影响冷冻切片质量因素的分析

冷冻切片 (frozensection)是在低温恒冷条件下 ,使组织迅速冷冻达到一定硬度后制作成切片 ,冷冻切片的组织不需经过任何处理 ,组织中的糖、脂、蛋白质、酶、抗原、抗体等化学成分不受影响而得以保存。它除常用于手术中的快速病理诊断 ,还用于某些组织化学染色 ,酶的显示、抗原、抗体的检测 ,免疫荧光等方面。冷冻切片是一种组织切片快速制作方法 ,存在着多种干扰因素 ,影响冷冻切片质量主要有以下四个方面。1组织冷冻与冰晶形成冰晶的形成是组织在冷冻固化过程中 ,由于冷冻缓慢 ,时间过长 ,细胞胞浆和组织间隙内未结合水逐渐析出所形成 ,融…     

微小组织冰冻快速制片技术

目的摸索提高微小组织冰冻快速制片质量的方法。方法针对小组织冰冻切片中常常出现组织切完、多粒组织切片不全、冰晶、染色不均匀等问题,采用预先制作冷冻平台、快速冷冻等方法来制作优质的冰冻切片。结果组织铺平可使组织切片完整,快速冷冻可减少冰晶形成,使组织结构更清晰,及时固定和加温染色可使细胞核染色更鲜艳,核、质对比明显。结论组织铺平、速冻、固定、染色等都是提高微小组织制片质量的关键。     

微波在生物材料超低温保存中的作用

超低温保存生物材料的降温和复温过程中 ,冰晶的形成将损伤细胞 ,影响冻存效果。相对于常规冷冻方法 ,应用微波技术更能抑制冰晶生长 ,提高冻存质量。微波具有良好的穿透性 ,可使冷冻材料较为均匀地受热。在生物材料降温时 ,微波场产生扭矩影响水分子集束的结构 ,使其不利于冰晶的增长 ,从而阻断了冰晶的形成 ,增强生物材料的玻璃化能力。在复温过程中 ,极性分子 (如水 )吸收微波能量转化为热量 ,产生较高的复温速率 ,能阻止重结晶的发生 ,获得较好的复温效果     

活体肺癌组织玻璃化保存的研究

保存活体的肺癌组织将为肺癌发病基因筛查和靶向药物筛选等体外实验研究提供更完整的样本信息. 本文对活体肺癌组织的玻璃化保存方法进行研究，首先采用针浸法玻璃化保存单块肺癌组织，对所需低温保护剂的浓度和平衡时间进行了优化；其次采用冻存管对多块肺癌组织样本进行玻璃化保存，对低温保护剂溶液体积以及平衡时间进行了优化；最后对慢速冷冻、不加低温保护剂快速冷冻、玻璃化冷冻3种冷冻方法的冻存效果进行比较并通过低温显微分析其冰晶损伤机理.结果表明，20% EG+20% DMSO+0.5 mol/L海藻糖作为低温保护剂，在平衡溶液和玻璃化溶液分别加载3 min和1 min时，针浸法和0.25 ml冻存管内玻璃化冻存，复苏后组织活力最高，分别约为79.96%与80.44%. 免疫组化显示玻璃化保存肺癌组织经过复苏后，相比慢速冷冻和无保护剂快速冷冻，组织结构损伤较小，组织内细胞TUNEL阳性表达较少. 低温显微结果表明，玻璃化保存组织内部及周围只出现少量细小冰晶，而慢速冷冻、快速冷冻组织皆出现明显冰晶.     

甲状腺组织冷冻切片的优化

目的优化冷冻切片的关键条件,以期提高甲状腺组织冷冻制片效率、切片质量与染色效果。方法收集术中新鲜送检的甲状腺标本,通过对比实验,比较冷冻切片制作环节中取材厚度、速冻方法与染色方法等因素对制片质量的影响。结果甲状腺组织冷冻切片取材厚度以0.2~0.3cm为佳;预先制作“冰垫”的托头并于上方加盖冷冻冰锤,有利于提高速冻效率、提高组织结构清晰度、减少组织块崩裂、减少冰晶、减少裂隙;机染有利于提高染色优良率并减少染色时间。结论选择适当的取材厚度、优化速冻方法、采用优质的染色方法,可显著提高甲状腺组织冷冻切片的制片质量,为精准的术中病理诊断奠定基础。     

乳腺冷冻切片的优化

目的优化乳腺冷冻切片的关键条件,以期提高制片效率与切片质量。方法通过实验,分别比较不同取材大小、速冻方法、切片厚度等条件对乳腺冷冻切片质量的影响。结果乳腺冷冻切片取材大小以1cm×1cm×0.2cm至2cm×1.5cm×0.3cm为佳;预先制作"带垫"的托头有利于提高速冻效率、减少组织块崩裂、减少冰晶;切片厚度以5μm及6μm为佳。结论优化乳腺组织取材大小、速冻方法、切片厚度等条件,可显著提高乳腺冷冻切片的制片效率与切片质量,为术中病理诊断及手术方案的制定提供保障。     

淋巴结组织术中快速冷冻切片的优化

目的优化淋巴结组织术中快速冷冻切片的条件,以期提高淋巴结组织冷冻切片的时效性,改善冷冻切片的质量。方法收集厦门大学附属第一医院病理科2018年1月至2019年7月接收的120例术中淋巴结组织标本。根据组织取材大小不同分为3组,每组随机抽取一定数量的冷冻头,从组织冷冻前是否运用"吸水吸油法"、小淋巴结组织的摆放方式及冷冻切片机样本头的温度设置3个方面分别进行对比实验,比较不同条件对淋巴结组织的冷冻制片时间及切片质量(无皱褶、无裂隙、无冰晶3个指标)的影响。结果冷冻前先将淋巴结组织进行"吸水吸油"操作、将多枚小淋巴结组织并列排列、设置冷冻切片机样本头温度为-20℃的条件下淋巴结组织冷冻切片制片时间最短,无皱褶、无裂隙、无冰晶3个指标得分最高,切片质量最佳。结论优化淋巴结组织"吸水吸油"操作、小淋巴结组织的摆放方式、冷冻切片机样本头的温度设置等条件,可以显著缩短淋巴结组织冷冻制片时间,提高切片质量,值得推荐。     

两栖动物耐结冰机制及研究进展

寒带地区的两栖动物在冬眠期间可耐受体内结冰,并通过自身的生理生化机制降低冰晶对细胞的伤害：一方面将冰晶形成控制在细胞外,另一方面控制冰晶的形状和重结晶.其中耐结冰两栖动物体内的抗冻保护剂、冷冻反应基因和冷冻反应蛋白,在结冰期间起着关键的作用.     

定容条件下生物低温保存研究进展

低温能降低生物体内生化反应速率,延长生物活性时间.为了避免传统常压冷冻保存过程中冰晶的产生对生物组织造成的破坏,Dr.Rubinsky提出2种在定容条件下对生物体进行低温保存的方法.一种方法是isochoric freezing(译作"定容冷冻"或"等容冷冻"),通过利用等容腔体内部分液体发生凝固,产生的冰膨胀所带来的...     

病理快速冷冻切片染色的质控切片制备

目的探索一种较佳的病理快速冷冻切片染色质控片的制备方法。方法随机抽取60例快速冷冻组织,每例取2块组织,随机分为A、B二组,在-25℃速冻后,A组(标准组)切片放入AAF液(由95%乙醇A、乙酸A、甲醛F按85:5:10的比例配制而成)固定30s后立即进行HE染色,B组切片放入AAF液固定30s后取出室温晾干后放进冷冻切片机内过夜。余下的A组及B组组织进行后续2种不同的操作。C组:得到A组切片后的组织不做任何处理,直接放冷冻切片机机箱内,并将冷冻切片机箱体温度调高至-10℃,第二天上午再次调至-25℃;D组:得到B组切片后的组织于组织上加包埋剂覆盖后放冷冻切片机机箱内,余操作同C组。C、D两组于第二天上午8点再次进行冷冻切片后同B组一同进行HE染色,以十分制评定切片有无裂隙、皱褶或冰晶,染色后组织结构、细胞核着色和核质对比清晰度等6项指标的得分,分别与A组的染色片进行比较。结果 A、B两组切片质量评价指标得分无明显差别,C组切片无裂隙指标得分低于A组,D组无冰晶指标得分低于A组;B、C两组的组织结构清晰、细胞核鲜艳、核质对比清晰指标得分与A组比较无显著差异;D组组织结构清晰、细胞核鲜艳、核质对比清晰指标得分均低于A组。结论新鲜的组织冷冻切片后,切片立即放入AAF液固定30s,随后取出,常温晾干后再次放进冷冻切片机机箱内过夜直至第二天上午放入全自动染色机内进行HE染色,观察染液的染色力,适用于每天快速冷冻切片工作开展前的全自动染色机的染色质控。     

关于使用红外气流法测定光合作用的一些问题

在气流通过叶室的情况下,采用红外气体分析仪器(IRGA)检测气路空气中CO_2浓度的变化,是当前定量测定光合作用最常用的方法。近年阅读这方面的文献资料遇到一些问题,现提出讨论。 1.在开放式气路的实测装置中,常用转子流量计计量空气的流量,转子流量计的计量值受气体密度(gm~(-3))影响,当实测流量时气体的温、压条件与标定流量计时气体的温、压条件不同时,需要对流量测定值作修正。一些出版物,特别是教学资料,常忽略这一点。     

脉冲电场对人红细胞膜结构影响的冷冻断裂研究

对外加脉冲电场处理的人红血球冷冻断裂和蚀刻的复型观察中发现在强电场(3KV/cm)作用下,细胞周围有颗粒状和纤维状结构。结合SDS电泳分析证明了它们是由于在电场作用下,红血球膜的带3蛋白和膜骨架蛋白(血影蛋白)脱出的结果。在强电场作用下,由于膜蛋白和膜骨架蛋白的脱出造成了对细胞膜的损伤,使细胞膜稳定性降低,细胞易变形和形成伪足。由于膜蛋白的脱出,多余的自由脂质进入细胞质内而形成泡状结构。外电场改变了蛋白-蛋白以及蛋白-脂分子间的作用可能是电穿孔的主要机理。本文还对当前公认的冷冻断裂中所观察到的膜中间颗粒的来源提出了疑问,并提出了它们还可能与冰晶有关。而冰晶的形成又与膜的亲水与疏水性有关。     

苯乙烯树脂割断法在生物样品制备中的应用

近年来样品割断法已成为扫描电镜样品制备的新技术之一.早在1968年Kachler已利用冰冻蚀刻复型技术,在透射电镜下观察了细胞内部结构.1970年Arenberg等对样品制备方法作了进一步改良,使扫描电镜也能观察细胞内部结构.1972年日本田中敬一设计了一种冷冻割断装置,观察组织块割断面上暴露出的各种管腔内面,以及割断面上细胞内的微细结构.目前冷冻割断技术已发展成树脂割断法、有机溶剂割断法、水溶性包埋剂割断法等多     

大家畜的冷冻标号

在畜牧业生产实践中,畜体标号是管理畜群不可缺少的一项技术工作。尤其畜群较大时,在畜体上标志出生年度及个体编号更为重要。冷冻标号容易识辨,且与畜体共存终生,不损皮革,不易感染,操作简便,易掌握,一年四季均可进行。有条件的地方可以试用。 冷冻标号就是将特制的字号在冷却剂液态氮(或干冰)中冷却后,贴按在畜体剪去和剃去被毛的皮肤     

测定有氧呼吸过程中氧气消耗的实验方法

活的组织或者小生物体放入一个密封的小容器内,它们将会消耗氧气,产生二氧化碳。容器内的压力也将会与消耗的氧气的量成比例的下降。氢氧化钾是一种有效的二氧化碳吸收剂。它与二氧化碳的反应式,如下: H_2O+CO_2(?)H_2CO_3(溶液) H_2CO_3+2KOH—→K_2CO_3(结晶)+2H_2O 下图是进行这个实验的简单装置     

低温显微装置及其对细胞胞内冰晶形成现象的观察

了解细胞在不同条件下的结冰可能性有助于设计低温保存方案。应用低温显微系统．本对快速冷冻的脐带血干细胞的结冰现象进行了研究。在没有低温保护剂时,胞内出现冰晶温度范围为-4℃— -13℃,在有10％二甲亚砜做低温保护剂时,胞内出现冰晶温度范围为-27℃— -38℃。利用得到的实验数据,根据Toner提出的胞内冰晶形成模型,对有关参数进行了拟合。     

简化的真空冷冻干燥器

一种简化的真空冷冻干燥器,只需用一个冷阱,用丙酮干冰作为混合冷却剂,真空冷冻干燥的效果与以往一般用两只冷阱的真空冷冻干燥器完全一样,而且干冰的用量仅为以往的1/3。真空冷冻干燥装置见图1。其操作流程是保温瓶内先装2/3     

卤虫脱壳卵的液氮冷冻保存研究

作者以甘油、ＤＭＳＯ、葡萄糖和蔗糖为冷冻保护剂对卤虫脱壳卵进行了液氮冷冻保存研究．各保护剂对短期吸水发育的胚胎有一定的冷冻保护作用,在本实验条件范围内,高浓度保护剂较低浓度保护剂好,双重保护剂（甘油＋ＤＭＳＯ、葡萄糖＋蔗糖）冷冻保护作用较单一保护剂效果好。饱和ＮａＣｌ溶液对各发育时期的胚胎均有较好的冷冻保护作用,但对后期胚胎的冷冻保护作用较弱。作者认为胚胎内冰晶的形成是卤虫脱壳卵冷冻致死的主要原因。冷冻保护剂对卤虫脱壳卵的冷冻保护作用可能与它们的脱水作用有关。     

比较三种防冰晶法对切片保存效果的影响

目的 比较冰冻切片技术中几种防冰晶方法对切片保存效果的影响。方法 分别使用液氮骤冷组织、高渗透压脱水法、单纯OCT胶包埋等几种方法后行冰冻切片、HE染色后,分别于当天、1、3、6个月后比较其染色效果,选出最佳保存方法。结果 单纯OCT包埋法在1个月后染色明显变浅,冰晶数量最多,而在3、6个月后染色基本接近背底色,冰晶面积已占据近半个视野,组织结构破坏极其严重;高渗透压脱水法在1个月后染色深度及冰晶数量上无明显变化,但3、6个月后则明显变浅,冰晶数量明显增加;而低温骤冷法在染色后的几个月,染色深度及冰晶的数量均无明显的变化,结构基本维持染色当天的状态。结论 低温骤冷法是这三种防冰晶法中最利于保存切片的方法。     

活体冷冻固定及冷冻置换的小鼠睾丸组织内血清白蛋白和IgG的免疫组织化学定位

目的了解小鼠睾丸组织内血清白蛋白和IgG渗透性的时相性变化,揭示支持细胞间紧密连接的屏障功能。方法运用活体内冷冻固定技术对小鼠睾丸进行快速冷冻固定和冷冻置换,并作石蜡包埋。5μm厚连续切片用于抗鼠血清白蛋白和IgG的免疫组化染色和H．E染色。结果H．E染色切片显示距冷冻组织表面300-400μm深度范围内的精曲小管结构保存完好,无明显冰晶形成所致的人工损伤。血清白蛋白和IgG免疫反应产物主要定位于精曲小管管周肌样细胞周围,以及间质细胞之间和毛细血管内,部分免疫反应产物呈拱型出现在精曲小管上皮内,并严格限定在基底室,沿精原细胞表面分布。拱型免疫反应产物的数量与精曲小管上皮周期的发育时相密切相关。结论活体内快速冷冻固定和冷冻置换结合血清白蛋白和IgG的免疫组化方法,可很好地保存精曲小管组织结构并清楚地揭示支持细胞间紧密连接结构的时相变化。