便、特异的免疫学方法.     

牦牛B细胞淋巴瘤2相关蛋白A1的原核表达及体外活性

为研究牦牛(Bos grunniens) B细胞淋巴瘤2相关蛋白A1(B cell lymphoma 2 related protein A1,BCL2A1)的原核表达及体外活性。采用原核表达载体构建、细胞划痕实验、CCK-8法、透射电镜和实时荧光定量PCR等方法。结果显示,成功构建pET-32a-BCL2A1重组质粒,表达获得约33kDa的BCL2A1。终浓度为0.02μg/mL、0.2μg/mL、2.0μg/mL的BCL2A1均能使HepG2细胞活性显著降低(P < 0.05),并在一定程度上抑制细胞的迁移。2.0μg/mL BCL2A1导致HepG2细胞核固缩,胞质中高密度物质聚集,溶酶体吞噬形成致密的凋亡小体等。此外,细胞凋亡相关基因CASP9的mRNA水平在2.0 μg/mL组中显著上调(P < 0.05),CASP8的mRNA水平在0.2 μg/mL和2.0 μg/mL组中显著上调(P < 0.05),而CASP3和Cyt c的mRNA水平在3个浓度处理组均显著上调(P < 0.05)。这提示BCL2A1可能通过凋亡途径影响HepG2细胞活性,为进一步探索牦牛BCL2A1基因功能积累资料。     

AAV介导的H7N9单克隆抗体在体内高效表达

2013年,我国安徽、上海两地暴发了甲型流感病毒H7N9感染,造成了巨大的生命财产损失。至今仍无可用H7N9疫苗上市。近来,研究人员鉴定了多株H7N9中和抗体。但由于抗体在体内半衰期较短,限制了其作为长效预防手段控制H7N9感染的作用。AAV(Adeno-associated virus)作为基因治疗载体,具有低免疫原性的特征,并可介导外源基因在体内长期稳定表达。本实验中,我们利用重组AAV介导H7N9的两种单克隆中和抗体HNIgGD5和HNIgGH8在体内长期高水平表达以预防H7N9的感染。结果显示,我们所构建的重组AAV-抗体表达系统可以在细胞水平和实验动物体内介导病毒中和抗体高水平表达。其中在小鼠体内HNIgGD5表达量达到199.9μg/mL,HNIgGH8高达430.9μg/mL。这将为利用中和抗体预防H7N9感染提供新策略。尤其是对于疫苗非适用人群,如免疫缺陷患者、老人、儿童和孕妇等预防流感入侵具有重要意义。     

肠道病毒68型新型中和试验方法的建立及其初步应用

针对肠道病毒68型(EV-D68)建立一种新型快速、高效的中和试验方法,并初步评价其在EV-D68流行病学研究中的应用价值。以灭活EV-D68病毒免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤技术制备其单克隆抗体;筛选反应性好、特异性强的抗EV-D68单克隆抗体作为检测抗体,基于酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT)建立EV-D68高效中和试验方法;进一步比较该方法与传统中和试验方法 Nt-CPE的一致性,并使用该方法对临床血清样本进行检测。共获得10株分泌抗EV-D68单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取一株性能最优的15C5进行生产纯化,鉴定其为IgG3亚型;以15C5为检测抗体,建立了快速检测EV-D68中和抗体的Nt-ELISPOT方法;与Nt-CPE方法比较,Nt-ELISPOT方法将检测时间由5~7d缩短至1d以内,并且两种方法检测结果一致性良好;应用所建立的Nt-ELISPOT方法对厦门地区146份人群血清样本进行检测,显示血清样本EV-D68中和抗体阳性率为98.6%(144/146),提示厦门地区可能存在过EV-D68的流行。本研究基于ELISPOT建立的新型EV-D68中和试验方法快速可靠,适合通量检测,可以应用于EV-D68中和抗体水平的血清学调查,为EV-D68感染的防控工作提供帮助。     

噬菌体展示抗克伦特罗抗体文库的构建及单克隆抗体的筛选

利用小白鼠免疫和噬菌体展示技术构建了噬菌体展示抗体文库,从文库中筛选获得了一株抗克伦特罗单克隆抗体。该抗体的氨基酸序列尚未在世界基因数据库中登录,是一个新的抗体。该抗体对于游离克伦特罗的半抑制率IC50为0.602μg/mL。该噬菌体展示的抗体片段可以用于竞争法检测克伦特罗的含量,其能够检测出的最低浓度为15.6 ng/mL,具有较大的实用价值。     

盐酸胍对口蹄疫病毒完整颗粒和空衣壳的影响

在口蹄疫病毒的复制过程中，会形成完整的病毒粒子（146S）和一定量的空衣壳（75S）。本试验研究了盐酸胍在不同时间和浓度下对口蹄疫病毒146S和75S的影响，并筛选出75S产量最高的条件。通过蔗糖密度梯度离心、透射电镜、特异性单域抗体包被的双抗夹心ELISA等方法对75S和146S进行定性和定量检测。结果表明在口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus,FMDV）感染BHK-21细胞2 h时，加入4 mmol/mL的盐酸胍，75S产量比同时间下加入盐酸胍浓度为2 mmol/mL和8 mmol/mL时得到的75S含量高两倍，约为146S的三倍。本研究为定量口蹄疫病毒75S形态的免疫学方法建立奠定了前期研究基础。     

B型肉毒毒素单克隆抗体的制备及其检测试剂盒的研制

目的 建立B型肉毒毒素(botulinum toxin B, BoNT/B)快速检测方法,研制B型肉毒毒素酶联免疫吸附测定(ELISA)检测试剂盒。方法 以B型肉毒类毒素为抗原免疫小鼠,用杂交瘤技术获得鼠源单克隆抗体(单抗),体内法扩大制备单抗。间接ELISA测定杂交瘤细胞株分泌单抗的稳定性、腹水效价以及单抗的亚型、理化性质和抗原识别表位。过碘酸钠法对抗原表位差异较大的抗体进行HRP标记,筛选最佳包被抗体和标记抗体,并确定包被抗体包被浓度和标记抗体工作浓度。将其配制成试剂盒,对试剂盒的线性、定量限、准确度和重复性等进行研究。结果 筛选、鉴定8株能稳定分泌B型肉毒毒素特异性单抗的杂交瘤细胞株。8株单抗腹水效价1∶32 000～1∶512 000,重链为IgG类、轻链为κ型,均耐碱、耐热,不耐酸,其中4C11、4D7、7F9和8D2 4株单抗抗原表位差异较大。以4D7为包被抗体、8D2为标记抗体配制试剂盒,B型肉毒毒素滴度在2～32 LD₅₀/mL范围内呈现良好的线性(r=0.996),定量限为0.96 LD₅₀/mL,试剂盒2～8℃有效期为12...     

基于垂直流向纸基微流控芯片检测人尿液中IgG蛋白

肾脏是人体最重要的器官,可以通过检测尿液中的蛋白成分来诊断某些疾病。尿液中IgG蛋白的含量可以用来判断肾功能受损伤程度。本研究采用垂直流向的纸基微流控芯片,利用双抗夹心免疫反应显色,手机拍摄图像处理的方法对人尿液中IgG蛋白进行了检测。结果表明,在IgG抗体浓度为500μg/mL,金标抗体浓度为100μg/mL的条件下图像信号在IgG浓度为0.2–3.2μg/mL范围内具有良好的线性关系,R²=0.973 3。设计了一套完整的检测装置,并且该检测方法具有良好的非特异性。