产异丁醇大肠杆菌工程菌的构建

摘要:酮酸脱羧酶是异丁醇生物合成的关键酶,而大肠杆菌中没有此基因.将乳脂乳球菌NIZO B1157的2-酮酸脱羧酶基因kdcA克隆到非生产菌株大肠杆菌中,同时串联表达与前体物质酮酸相关的alsS、ilvC和ilvD基因,构建了串联表达质粒pSTV29-alsS-ilvC-ilvD-kdcA.大肠杆茵工程茵成功表达了4个基因,并能利用葡萄糖发酵产异丁醇,发酵24h后最高产量为3 g/L.     

透明颤菌血红蛋白的表达及其对基因工程菌的影响

利用已克隆的透明颤菌血红蛋白基因,构建了一批复制类型和抗生标记不同的ｖｇｂ表达载体,并就ｖｇｂ基因表达及其对几种基因工程大肠杆菌的影响进行了初步研究。实验证明ｖｇｂ基因的表达具有氧调控特性,在溶氧水平下跌至２０％饱和度时迅速合成。ｖｇｂ基因的表达产物可促进青霉素酰化酶和ＴＮＦ、ＩＬ－２等基因工程菌在低氧条件下细胞生长和产物表达的状况,由于ｖｇｂ基因的表达降低了细胞对氧的敏感程度,可望运用它来改善发     

基因工程菌的发酵研究

本文对大肠杆菌表达的ｒｈＧＭ－ＣＳＦ工程菌的发酵条件进行了详细的研究,探讨了发酵条件对工程菌表达外源蛋白量的影响,优化了影响发酵的各种条件,形成了一套工程菌发酵表达外源蛋白的工艺,并从工业化角度对工程菌的高密度高表达间的关系进行了探讨。     

重组昆虫病原细菌Cip蛋白基因工程菌发酵条件的初步研究

昆虫病原细菌产生两种胞内晶体蛋白CipA和CipB,为新型的生物农药——昆虫病原线虫提供必需的营养。在已构建原核表达载体pET-15b-cipA和pET-15b-cipB的基础上,研究了这两种重组载体在不同宿主菌中的表达情况,重组菌的生长特性,摇瓶培养时表达重组Cip蛋白工程菌的发酵条件。结果显示:以E.coli BL21(DE3)为宿主菌,在LB培养基中培养至OD600为0.8～1.0时,1 mmol/L IPTG诱导8 h,CipA和CipB的表达量可达30.9%和32.6%,重组质粒具有良好的分离稳定性和结构稳定性。     

噬菌蛭弧菌对致病性大肠杆菌感染小鼠保护性作用的研究

实验建立了致病性大肠杆菌Ｅ０１１１ 感染昆明小鼠动物模型,用噬菌蛭弧菌进行保护试验。致病性大肠杆菌Ｅ０１１１ 攻击前３ 天,用噬菌蛭弧菌预先保护,小鼠生存时间与对照组比较明显延长,存活率高（Ｐ＜ ０．０５） 。致病性大肠杆菌Ｅ０１１１ 攻击后１ 小时,用噬菌蛭弧菌保护与对照组比较生存时间,存活率无差异（Ｐ＞ ０．０５） 。并证明噬菌蛭弧菌８ ×１０５ＣＦＵ／ｍｌ 小鼠腹腔注射０．０２ｍｌ／ｇ 对小鼠无毒性反应。     

沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR检测

根据沙门菌invA基因、大肠杆菌phoA基因和金黄色葡萄球菌nuc基因序列,设计3对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果表明3对引物能特异地扩增出284bp、622bp、484bp的目的条带;最佳反应条件为沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的引物浓度分别为40nmol／L、40nmol／L、80nmol／L,Mg^2＋浓度2．4mmol／L,dNTP浓度2001μmol／L,Taq DNA聚合酶1.5u,退火温度55．0℃-57．4℃之间;在此条件下多重PCR同时检测DNA的敏感性分别是10．2pg、10．2pg、102．0pg,检测时间4h。建立的多重PCR是一种敏感、特异、准确、快速的方法,为同时检测食品中沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌奠定了基础。     

手机辐射对大肠杆菌生长影响作用的研究

目的：探索了解手机辐射对大肠杆菌生长与繁殖的影响。方法：用不同型号的手机以通话方式对大肠杆菌进行辐射,检测大肠杆菌培养后的茵落的大小和数量,比较实验组与对照组的差异。结果：对照组与手机辐射组茵落数量相近,经统计学分析,两组菌落数差别无显著性,但是经手机辐射后,菌落的直径大于对照组,不同型号的手机之间也有差别,且差别有显著性（P〈0．05）。结论：手机辐射对大肠杆菌生长可能有影响,但其具体机制还有待进一步的研究进行阐明。     

人α1型干扰素克隆菌的表达研究：Ⅱ.宿主细胞对质粒表达的影响

干扰素（IFN）是某些生物体细胞抗病毒感染的一类蛋白质,可用于治疗病毒性疾病和某些癌症。但由人血液获得的干扰素其量极微,目前已能通过基因工程大量生产。编码干扰素的基因已能在大肠杆菌~[1,3]、醇母~[4,5]和哺乳动物细胞表达。~[6]但仍需对工程菌的表达规律作进一步研究,特别要弄清各种因素对被克隆的外源基因表达的影响。     

大肠杆菌增殖培养方法

本文介绍一种培养大肠杆菌的新方法：在普通肉汤和普通琼脂培养基中加入一定量的乳糖,可明显地促进大肠杆菌（E．coli）增殖。用平板计数法、麦氏比浊法及离心称重法,对6株禽源E．coli和2株猪源E．coli培养产物的含菌量、菌泥湿重测定,结果表明：在普通肉汤中加乳糖可使E．coli产量增加约100％;在普通琼脂中,加乳糖可使E．coli产量增加200％以上。本法可用于菌苗的生产和分子生物学中,具有经济、简单的特点。     

产毒性大肠杆菌毒素在豚鼠肠道定位的免疫组织化学研究

研究利用免疫组织化学方法对产毒性大肠杆菌（ETEC）感染豚鼠小肠组织中ETEC肠毒素的定位进行了研究,本研究结果表明,发病豚鼠从空肠到回肠明显充血,肿胀,但盲肠,结肠和直肠外观与对照组差别不明显,光镜下见到发病动物肠组织病变主要出现在空肠和回肠,以回肠最为严重。主要病理改变为水肿,炎症细胞浸润和充血,病变部位可以出现在粘膜层,粘膜下层,肌层和浆膜层,取回肠组织切片作免疫组织化学显示ETEC不耐热肠毒素（LT）和耐热肠毒素（ST）、可见回肠粘膜表层,粘膜肌层,肌层及浆膜层均呈LT和ST阳性反应,分布弥漫,空白对照和正常豚鼠回肠组织均呈阴性结果。本研究表明,ETEC主要作用于空肠和回肠,尤其是回肠;回肠组织各层都有病变,且与肠毒素的分布一致,证明毒素的作用并不仅限于肠粘膜细胞。     

THE BACTERICIDAL EFFECT OF ULTRAVIOLET RADIATION ON ESCHERICHIA COLI IN LIQUID SUSPENSIONS

1. The irradiation of bacteria in liquid suspension has been made possible through: (a) the use of a specially balanced physiological salt solution which is practically non-absorbing for the wave lengths used, and which is of such composition that subsequent dilution of the bacterial suspension gives the proper number of organisms; (b) special design of the exposure cell and a very thorough method of stirring which subjects each organism equally to the radiation; (c) practically complete absorption of the incident radiation, through the use of very dense suspensions, thus eliminating the necessity for a separate determination of the absorption coefficients of the bacteria for the wave lengths used. 2. The method also provides a means for determining the effects of sub-lethal doses. 3. A formula is given for calculating from observed survival ratios the energy required to inactivate bacteria with ultraviolet radiation. The formula corrects for the protective action of non-viable organisms. 4. Data are given for the inactivation of 15 hour and 240 hour cultures of E. coli, washed and unwashed) and for 6–7 hour cultures, unwashed. These data are compared with those of other investigators. 5. A possible explanation for the differences in energy required to inactivate old, young, and standard cultures of bacteria is suggested. 6. The possible mechanism of the action of ultraviolet radiation on microorganisms is discussed.     

大肠杆菌抗铜蛋白高表达的条件

含有抗铜质粒pRJ1004的大肠杆菌(Escherichia coli)可以在含有20mmol/L的LB培养基中生长,菌落呈深棕色,其原因是由于一种“修饰铜”沉淀的结果。以同位素64~Cu所做的试验表明,抗性菌株比敏感菌株积累铜少,其抗性机制是减少吸收。质粒pRJ1004含一个抗铜基因组:pcoABCDRSE,,其中pcoABCDE为结构基因,pcoRS为调节基因。pcoABCD的基因产物和丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae pv.tomato)的copABCD基因产物很相似,有很高的氨基酸序列同源性。而后者的菌落在含铜平板上则呈深蓝色,且细胞中可积累比敏感菌株更多的铜,可达细胞干重的0.3％。copABCD基因产物在细胞中的分布及功能都已研究得比较清楚,它们都是铜结合蛋白。     

PRELIMINARY EVIDENCE FOR WEAK MAGNETIC FIELD EFFECTS ON MECHANOSENSITIVE ION CHANNEL SUBCONDUCTING STATES IN ESCHERICHIA COLI

Investigations on the effects of applied magnetic fields on mechanosensitive (MS) ion channel activity in Escherichia coli reveal an enhancement of subconducting activity with field exposure. In nine of 10 experimental runs, more subconducting activity was observed during the application of a 1.35 millitesla (mT) DC magnetic field when compared to control periods before field application (p=.1). This is an indication that these weak fields may interfere with the function of MS channel subunits in this bacterium and may have implications for the interaction of applied magnetic fields with human MS ion channels.     

暖温带落叶阔叶林辐射能量环境初步研究

本文对暖温带落叶阔叶林辐射能量环境进行了初步探讨,文中对林、灌、草各层次的总、反、净、光台有效及吸收、透射等辐时因子的变化分别进行了系统分析。主要结论如下：（１）在生长季（５─１０日）期间,抵达林冠的太阳总辐射为３０９５．４５ＭＪ·ｍ￣（－２）,抵达灌草层的为３８８．３４ＭＪ·ｍ￣（－２）。峰值出现在５月,谷值在８月。（２）生氏季内,抵达群落的太阳总辐射主要集中于５、６两月,占整个生长季的４０．９９％。（３）生长季内,林冠上方净辐射总值为１６５８．７４ＭＪ·ｍ￣（－２）。（４）林冠反射主要受入射光的光谱特性及群落发育状况共同影响,反射率的变化主要与群落发育状况相关;灌草层的反射及后射率主要受群落发育状况的影响。（５）整个生长季,林冠所接收的光台有效辐时为１３０８．３ＭＪ·ｍ￣（－２）,灌草层为１９４．２１ＭＪ·ｍ￣（－２）。（６）净辐射日进程受气候因素影响十分强烈。（７）群落内光能资源的时空分布存在很大差异。     

乙醇消耗菌的分离鉴定及其对基因工程集胞藻乙醇产量的影响

为研究产乙醇基因工程集胞藻培养液中的乙醇消耗菌污染情况及其对乙醇产量的影响,从污染的培养液中分离出4株乙醇消耗菌,通过16S rDNA、26S rDNA序列分析对分离出的菌株进行鉴定,并研究其乙醇消耗能力及对基因工程集胞藻乙醇产量的影响。结果表明,分离出的4株菌分别为红酵母(Rhodotorula sp.)、季也蒙酵母(Meyerozyma guilliermondii)、短波单胞菌(Brevundimonas sp.)、微杆菌(Microbacterium sp.)。其中乙醇消耗能力最强的是红酵母,乙醇比消耗速率达到391 g/(1015 cfu?d);其次为季也蒙酵母,乙醇比消耗速率为80.1 g/(1015 cfu?d);短波单胞菌和微杆菌的乙醇比消耗速率远低于红酵母和季也蒙酵母。将分离出的菌株与产乙醇集胞藻共培养7d后,污染红酵母、季也蒙酵母、短波单胞菌、微杆菌的实验组乙醇产量分别下降了53.8%、23.6%、40.7%、27.3%。4株菌对基因工程集胞藻的生长无明显影响,均通过直接消耗乙醇而降低集胞藻的乙醇产量。     

HIGH LEVELS OF COLICIN RESISTANCE IN ESCHERICHIA COLI

Colicins are plasmid-encoded antibiotics that are produced by and kill Escherichia coli and other related species. The frequency of colicinogeny is high, on average 30% of E. coli isolates produce colicins. Initial observations from one collection of 72 strains of E. coli (the ECOR collection) suggest that resistance to colicin killing is also ubiquitous, with over 70% of strains resistant to one or more colicins. To determine whether resistance is a common trait in E. coli, three additional strain collections were surveyed. In each of these collections levels of colicin production were high (from 15 to 50% of the strains produce colicins). Levels of colicin resistance were even higher, with most strains resistant to over 10 colicins. A survey of 137 non-E. coli isolates revealed even higher levels of resistance. We discuss a mechanism (pleiotropy) that could result in the co-occurrence of such high levels of colicin production and colicin resistance.     

大肠杆菌抗铜启动子的亚克隆

大肠杆菌的抗铜质粒中含有两个抗铜启动子,PpcoA和PpcoE,它们均含有copperbox。为了证实copper box在抗铜作用中的重要性以及研究抗铜启动子的特性,以质粒pUCD615为报告载体进行了这两个启动子不同长度片段的亚克隆。限制性酶切和DNA序列分析的结果表明,这些片段的亚克隆都是成功的;此外报告基因lux-荧光酶活性测定的结果表明,两个不含有copper box的Ppco short-lux亚克隆均不表达荧光酶活性,而其他启动子片段的亚克隆则都具有较高的酶活性,说明这两个亚克隆不具有启动子功能,初步证明在抗铜启动子中copper box是不可少的。