鱼类致病菌的蛭弧菌研究

噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovors)是一类有寄生性的细菌。Stolp及Stzold(1962年)曾首次报导,我国司稚东、秦生巨等(1982年)在国内亦首次报导了这类细菌的发现。本文介绍了以鲫鱼出血病病原菌点状产气单胞菌(Aeromonas punctata)为宿主菌,经分离得到的噬菌蛭弧菌Bd3—2菌株的培养特征、细菌形态、细菌生理生化特征、感染宿主机制及在实验室条件下水体中对宿主菌净化作用等方面的研究内容。说明噬菌蛭弧菌是精养鱼塘水体中某些致病菌的自然净化的重要生物因子之一,并为利用蛭弧菌来减少或控制鱼塘细菌性病害的发生,开展生物防治新技术提供了较好的依据和途径。     

蛭弧菌研究进展

蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)是一类专性捕食革兰氏阴性菌的寄生细菌,在自然界分布广泛。蛭弧菌研究集中在蛭弧菌分类和基因组分析上,并以此指导蛭弧菌噬菌机制的研究,同时在生态学研究方面也有进展。蛭弧菌的噬菌性质可能作为一种行使杀菌功能的"活抗生素"成为目前研究热点。但在应用方面还存在一些需进一步研究和解决的问题。     

噬菌蛭弧菌的分离及初步鉴定

采用双层平板法,以滤膜过滤的方法来收集噬菌蛭弧菌,以嗜水气单胞菌(Aeromonas hudrophila)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescent)和绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)为宿主菌,进行噬菌蛭弧菌的分离研究;并在此基础上,通过接触酶检测和寄生性确认对噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)进行了初步的鉴定.结果表明未使用滤膜过滤,采用自来水琼脂双层平板法分离噬菌蛭弧菌的效果较好;并经过接触酶和寄生性检测初步鉴定此BD-SPOI菌株为噬菌蛭弧菌.     

蛭弧菌及生态防治概述

对噬菌蛭弧菌和蛭弧菌的主要生物学特性—寄生性,进行了一些探讨,并对其生态特性和在水产养殖等生态防治中的应用,以及对生态防治的认识进行了阐释和探讨。     

噬菌蛭弧菌生物特性研究进展

本文介绍了噬菌蛭弧菌的培养特性,温度对噬菌蛭弧菌的影响,噬菌蛭弧菌的生化特征,感染宿主的机制,在死的宿主菌中生长的特性,宿主的特异性以及噬菌蛭弧菌对致病菌的生物净化作用等生物特性的研究进展。研究认为,噬菌蛭弧菌是自然环境(水、土壤)中致病微生物的生物拮抗体,且极有可能利用它的寄生和溶解宿主菌细胞的特殊性,对环境水体的生物净化。     

噬菌蛭弧菌对鱼类常见致病菌裂解作用的研究

调查了北京地区２５份水样,其中２４份检出噬菌蛭弧菌。本次试验选用４株鱼类主要致病菌为宿主菌,检出的蛭弧菌对上述４种细菌的裂解范围有所不同。其中嗜水气单胞菌可被全部检出的蛭弧菌裂解（２４／２４）,其他３株菌仅部分被裂解,依次为肠型点状气单胞菌（１７／２４）,荧光假单胞菌（９／２４）,鳗弧菌（７／２４）。本次试验直接从水样中检出６株对４种宿主菌均有裂解作用的蛭弧菌,为进一步利用蛭弧菌防治鱼类常见细菌性疾病提供了可用资料。     

噬菌蛭弧菌噬菌斑的鉴别与纯化的研究

本文报告了使用１／５００营养肉汤双层琼脂培养基,在含有宿主菌及寄生菌混合物的软琼脂层中,蛭弧菌、变形虫及鞭毛虫等均可形成噬菌斑,但其大小、形态、扩展速度不同。鉴别方法除依据噬菌斑形态特征外,主要靠相差显微镜下的形态学观察。蛭弧菌的纯化用单斑传代,一个直径为１ｍｍ的噬菌斑含有约１０^５－６ｐｆｕ／ｍｌ（每毫升噬菌斑形成单位）。     

噬菌蛭弧菌对致病性大肠杆菌感染小鼠保护性作用的研究

实验建立了致病性大肠杆菌Ｅ０１１１ 感染昆明小鼠动物模型,用噬菌蛭弧菌进行保护试验。致病性大肠杆菌Ｅ０１１１ 攻击前３ 天,用噬菌蛭弧菌预先保护,小鼠生存时间与对照组比较明显延长,存活率高（Ｐ＜ ０．０５） 。致病性大肠杆菌Ｅ０１１１ 攻击后１ 小时,用噬菌蛭弧菌保护与对照组比较生存时间,存活率无差异（Ｐ＞ ０．０５） 。并证明噬菌蛭弧菌８ ×１０５ＣＦＵ／ｍｌ 小鼠腹腔注射０．０２ｍｌ／ｇ 对小鼠无毒性反应。     

噬菌蛭弧菌对嗜水气单胞菌裂解作用的研究

本文报道了8株噬菌蛭弧菌对河水中分离的9株嗜水气单胞菌的裂解作用。结果发现,噬菌蛭弧菌Bd32的裂解率为77.78％;Bd83、Bd98的裂解率为88.89％,其余5株噬菌蛭弧菌对9株嗜水气单胞菌全部裂解。     

二龄草鱼肠炎病的研究

本文从细菌学、血清学、鱼体免疫以及药物治疗等几个方面,阐明了点状产气单胞菌是二龄草鱼肠炎病的病原菌。另外还对这种细菌特性及其致病方式进行了讨论,并对该病的诊断提供了方法。     

蛭弧菌BDG-9质粒不稳定性研究

本文建立了研究难于单独连续培养的专性蛭孤菌质粒稳定性的方法体系。应用此方法体系发现并证明了在传蛭孤菌ＢＤＧ－９中所含的质粒ｐＳＴⅠ存在着独特的质粒缺失现象,当蛭弧菌ＢＤＧ－９单独培养时,在通常决定质粒稳定性的复制功能和分配功能都正常的情况之下,随着细胞的传代,质粒ｐＳＴⅠ逐渐丢失,蛭弧菌的生长繁殖也逐渐停止,表明质粒ｐＳＴⅠ的存在对ＢＤＧ－９细胞单独生长有重要作用。     

鱼类杂交不亲和性的研究

本文分析研究了鲮鱼属间杂交和亲本自交的胚胎发育时序和热量要求、胚后发育的形态特征、以及胚胎染色体组等方面的差异;并讨论了这些差异与各种杂交不亲和表现之间的相关性。明确地指出,决定鱼类杂交不亲和性的主要因素是亲本间核型的差异和核质间的矛盾程度。双亲的核型差异较大时,杂交胚胎往往在发育中途夭亡而成活率极低,甚至完全得不到仔鱼。核型相同或相似的亲本,其杂交子代的成活率一般甚高;但也可能与核型著异较大的组合一样,因核、质基因组表达的模式或调控机制等存在着差异,以及它们对外界环境条件的要求有矛盾,乃使胚后发育的速率与顺序失调而出现各种畸形胚;畸形的出现标志着一些特定细胞分化的专一性代谢作用停滞,而胚后幼体必然趋向死亡。     

淡水养殖鱼类暴发性传染病致病细菌的研究

于1990—1991年的5—10月间,从湖北、湖南、河南和广东4省的9种淡水养殖鱼类的发病鱼睥、肝、肾中分离的93株细菌为材料,经100多个表型特征和细菌DNA中G+Cmol％遗传型特性测定等研究结果,可归属为产气单胞菌属中的运动性嗜中温产气单胞菌和弧菌属中的河弧菌。按照国际细菌命名法规优先律应为点状产气单胞菌[Aeromonas punctata(Zimmermann)nom.rev];而河弧菌与以前所描述的生物变种Ⅰ、Ⅱ型不同:在43℃能生长;发酵水杨苷产酸;利用D-葡糖酸钙、腐胺;不能利用戊二酸,D-葡糖醛酸;从D-葡萄糖产气;DNA中的G+Cmol％为47(Tm),鉴定为河弧菌生物变种Ⅲ(新生物变种Vibrio fluvialis Biovar Ⅲ.Biovar nov.)。     

260株气单胞菌的表型特性与毒素原性研究

本文对山东省9市（地）临床和外环境等6种标本中检出的260株气单胞菌进行了表型特性研究。结果表明：山东省以温和气单胞菌为主（52.69％）,嗜水气单胞菌（23．4％）、豚鼠气单胞菌（23.08％）次之。自淡水鱼中检出维隆气单胞菌和易损气单胞菌各1株。随机抽取163株应用溶血试验、CHO细胞测毒素试验、兔肠结扎及CT基因探针杂交试验进行毒素原性研究,温和、嗜水及豚鼠气单胞菌均可产生溶血素、肠毒素,某些菌株的肠毒素具有与严乱肠毒素呈交叉反应因子（CTCE）。