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扩增未知序列DNA片段的PCR技术研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
1985年,Mullis等人发明了PCR技术,短短十余年间,这一技术得到迅速发展和应用,已由扩增已知基因发展到扩增未知基因,本文旨在介绍利用PCR技术扩增未知序列DNA片段的最新进展及这些技术在基因克隆研究中的应用。 相似文献
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通过鉴别未知的cry4亚组基因来确定排除法PCR加变性梯度凝脉电泳新方法。方法:应用排除法PCR的组基因和亚组基因引物扩增杀蚊毒素基因,cry4。这些引物是根据已知的cyr4基因的共有或特有DNA片段来设计的。组基因引物扩增产物被用于变性梯度凝胶电泳。平行变性梯度凝胶是由8%的聚丙烯酰胺加上20%到80%的变性剂组成。结果:已知的和未知的cry4来组基因被组基因引物扩增的产物在变性梯度凝胶电泳被分离开。尽管它们之间仅有两个碱基对不同(T在位置224和G在位置394)。应用组基因和亚组基因引物扩增,新发现的基因可被分类到次亚组基因水平。从5个苏云金芽孢杆菌亚菌中发现三个未发表的cry4亚组基因。结论:排除法PCR加变性梯度凝胶电泳是一个高度敏感、特异性和可靠性强的新方法,可用于鉴别各种未知的亚组基因。 相似文献
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mRNA差异显示条件的优化 总被引:3,自引:0,他引:3
运用优化的mRNA差异显示技术分离受内生真菌诱导的差异基因。优化差异显示条件表现在增如指定引物和随机引物的长度、改变PCR参数和再扩增程序、运用银染显色等。应用这些条件共获得7个阳性差异片段。用未优化的PCR程序1筛选35条差异带,得到3个两端均为随机引物的差示片段。而用优化的PCR程序2,52条差异带中得到9条只能用锚定引物和随机引物才能扩增出的片段。地高辛标记的反向-Northern鉴定为阳性后进行克隆和测序。PCR方法1所得的3个差示片段均无开放的阅读框。PCR程序2得到7个差异表达的基因中,2个为已知基因,5个为未知基因。因此可运用优化的差显技术分离差异表达的基因。 相似文献
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小麦高分子量谷蛋白亚基及其基因的研究进展 总被引:14,自引:2,他引:12
主要介绍了小麦高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)及其基因的研究进展情况,目前,转基因小麦的技术已经逐渐成熟,由于分子生物学领域分子标记技术的迅速发展,尤其是PCR技术的广泛应用,为实现外源优良储藏蛋白基因导入改良品种提供了可能,利用已知小麦品种的基因序列设计引物,从众多的未知小麦品种中扩增出新基因加以研究并做外源优质HMW-GS基因的转入已成为一种趋势。 相似文献
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应用计算机工具、GenScan软件预测中国美利奴绵羊MHC Class I区段的BAC文库中453oⅡ克隆的基因数目、特性及结构,建立一种可以从cDNA文库中简便有效获取表达基因的技术方法。选取4个预测基因作研究对象设计引物,应用PCR技术,对已构建好的cDNA文库进行PCR扩增,回收"目的基因"片段并连接pGEM-T载体,转DH5α大肠杆菌中扩增后测序。琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,cDNA文库中有目的条带,测序结果与GenBank进行Blast分析,分析结果表明这些基因与羊的基因均具有99%以上的相似性。因此应用基因预测分析与PCR结合技术可简便迅速的从cDNA文库中获取表达基因。 相似文献
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染色体11q23的混合谱系白血病(MLL)基因的断裂点簇集群区(BCR)的转位,可引起婴儿急性白血病及与DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制剂的生化治疗法相关的白血病。由于MLL基因包括大约30个不同的转位伴侣基因,几个断裂点所在的伴侣基因的序列还不清楚,因而对MLL基因断裂点的PCR克隆是很困难的。锅柄式PCR,即用已知5'端序列和未知的3'端伴侣基因序列以形似一个锅和一个柄的模板扩增断裂点基因DNA,是一种克隆MLL基因断裂区的新方法,可以扩增未知3'端序列的断裂点簇集群区。 相似文献
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结合流式细胞仪检测技术的菌体原位PCR扩增 总被引:2,自引:0,他引:2
建立一套原位PCR检测方法 ,联合流式细胞仪作为检测工具 ,作为基因水平转移研究中的基因监控手段。通过常规PCR反应以确定靶基因的基本扩增参数 ;细菌菌体经过多聚甲醛PBS液固定和溶菌酶处理后进行原位PCR扩增 ,产物洗涤后迅速用流式细胞仪进行荧光检测 ,并辅以荧光显微镜镜检。扩增样品在荧光显微镜的蓝光激发下发出明亮的黄绿色荧光 ,与空白对照中的无扩增菌体的自发荧光可明显区分。流式细胞仪检测结果也显示 ,阴性菌与阳性菌的荧光强度有明显区别。完成了对目标细菌的原位PCR扩增 ,并成功地应用流式细胞仪对原位PCR扩增菌体实施了检测。由此表明isPCR 流式细胞仪检测技术在细菌致病基因原位监控上的应用前景 相似文献
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光声光谱技术在生物医学领域的发展与应用 总被引:7,自引:0,他引:7
光声光谱(特别是激光光声光谱)技术已成为分子光谱学的一个重要分支,其技术特点为生物医学材料的研究提供了一种灵敏而又无损材料的有效办法,是研究复杂生物体所不缺少的分析工具,本文简述了光声光谱的基本理论及特点,介绍了光声光谱在生物学,医学领域的发展和应用情况。 相似文献
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宏基因组技术是近些年发展起来的生物新技术。其针对环境样本中的全部微生物基因组DNA开展研究,可以覆盖过去无法研究的不可培养微生物,极大地拓宽了研究的广度,因而,一经提出就得到广泛应用,并取得丰富成果。本文主要针对宏基因组技术在酶开发方面的有关应用进行综述。 相似文献
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Arthur J. Olson 《Journal of molecular biology》2018,430(21):3997-4012
Visualization has been a key technology in the progress of structural molecular biology for as long as the field has existed. This perspective describes the nature of the visualization process in structural studies, how it has evolved over the years, and its relationship to the changes in technology that have supported and driven it. It focuses on how technical advances have changed the way we look at and interact with molecular structure, and how structural biology has fostered and challenged that technology. 相似文献
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For several years it has been recognized that introduction of plant cells into culture results in genetic changes. These genetic alterations have been recovered in the plants regenerated from cell cultures. More recently it has been recognized that this method of introducing genetic changes into crop plants could be used to develop new breeding lines. The technology of introducing genetic variation by using cell culture has been termed somaclonal and gametoclonal variation. This paper reviews the history of this technology and offers genetic documentation of somaclonal variation in tomato. As this variation represents a new tool for the plant breeder, breeding strategies for the use of this variation are presented and discussed. Somaclonal and gametoclonal variation are new tools for the geneticist and plant breeder that permit reduction in the time period for new variety development and that permit access to new classes of genetic variation. 相似文献
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采用巨大芽孢杆菌发酵生产青霉素酰化酶比较理想,但是巨大芽孢杆菌保藏时间短、易变异、发酵周期短,在生产中巨大芽孢杆菌正常的生长代谢,受原料质量、工艺条件影响较大。哈药厂经过一年多的中试,两年大规模生产基本掌握了发酵生产工艺,并能控制发酵生产状态。平均酶活450u/100ml以上。 相似文献
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Dominic J. McCafferty 《Ibis》2013,155(1):4-15
Thermal imaging, or infrared thermography, has been used in avian science since the 1960s. More than 30 species of birds, ranging in size from passerines to ratites, have been studied using this technology. The main strength of this technique is that it is a non‐invasive and non‐contact method of measuring surface temperature. Its limitations and measurement errors are well understood and suitable protocols have been developed for a variety of experimental settings. Thermal imaging has been used most successfully for research on the thermal physiology of captive species, including poultry. In comparison with work on mammals, thermal imaging has been less used for population counts, other than for some large bird species. However, more recently it has shown greater success for detection of flight paths and migration. The increasing availability and reduced cost of thermal imaging systems is likely to lead to further application of this technology in studies of avian welfare, disease monitoring, energetics, behaviour and population monitoring. 相似文献
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转基因技术是近20年发展起来的在体内研究基因功能的分子生物学方法之一,近年来在原有技术的基础上,取得了许多新进展。综述条件转基因技术研究的新进展。阐明转基因的诱导表达系统争条件基因剔除系统的原理、操作过程以及这两系统各自的优缺点。 相似文献