阿片肽对胰岛素释放的影响

阿片肽作为一类重要的神经活性物质发挥着许多生物学效应,近来已有研究证明类阿片物质有影响胰岛素释放的作用.胰岛素是由胰岛β细胞分泌的一种重要激素,它可以调节机体的血糖稳定.因此这些结果将可能为糖尿病治疗开辟新天地,但其具体作用机制目前尚不清楚.本文根据国内外研究成果及最新研究进展,主要介绍了阿片肽及其受体的生理功能,阿片受体介导的信号转导以及阿片肽对胰岛素释放的调节机制.     

阿片肽研究的回顾与展望

阿片肽研究已有２０多年历史,１９６２年中国学者提出脑内存在吗啡有效作用位点的创见。７０年代期间,先后发现各类阿片受体以及脑啡肽、β－内啡肽和强啡肽等阿片肽。９０年代初,各类阿片受体的基因 克隆成功,随后又发现了孤啡肽,当前阿片肽研究正在继续。阿片受体的基因剔除、计算机的模拟结构分析、阿片类物质的镇痛与成瘾机制、寻找新的阿片肽及受体的基因克隆等均在深入进行。     

孤啡肽——新发现的内阿片肽及其受体

孤啡肽是最近发现的一个１７肽,其结构与已知的内阿片肽,尤其是强啡肽Ａ类似;但具有明显不同的药理学特性;与经典的阿片受体结合能力很弱,而与阿片受体家族中的一个新成员－－“孤儿受体”结合能力很强,因而认为是该受体的天然配基,孤啡肽脑室注射可使小鼠痛觉过敏,运动减少。孤啡肽受体是阿片受体家族中的新成员,属于Ｇ蛋白偶联受体,与经典的阿片受体配基亲和力均很弱,该受体激活后介导对腺苷酸环化酶活力的抑制。     

阿片肽类物质对大鼠黄体细胞孕酮生成的影响

本文观察了外源性阿片肽对大鼠离体黄体细胞孕酮生成的影响,结果表明:β-内啡肽以剂量-反应依赖方式促进黄体细胞孕酮生成,有效浓度范围是10~(-8)-10~(-6) mol/L;强啡肽仅在浓度为10~(-6)mol/L时才显示刺激孕酮生成的作用;而甲硫-脑啡肽无明显作用。μ-阿片受体激动剂DAGO和乙基吗啡也能明显促进孕酮的生成。纳洛酮可完全阻断β-内啡肽,DAGO和乙基吗啡的作用。由于大鼠血液中β-内啡肽含量较低,而卵巢局部具有较高浓度的β-内啡肽。因此,我们认为,β-内啡肽可能在卵巢局部参与黄体细胞孕酮生成的调节,是卵巢内促黄体因子之一,这种作用可能是由μ-型阿片受体介导的。     

抗阿片肽血清对催产素增强电针镇痛的影响

本工作观察了大鼠侧脑室注射抗阿片肽血清对催产素增强电针镇痛作用的影响。脑室注射抗Beta-内啡肽血清(AEPS)使电针镇痛效应明显降低,但在注射催产素前预先注射AEPS对催产素增强电针镇痛作用无明显影响。注射抗强啡肽Al-13血清使电针镇痛明显降低,但却使催产素增强电针镇痛作用明显增强。无论抗甲-脑啡肽血清还是抗亮-脑啡肽血清对电针镇痛都无明显影响,对催产素增强电针镇痛的作用也不产生影响。上述结果说明,催产素增强电针镇痛的作用虽被脑内强啡肽Al-13部分对抗,但不受Beta-内啡肽和脑啡肽的影响,表明催产素增强针刺镇痛的作用不依赖于脑内内源性阿片肽系统。     

冬眠阵过程中黄鼠脑与血浆阿片肽含量的变化

利用放射免疫测定法,观测了自然冬眠阵过程的常温、入眠、深眠、激醒四个阶段中,达乌尔黄鼠不同脑区及血浆中β－内啡肽（β－ＥＰ）与甲啡肽（ＭＥＫ）的含量。结果表明：黄鼠下丘脑、垂体中的β－内啡肽在入眠过程中增多,在深眠状态下的含量又高于入眠期;海马、血浆中的β－内啡肽含量变动趋势正好相反,在入眠期与深眠期低于常温水平;桥延脑中含量在冬眠阵过程中变化不大。甲啡肽含量在入眠期升高,而在深眠期重新下降,不同     

血管紧张素II和阿片肽对Fos蛋白表达的影响

利用抗体免疫沉淀技术研究了血管紧张素ＩＩ,δ受体激动剂和ｋ受体激动剂对大鼠脑组织ｃ－ｆｏｓ原癌基因表达的影响,结果表明,０．１μｍｏｌ／Ｌ ＡⅡ可显著刺激脑组织中Ｆｏｓ蛋白的表达,０．１μｍｏｌ／ＬＤＰＤＰＥ和０．１μｍｏｌ／Ｌ ＮＤＡＰ对Ｆｏｓ蛋白的表达亦有一定的诱导作用。ＡＩＩ与ＤＰＤＰＥ或ＮＤＡＰ共同处理组织,Ｆｏｓ蛋白表达水平低于ＡＩＩ单独诱导的水平,结果表明阿片肽可抑制ＡＩＩ对Ｆｏｓ蛋白     

“内吗啡肽”的发现是阿片肽研究的一次突破

早在７０年代,人们即发现了内源性的δ阿片受体选择性配体（脑啡肽）和ｋ阿片受体选择性配体（强啡肽）,但一直未能找到内源性的μ阿片受体的选择性配体。１９９７年４月英国出版的“自然”杂志报道,发现了两种内源性的α阿片受体选择性配体,分别命名为ｅｎｄｏｍｏｒｐｈｉｎ－１（ＥＭ－１）和ｅｎｄｏｍｏｒｐｈｉｎ－２（ＥＭ－２）可译为“内吗啡肽”。本文拟就内吗啡肽的发现过程及其与其它内阿片肽的关系作一简要介绍。     

半导体激光针对中枢及外周内阿片肽神经递质的影响

本工作应用半导体激光６５０ｎｍ １０ｍＷ ＣＷ照射“扶突”穴，发现Ｌ－ＥＮＫ除在尾核区有非常显著的增加外，而在海马，丘脑，下丘脑则都有不同程度的下降，其显著性Ｐ值分别为Ｐ〈０．０５，Ｐ〈０；０１，Ｐ〈０．０１。在外周血浆中Ｌ－ＥＮＫ则亦有显著的增加。     

阿片肽对大鼠伏核神经元突触后电位的影响

行为学研究指出,伏核是阿片奖赏作用,和阿片成瘾的关键脑区域,为了在细胞水平上分析阿片作用机理,本文在大鼠伏核脑片制备上,应用细胞内电流箝记录,于不同神经元上分别观察三种阿片肽对膜电位和突触后电位的影响,研究结果表明：所试验的三种阿片肽均不影响神经元的膜电位和输入阻抗,却降低突触后电位;纳洛酮明显地翻转μ和δ受体激动剂的作用,对Ｋａｐｐａ受体激动剂作用翻转不完全。上述结果提示：在伏核内,阿片肽的作用     

淋巴细胞存在有δ阿片肽受体的分子证据

以小鼠的成神经细胞瘤和大鼠神经胶质瘤的杂交细胞δ阿片肽受体的基因外显子Ⅲ序列为依据合成引物,应用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增人外周血淋巴细胞ｍＲＮＡ的一片段ｃＤＮＡ,扩增产物经纯化后进行核苷酸序列测定．测序结果表明该片段与杂交瘤细胞的δ阿片肽受体基因序列相比有５个同源区,其中碱基的同源性达６３％．实验结果从分子水平表明了人淋巴细胞表面存在有阿片肽受体的可能性．     

阿片肽对骨髓未成熟B细胞的免疫学效应

 已经证明一些细胞象脾淋巴细胞、血T细胞、自然杀伤细胞和血小板存在有阿片受体。本文在骨髓细胞上的研究提示未成熟B细胞表面也存在有这类神经肽的受体,通过阿片肤类结合到细胞上可以观察到不同的效应。试验结果显示M-脑啡肽、L-脑啡肽和α-内啡肽对骨髓未成熟B细胞抗体生成反应的抑制分别为76.6％、68.6％和67.7％。相反,β-内啡肽增进抗体反应达78.0％。M-脑啡肽和两种内啡肽在未成熟B细胞上的效应能够被拮抗剂纳络酮所逆转,提示反应涉及阿片肽受体机制。     

一种新阿片肽的分离纯化

报道了一种新阿片肽OP1的分离纯化。将重组毕赤酵母经适宜的生长和表达培养后,所得的发酵液经离心得无细胞上清液,上清液经超滤后过Sephadex G-10柱。将经Sephadex G-10柱所得具有阿片活性的粗组分用HPLC-MS分析,根据阿片肽N-端均有一个酪氨酸残基,且在肽链的第三或第四位上有一个芳香族氨基酸残基这一性质,依据分子量确定活性组分中可能存在的所有阿片肽,然后根据这些阿片肽的等电点,利用AKTA Purifier 100快速纯化系统的DEAE-阴离子交换纤维素柱将其进一步分离,活性组分再用Sephasil peptide C18反相高压液相柱分离得到活性组分OP1肽,鉴定纯度后测定其氨基酸组成。最后确定该肽的一级序列为YPFPGPIRYG,该阿片肽序列目前尚未见报道。     

实验性癫痫时脑内c—fos基因与阿片肽及兴奋性氨基酸的关系

细胞癌基因也称原癌基因,其命名与被确定时所在的逆转录病毒和细胞的名称有关。c-fos是v-fos的相应细胞对应物,V-fos是FJB鼠骨瘤病毒中分离出来的,c-fos的蛋白产物与v-fos相似,仅在羧端有差异,c-fos基因正常情况下不会引起癌变,它与细胞生长、分化有关。近来一些实验进一步证明c-fos还与调节细胞功能有关,许多细胞外刺激能诱导c-fos转录增加,一些能激活钙通道的条件、药物,或神经递质如细胞外高钾、钙通道激活剂BAYK