迁移体相关基因在人肝癌发展过程中的作用机制研究

迁移体(migrasome)是由迁移细胞产生的细胞器,在胚胎发育、机体免疫反应和肿瘤转移等细胞生物学行为过程中发挥信号转导作用,然而其在人(Homo sapiens)肝癌中的作用尚不清楚。为了探究迁移体相关基因对肝癌患者恶性进展及临床预后的影响,利用TCGA数据库分析迁移体相关标志基因TSPAN4、TSPAN7、KIF5B、MYO19、DNM1L mRNA表达水平;绘制Kaplan-Meier曲线分析上述基因对肝癌患者临床预后的影响;利用临床生信之家(assistant for clinical bioinformatics,ACLBI)网站进行GO和KEGG富集分析;运用STRING数据库平台及Cytoscape软件开展蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络分析。在人肝癌细胞SMMC7721、 Huh7中转染合成siRNA,用CCK8法评估转染TSPAN4后细胞增殖能力的改变;利用免疫荧光染色法检测细胞中TSPAN4蛋白的表达分布;利用碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染法检测细胞周期分布;利用划痕伤口愈合实验和Tran...     

KMT6在肝癌细胞转移中的作用及对肝癌预后的影响

目的:探讨组蛋白赖氨酸甲基转移酶6(histone lysine methyltransferase 6,KMT6)对人肝癌细胞转移的调控作用及对肝癌患者预后的影响。方法:采用RNA干涉技术合成靶向KMT6的小干扰RNA(KMT6 siRNA)片段,瞬时转染至人肝癌细胞系Huh-7。随后,分别采用细胞黏附实验、细胞侵袭实验以及划痕迁移实验检测肝癌细胞的黏附、侵袭和迁移等肿瘤细胞转移能力。运用Oncomine数据库和cBioportal肝癌数据库分析KMT6的表达情况及对肝癌预后的影响。结果:靶向KMT6的小干扰RNA(KMT6 siRNA)片段瞬时转染至人肝癌细胞系Huh-7后,KMT6蛋白的表达显著下降,且黏附率、侵袭率和划痕修复率均显著降低(P<0.05)。Oncomine肝癌数据库分析表明肝癌组织KMT6的表达增加,cBioportal肝癌数据库分析表明KMT6基因改变与肝癌患者预后不良密切相关。结论:KMT6分子可促进肝癌细胞黏附、侵袭和迁移,其基因改变与肝癌患者预后不良显著相关。KMT6分子有望成为肝癌治疗的新靶点。     

乳链菌肽作用机制及其应用

乳链菌肽作为高效、安全的天然食品防腐剂已得到广泛应用。成熟的乳链菌肽含有34个氨基酸残基,由5个硫醚桥组成独特的内环结构,是研究蛋白质结构与功能的一个很好的材料。本文论述了乳链菌肽的分子结构及其与细胞膜作用的分子机制,详细阐述了乳链菌肽的作用模型。     

乙型肝炎、肝硬变和肝癌中HBxAg的表达及其在肝癌发生中的作用

对３７９例良、恶性肝组织进行的免疫组织化学研究显示,３３％的慢性迁延性肝炎（６／１８）、７６％的慢性活动性肝炎（２６／３４）、９２％的肝硬变（５７／６２）和９７％的肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）（５８／６０）中有ＨＢｘＡｇ表达,阳性率高于ＨＢｓＡｇ或ＨＢｃＡｇ。癌周肝中的ＨＢｘＡｇ阳性率显著高于非癌周肝。与其它２种ＨＢＶ抗原不同,ＨＢｘＡｇ表达在细胞类型上有较明显的选择性,在肝小多角细胞（ＳＰＬＣ）、小细胞性不典型增生（ＳＣＤ）及ＨＣＣ中较强。与ＩＧＦⅡ、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｃ－ｍｙｃ和ＥＧＦ－Ｒ表达进行的对照研究表明ＨＢｘＡｇ与ＩＧＦⅡ和ｃ－ｅｒｂＢ－２这２种ＨＣＣ发生相关基因的表达关系密切。ＰＣＮＡ染色结果显示ＨＢｘＡｇ阳性组织的细胞增殖活性显著高于ＨＢｘＡｇ阴性组织。我们的结果还表明ＨＢｘＡｇ表达与肝细胞不典型增生的发生和进展有关、提出ＨＢＶＸ基因可能通过其表达产物（ＨＢｘＡｇ）首先激活ＩＧＦⅡ、ｃ－ｅｒｂＢ－２基因,继而引起显著的ＳＰＬＣ增生和ＳＣＤ而参与ＨＣＣ发生的．     

基于网络药理学和分子对接探讨黄芪抗肝癌的作用机制研究

基于网络药理学及分子对接探讨黄芪抗肝癌的活性成分与分子作用机制.通过TCMSP数据库获取黄芪活性成分,Swiss Target Prediction预测成分靶点,采用Genecards数据库与OMIM数据库搜集肝癌靶点,Venny相映射黄芪抗肝癌的作用靶点,String数据库结合Cytoscape 3.7.2软件绘制肝...     

miR-224在原发性肝癌患者血清中的表达及意义

目的：原发性肝癌（primary hepatocellular carcinoma,PHC）作为常见的恶性程度极高的肿瘤,严重威胁着人类的生命。miR-224是近年来发现的一个肿瘤相关miRNA分子,在肿瘤的发生及发展过程中发挥着重要的作用。本研究通过测定原发性肝癌患者血清中miR-224的表达水平,探讨血清miR．224与原发性肝癌预后的关系。方法：采用实时荧光定量RT-PCR（Real-timeRT．PCR）方法。分别检测40例原发性肝癌患者,20例慢性肝炎患者,20例慢性肝硬化患者及20例正常人的血清标本中miR-224的表达水平。分析血清miR-224的表达水平与AFP和MMP-9的相关性。结果：原发性肝癌患者血清miR-224的表达水平明显高于正常人、慢性肝炎和慢性肝硬化患者（P〈0．05）。皮尔森相关分析结果显示原发性肝癌患者血清miR-224的表达与AFP和MMP．9呈正相关。血清miR-224低表达组术后复发／转移率显著低于高表达组,术后生存率则高于高表达组（P〈0．01）。结论：miR-224在原发性肝癌患者的血清中呈高表达,其血清表达水平与原发性肝癌的临床预后密切相关。这提示我们,miR-224可能成为新的原发性肝癌检测标记物和潜在的原发性肝癌预后分子标志物。     

miR-224 在原发性肝癌患者血清中的表达及意义

目的：原发性肝癌(primary hepatocellular carcinoma, PHC) 作为常见的恶性程度极高的肿瘤,严重威胁着人类的生命。 miR-224 是近年来发现的一个肿瘤相关miRNA 分子,在肿瘤的发生及发展过程中发挥着重要的作用。本研究通过测定原发性肝 癌患者血清中miR-224 的表达水平,探讨血清miR-224 与原发性肝癌预后的关系。方法：采用实时荧光定量RT-PCR (Real-time RT-PCR)方法,分别检测40 例原发性肝癌患者,20例慢性肝炎患者,20 例慢性肝硬化患者及20 例正常人的血清标本中miR-224 的表达水平。分析血清miR-224 的表达水平与AFP和MMP-9的相关性。结果：原发性肝癌患者血清miR-224 的表达水平明显高 于正常人、慢性肝炎和慢性肝硬化患者(P<0.05)。皮尔森相关分析结果显示原发性肝癌患者血清miR-224 的表达与AFP 和 MMP-9 呈正相关。血清miR-224 低表达组术后复发/转移率显著低于高表达组,术后生存率则高于高表达组(P<0.01)。结论： miR-224 在原发性肝癌患者的血清中呈高表达,其血清表达水平与原发性肝癌的临床预后密切相关。这提示我们,miR-224 可能 成为新的原发性肝癌检测标记物和潜在的原发性肝癌预后分子标志物。     

MiR-22与其靶基因在肝癌中的作用和机制

肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最具侵袭性的癌症之一,目前仍缺乏有效的治疗方法.MiR-22是肝癌发展过程中的肿瘤抑制因子,在肝癌组织中表达水平下调.MiR-22通过调控靶基因的表达以参与肝癌细胞的增殖、凋亡、浸润、转移以及免疫反应等一系列生理过程,发挥抑癌作用.MiR-22既可以作为...     

NKT细胞在抗肿瘤免疫中的作用及其机制

NKT细胞是免疫细胞中一类具有NK细胞特定标志的T细胞亚群,经活化,既可直接作为抗肿瘤效应细胞发挥杀伤作用,又能通过激活其他免疫效应细胞,如NK细胞,间接实现抗肿瘤作用。NKT细胞在抗肿瘤免疫、获得性免疫应答及免疫调节中起着重要作用。     

miRNAs在肝癌干细胞中的作用

MicroRNAs (miRNAs)是一类参与转录后调控的小分子RNA,它在调控细胞的增殖、分化及肿瘤的形成等多种生理及病理过程中发挥着重要的作用.肝癌干细胞是肝癌组织中具有自我更新能力和分化潜能的一个微群体,它能够启始肝癌的发生,并且与肝癌的抗药性及复发等密切相关.已经有研究表明miRNAs对肝癌干细胞的发生发展起着重要的调控作用,包括致癌和抑癌的作用,因此总结miRNAs在肝癌干细胞中作用,有助于更好理解肝癌干细胞的特性及肝癌肿瘤生物学.近年来,除了传统的分子生物学手段,组学和系统生物学研究策略的运用也为miRNAs在肝癌中的研究提供了新的思路.鉴于此,深入研究miRNAs在肝癌干细胞中的分子机制,将为靶向肝癌干细胞的临床治疗提供新的途径.     

基于生物信息学分析miRNA-195-5p在肝癌中的表达及其临床意义

为了研究miRNA-195-5p在肝癌(liver hepatocellular carcinoma, LIHC)中的表达及对预后的影响,并对其潜在靶基因进行生物学信息学分析,评估miRNA-195-5p在LIHC中的临床意义和诊断价值,本文利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析miRNA-195-5p在肝癌组织中的表达;利用Kaplan-Meier plotter数据库分析miRNA-195与肝癌患者预后的相关性;利用miRWalk 2.0数据库获取预测的与实验数据支持的miRNA-195-5p的靶基因,同时采用DAVID 6.8数据库对靶基因进行GO和KEGG富集分析,以Cytoscape 3.6.1软件构建靶基因蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络并筛选PPI网络中的核心基因;通过公开访问的数据库进一步验证筛选出的核心基因。TCGA数据库分析结果显示, miRNA-195-5p在肝癌组织中的表达水平显著低于正常组织。Kaplan-Meier生存分析显示, miRNA-195低表达LIHC患者的总生存时间明显低于高表达患者。GO分析显示,miRNA-195-5p的靶基因主要显著富集到蛋白质磷酸化、RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调节、RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的负调节等生物学过程。KEGG分析显示, miRNA-195-5p的靶基因显著富集于癌症相关通路。miRNA-195-5p潜在靶基因所编码蛋白质之间存在复杂的相互作用,其中POLR2A、MIB1、MAPK3、ACACA、ASH1L以及MAP3K3是PPI网络中的核心基因。6个核心基因中,仅MAPK3的蛋白质与m RNA表达水平在LIHC组织中均显著上调。Kaplan-Meier生存分析进一步显示, MAPK3 m RNA水平升高预示LIHC患者总生存时间缩短。以上生物信息学分析结果初步表明, miRNA-195-5p表达下调在肝癌相关的生物学过程中起到重要调控作用,可能与其潜在靶基因MAPK3表达上调有关,这为肝癌的生物标志物研究提供了线索。     

甲胎蛋白异质体在原发性肝癌患者血清中的表达

为了揭示原发性肝癌患者血清中甲胎蛋白异质体(AFP-L3)的表达及意义,本研究选取2014年2月至2016年3月在本院治疗的原发性肝癌患者80例,同时选取肝硬化患者60例,慢性乙肝患者60例及健康志愿者60例,采用亲和吸附离心管法检测不同受试者血清中AFP-L3水平。研究显示,原发性肝癌患者的血清AFP-L3 (122.13 ng/mL)水平显著低于肝硬化患者,并且显著高于慢性乙肝患者和健康者,差异具有统计学意义(p0.05);原发性肝癌患者中,血清AFP-L3水平在肿瘤大小≤3 cm (171.14 ng/mL)和TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期(147.53 ng/mL)患者中显著高于肿瘤大小3 cm和TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期患者(p0.05);血清AFP-L3高表达(≥122.13 ng/mL)的肝癌患者中位生存时间(22.76月)与血清AFP-L3低表达的肝癌患者(122.13 ng/mL)(22.04月)差异不显著(p0.05)。本项研究表明原发性肝癌患者血清中AFP-L3水平明显上升,并且与患者的肿瘤大小和TNM分期具有相关性。     

血清AFP、CEA与肝癌患者临床病理分期和预后的关系及其诊断价值分析

目的:探讨血清甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)与肝癌患者临床病理分期和预后的关系及其诊断价值。方法:选取2010年3月至2014年4月期间我院就诊的90例肝癌患者作为肝癌组,并选择同期在我院进行体检的90例健康体检者作为健康组。统计两组的血清AFP、CEA水平及阳性率,比较不同TNM分期肝癌患者的血清AFP和CEA水平。分析肝癌患者的5年无复发生存率以及血清AFP和CEA水平对肝癌的诊断价值。结果:与健康组相比,肝癌组血清AFP、CEA水平及阳性率明显升高(P0.05)。Ⅳ期血清AFP和CEA水平最高,其次Ⅲ期,Ⅱ期次之,Ⅰ期最低(P0.05)。血清AFP、CEA阳性患者5年无复发生存率明显低于血清AFP、CEA阴性患者(P0.05),血清AFP、CEA联合诊断具有较高的敏感性和特异性。结论:肝癌患者的血清AFP和CEA水平升高,并随TNM分期增加而上调。血清AFP阳性以及CEA阳性患者的5年无复发生存率明显下降,血清AFP联合血清CEA检测在肝癌诊断中具有一定的临床价值。     

OsRboh基因家族在水稻免疫应答中的表达及功能分析

为了阐明Rboh基因家族在水稻免疫应答中的功能,首先利用生物信息学方法从水稻基因组数据库中检索到7个水稻Rboh基因,并对其进行系统发育学和组织特异性表达分析,发现OsRbohD只在穗和愈伤组织中表达,且OsRbohE和OsRbohF仅在愈伤组织中特异表达,而其他基因为组成型表达。利用Real-time PCR对分别在水杨酸SA、茉莉酸甲酯MeJA和水稻黄单胞菌PXO99致病菌株处理下的OsRboh基因家族的表达水平进行了分析,同时对处理后的叶片H2O2含量进行测定。结果表明,SA可以提高OsRbohA、OsRbohB、OsRbohC和OsRbohD的表达水平,MeJA可以提高OsRbohA、OsRbohB、OsRbohC和OsRbohG的表达水平,接种水稻黄单胞菌致病菌株PXO99可以提高OsRbohA和OsRbohB的表达水平。然而三者在诱导OsRboh基因家族成员的表达时序性和表达程度存在着差异。此外,3种不同处理都能导致不同程度的H2O2积累。结果显示,OsRboh基因家族各基因在水稻免疫应答中可能扮演不同角色,发挥不同作用。     

DUSP1在药物诱导的肝癌细胞衰老中的表达变化及其作用研究

目的:在肝癌的治疗中,化学疗法是重要的治疗手段,尤其在结合外科手术切除的联合治疗中,化疗被广泛的应用于临床。而体内试验证实,化疗药物诱导的细胞衰老在治疗肿瘤的过程中,普遍存在并发挥重要作用,我们着重探讨在药物诱导的人肝癌细胞衰老中,细胞内重要信号途径的变化,发现并利用对细胞衰老有重要意义的蛋白,增强化学治疗肿瘤的效果。在本课题中,我们利用化疗药物阿霉素(doxorubicin)和蛋白酶体抑制剂MG132诱导的人衰老肝癌细胞模型,对MAPK信号途径的负调控因子DUSP家族的表达变化进行检测,筛选表达水平发生显著变化的双特异性磷酸酶(DUSP)家族成员,并初步探讨其在细胞衰老中的作用。方法:利用低剂量的阿霉素和蛋白酶体抑制剂MG132诱导人肝癌细胞衰老;通过Real time RT-PCR和Western blotting检测DUSP家族基因mRNA和蛋白质水平的变化;利用siRNA干扰技术敲降DUSP1,检测药物诱导肝癌细胞衰老水平的变化。结果:经低剂量的阿霉素和蛋白酶体抑制剂短时间处理后,人肝癌细胞系Huh7和SMMC-7721细胞发生明显的细胞衰老;在诱导的衰老细胞中,DUSP1mRNA和蛋白质水平呈显著升高。在敲降DUSP1后,MG132诱导的细胞衰老得到显著的缓解。结论:DUSP1在药物诱导的人肝癌细胞衰老中具有重要的作用,为研究临床治疗中化疗药物引起肿瘤细胞衰老的具体机制带来启发。     

DEC1-mRNA在肝癌患者血清中的表达和手术预后的关系

目的:研究DEC1在肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者血清中的表达水平及其临床意义。方法:收集60例HCC患者,30例正常人,30例慢性肝炎患者,30例慢性肝硬化患者血清标本。采用实时荧光定量RT-PCR(RT-PCR)检测血清DEC1的表达情况。分析血清DEC1的表达水平与AFP相关性。探讨血清DEC1的表达水平与HCC手术预后的关系。结果:肝癌患者血清DEC1明显高于正常人、慢性肝炎和慢性肝硬化患者(P0.05)。皮尔森相关分析结果显示HCC患者血清DEC1的表达与血清AFP水平是呈正相关的。Kaplan-Meier结果显示血清DEC1低表达组术后的复发转移率显著低于高表达组,其术后生存率也显著高于高表达组(P0.01)。结论:DEC1在肝癌者血清中高表达,不仅可能成为HCC诊断的标记物,且其血清表达水平也有助于HCC临床预后的评估。     

糖基因ST6GAL家族在肝癌转移中的作用

目的通过研究糖基因ST6GAL家族在人肝癌高转移细胞株MHCC97-H和人肝癌低转移细胞株MHCC97-L中的差异表达,明确糖基因ST6GAL家族与肝癌转移的相关性,从而确证肝癌转移诊断及抗肿瘤治疗新靶点。方法采用Real-time PCR、Western Blot分析糖基因ST6GAL家族在人肝癌高、低转移细胞株的差异表达;通过RNA干扰技术干预差异表达的糖基因,检测干扰前后MHCC97-H细胞的体外侵袭能力及体内成瘤性。结果糖基因ST6GAL1在人肝癌高、低转移细胞株中表达差异具有统计学意义,而ST6GAL2的表达差异具无统计学意义;当通过RNA干扰技术特异性使MHCC97-H细胞中ST6GAL1表达下调时,该细胞在体外的侵袭能力下降及体内成瘤性受到抑制(P﹤0.05)。结论人肝癌细胞中糖基因ST6GAL1的差异表达与肿瘤细胞的侵袭、成瘤性密切相关,为肿瘤的化学治疗提供新靶点。