血链球菌拮抗可疑牙周病原菌机理探讨I．血链球菌培养上清液抑菌活性研究

本研究建立一种敏感的抑菌试验,微量琼脂糖弥散法,分析血链球菌培养上清液的抑菌作用。结果发现,牙周病原菌在血链球菌培养上清液中孵育３０ｍｉｎ,菌落形成数低于对照组,微量琼糖弥散法测定血链球菌培养上清液的抑菌活性,显示血链球茵培养１２ｈ后,培养上清液出现抑菌活性,７２ｈ达高峰。在有蔗糖及ｐＨ８．５ＴＰＹ培养基中培养的血链球菌上清液可形成较大抑菌环,厌氧环境培养的血链球菌上清掖抑菌活性略高于需氧环境。     

血链球菌拮抗可疑牙周病原菌机理探讨：Ⅱ细胞素的产生及…

血链球菌产生细菌素至培养上清液中,无论是需氧或厌氧环境,血链球菌均可产生血逻素。采用无水乙醇沉淀法提取血链球菌培养上清液中的蛋白质,运用ＳＤＳ－ＰＡＥＧ分析其蛋白成份,发现１３０ｋｄ、１２０ｋｄ、７４ｋｄ、和５６ｋｄ四条蛋白区带,通过电泳凝胶弥散法抑菌试验显示,５６ｋｄ蛋白带具很强的抑菌活性,提示此蛋白质可能为血链素的所在位置。     

血链球菌拮抗可疑牙周病原菌机理探讨Ⅱ细菌素的产生及影响因素

血链球菌产生细菌素（血链素）至培养上清液中，无论是需氧或厌氧环境，血链球菌均可产生血链素。采用无水乙醇沉淀法提取血链球菌培养上清液中的蛋白质，运用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析其蛋白成份，发现有１３０ｋｄ、１２０ｋｄ、７４ｋｄ、和５６ｋｄ四条蛋白区带，通过电泳凝胶弥散法抑菌试验显示，５６ｋｄ蛋白带具很强的抑菌活性，提示此蛋白质可能为血链素的所在位置。     

血链球菌A19培养上清液抑制脑膜炎球菌的定量研究

目的：研究血链球菌Ａ１９培养上清液对脑膜炎球菌的定量抑菌作用。方法：将血链球菌Ａ１９培养上清液抽滤除菌,加入含一定浓度脑膜炎球菌培养液３７℃作用２４、４８、７２小时后分别进行活菌计数。结果：作用２４小时后对照组细胞数增加,而试验组细菌数减少,抑菌率为９８．９３％;４８小时后为８４．１０％;７２小时后为６６．６７％;结论：血链球菌Ａ１９对脑膜炎球菌的抑菌作用是由于其代谢产物中含有抑菌成分,若提纯此成     

厌氧条件下微量琼脂糖弥散法抑菌试验的建立及应用

作者建立了在厌氧条件下两种微量而敏感的抑菌试验,可用于鉴定蛋白质或多肽类抑菌物质。（１）琼脂糖弥散法：可检测抗菌蛋白抑菌活性,（２）电泳凝胶弥散法：可直接确定存在于ＰＡＧＥ凝胶中抗菌蛋白条带。应用这两种方法,作者首次鉴定出血链球菌培养上清液中存在抑制牙周可疑致病菌的抗菌蛋白。     

血链球菌细菌素抑菌活性研究

检测分离纯化的血链球菌细菌素对牙周可疑致病菌的抑制作用。通过羟基磷灰石(HA)柱层析、SephadexG-150凝胶柱层析、中空纤维柱超滤脱盐、浓缩纯化提取血链球菌细菌素,以具核梭杆菌为指示菌,洞平板法检测细菌素的抑菌活性。经HA柱层析得到4个相互分离的组分,经洞平板法检测,第Ⅱ峰的蛋白具有抑菌活性,冻干后得纯化后的细菌素,终产率为0.082%;1mg/mL的细菌素溶液可形成17mm的抑菌环,最小抑菌浓度为62.5μg/mL。血链球菌细菌素对牙周可疑致病菌具有较强的拮抗作用。     

椰子油对变形链球菌抑菌作用的体外研究

目的 研究椰子油对变形链球菌的生长抑制作用,通过观察其对生物膜活性、产酸及粘附的影响,探讨其在口腔中防龋的作用。方法 采用96孔微量板液体稀释法进行抑菌试验,并测得最低抑菌浓度（MIC）。体外建立变形链球菌生物膜模型,通过激光共聚焦显微镜（CLSM）扫描生物膜,观察不同浓度药物作用24 h后对生物膜活性的影响。其次测定处理后各组培养基上清液的终末pH值。最后通过玻璃棒粘附试验计算出不同浓度药物作用48 h后对生物膜粘附的影响。结果 椰子油对变形链球菌的生长有抑制作用,其对变形链球菌的MIC为3.13%。CLSM观察24 h后生物膜内活菌比例逐渐下降,死菌逐渐增多。培养基上清液的终末pH值随椰子油浓度的增大而升高,且均高于阴性对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。实验组变形链球菌的粘附率随椰子油浓度增高而降低,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 椰子油对变形链球菌有抑制作用,并能抑制其生物膜的活性、产酸及粘附等作用。     

嗜热链球菌CGMCC 1.1864所产的一种新型细菌素ST9

本文利用琼脂扩散法测定嗜热链球菌(Streptocccus thermophilus) CGMCC 1.1864发酵上清液的抑菌效果, 结果表明此菌能够产生抑菌物质, 且在排除有机酸和过氧化氢的影响后上清液不但能抑制革兰氏阳性菌, 对革兰氏阴性菌也有抑制能力。此抑菌物质具有热稳定性, 于100°C处理 2 h及121°C处理20 min仍保留抑菌活性, 但若将其在100°C处理2 h的上清液立即置于?20°C保存, 其抑菌活性有较大损失。常温下(37°C), 该抑菌物质在pH 2.0?9.0范围内有很好的稳定性。发酵上清液经各种蛋白酶及?-淀粉酶处理后抑菌活性完全消失, 而对过氧化氢酶不敏感, 表明此抑菌物质为多肽, 属于细菌素, 本文初步将其命名为嗜热链球菌素ST9。由于ST9对其产生菌具有吸附作用, 选择pH吸附释放法对该嗜热链球菌素进行粗提, 然后经SephadexG-25凝胶层析柱除去杂蛋白, 最后冷冻干燥得纯品。通过Tricine-SDS-PAGE分析得到其分子量约为5.0 kD。     

不同牙周状态下分离的血链球菌和口腔链球菌H2O2产生能力的比较

目的：比较研究不同牙周状态下分离的血链球菌和口腔链球菌过氧化氢（H2O2）生产能力。方法：随机选出不同牙周状态下分离的血链球菌和口腔链球菌各30株,采用酚红还原-微量板法测定厌氧条件下两种细菌H2O2的产量。结果：血链球菌各组和口腔链球菌各组H2O2的产量差异未见显著性;口腔链球菌产生H2O2的能力强于血链球菌。结论：提示牙周病变部位与健康部位的血链球菌和口腔链球菌产生H2O2的能力基本相似,是否存在基因型的差异尚待进一步研究。     

天然药物对血链球菌生长和产酸影响的体外研究

目的：通过研究不同天然药物对血链球菌生长及产酸的影响,为今后筛选出能有效调理口腔菌群生态平衡的药物奠定基础。方法：选用变形链球菌SB179作为实验菌株,测定川芎,血藤,五倍子等11种天然药物的最低抑菌浓度MIC,再以低于MIC的4个浓度配制含药的TPY液体培养基,调定其初始pH为7．4,接种血链球菌,厌氧培养后测定其终末pH,结果：当药物浓度低于或等于8．000mg/ml时,各天然药物对血链球菌的生长均有一定的抑制作用,且以五倍子作用较强,槟榔,茶多酚,蜂房,大黄,三七,血藤,白芷对血链球菌的产酸具有一定的抑制能力,而黄芩,川芎,五倍子和儿茶没有明显的抑制作用,结论：槟榔,茶多酚,蜂房,大黄,三七,血藤和白芷对血链球菌的生长和产酸都有一定的抑制作用.     

罗伊乳杆菌对致龋变形链球菌拮抗作用的研究

目的研究罗伊乳杆菌对变形链球菌的拮抗作用,初步了解产生拮抗作用的原因。方法利用罗伊乳杆菌无菌上清液,应用双层平板打孔法测定其抑菌效果,再通过滤纸片抑菌法对罗伊乳杆菌发酵的酸乳制品与普通酸乳制品对变形链球菌的抑菌作用进行比较,用饱和硫酸铵沉淀法分析产生拮抗作用的原因。结果罗伊乳杆菌有显著抑菌活性（P〈0.05）,仅罗伊乳杆菌的发酵乳样品对变性链球菌产生直径为6.3mm抑菌圈,80%饱和硫酸铵沉淀的细菌素抑菌活力最强,蛋白酶K处理后无明显抑菌圈。结论本研究证明了罗伊乳杆菌的代谢产物以及罗伊乳杆菌发酵的酸奶制品对致龋菌变形链球菌有着明显的拮抗作用。     

变异链球菌和血链球菌全代谢途径比对分析

为了比较变异链球菌和血链球菌全代谢途径,依据KEGG数据库(http://www.genome.ad.jp/kegg)对变异链球菌和血链球菌的全部代谢途径作逐项比对。结果显示,二者参与了85个代谢途径,包括多数以相同的酶参与的中央代谢途径,即糖酵解、三羧酸循环、磷酸戊糖途径等,和多数以不同的酶参与的双组分感应系统等。通过变异链球菌和血链球菌整体代谢网络对比,了解了变异链球菌和血链球菌理论上的全部代谢途径,为全面揭示二者代谢交流研究奠定了基础。     

血链球菌与疾病研究进展

血链球菌是早期定植在口腔内的细菌之一,也是口腔内的常驻菌.血链球菌作为牙周有益菌对大多数牙周可疑致病菌具有拮抗作用.其主要机制为产生过氧化氢和血链素.由于各种原因进入血液循环后可引起感染性心内膜炎,主要机制为血链球菌的表面抗原使血小板产生黏附、聚集,其在血小板表面的结合位点在血小板膜糖蛋白Ib附近.单核细胞在血链球菌的刺激下表达大量的组织因子,激活外源性凝血途径形成血栓.     

乳杆菌代谢产物对化脓性链球菌的抑制作用

【目的】分析乳杆菌代谢产物对化脓性链球菌的抑制作用。【方法】基于双层平板打孔法,通过测量抑菌圈大小来检测乳杆菌代谢产物对化脓性链球菌的抑菌作用;然后分别采用高效液相色谱法和4-氨酰安替比林法检测乳杆菌代谢产物中的有机酸和H2O2含量;最后,检测乳酸、乙酸和H2O2对化脓性链球菌的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)。【结果】对化脓性链球菌的抑菌效果以植物乳杆菌KLDS1.0667最好,副干酪乳杆菌KLDS1.0342-1次之,瑞士乳杆菌KLDS1.0203抑菌效果最差;乳酸和乙酸产量KLDS1.0667>KLDS1.0342-1>KLDS1.0203;H2O2产量KLDS1.0203>KLDS1.0667>KLDS1.0342-1。在抑菌试验中,乳杆菌的发酵上清液经去除H2O2处理后抑菌圈直径都减小;将发酵上清液的p H调至7.0后均检测不到抑菌圈。结果表明,乳杆菌代谢产物中对化脓性链球菌起抑制作用的主要物质为有机酸和H2O2,其中乳酸是产生抑菌作用的最主要物质。乳酸、乙酸和H2O2对化脓性链球菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为1.28、0.64和0.008 g/L,对化脓性链球菌的最小杀菌浓度(MBC)分别为5.12、2.56和0.032 g/L。【结论】乳杆菌可利用其代谢产物对化脓性链球菌产生抑制作用,主要抑菌物质为有机酸和H2O2。     

口腔血链球菌质粒的初步研究

口腔血链球菌是牙周主要有益菌,质粒是细胞染色体外辅助性遗传物质可以赋予细胞不同表型。本研究目的提检测血链球菌质粒ＤＮＡ存在情况,鉴定其分子大小,初步了解血链菌质粒与耐药性的关系,为今后更深入地在分子水平研究血链菌奠定实验基础。     

甲型链球菌SN-34和SN-35体外抑菌作用的研究

目的观察甲型链球菌SN-34和SN-35的抑菌效果。方法在固体培养基上用复层琼脂法观测甲型链球菌SN-34和SN-35对化脓性链球菌32309-2和金黄色葡萄球菌26001的抑菌环大小;在液体培养基中,甲型链球菌SN-34和SN-35分别与化脓性链球菌32309-2和金黄色葡萄球菌26001共同培养,然后观察一定间隔（2h）细菌的数量变化,并绘制生长曲线。结果化脓性链球菌32309-2的生长明显受到抑制。结论仅甲型链球菌SN-34具有抑菌作用。     

枯草芽孢杆菌HAINUP40的培养条件及其抑菌物质分析

前期研究表明枯草芽孢杆菌HAINUP40能够有效拮抗罗非鱼无乳链球菌,是潜在的益生菌。为了进一步优化其培养条件,并探索其其抑菌机理,本研究通过普通平板扩散法和单因素变量控制法,探究了培养条件的改变对菌株HAINUP40发酵的影响,同时确定发酵上清液抑菌活性成分及其稳定性。结果表明菌株HAINUP40的最宜培养条件为:普通淡水培养基,pH值为7.0～7.5,温度34℃,培养时长24 h,转速为50～150 r/min。HAINUP40发酵上清液中抑菌活性物质可以被80%(NH_4)_2SO_4溶液析出,对蛋白酶K敏感,不耐高温,pH4或8时失去抑菌活性,可以耐受短时间(180 s)紫外线照射。综上证明枯草芽孢杆菌HAINUP40所分泌的抑菌活性物质为大分子蛋白质,且非小分子抗菌肽。本研究为枯草芽孢杆菌HAINUP40在生物防治方面的大规模应用提供了重要的参考依据。     

植物乳杆菌CMCC-P0002代谢产物中抑菌物质的研究

目的通过对一株植物乳杆菌代谢产物的抑菌作用以及该产物的某些物理特性的研究,为进一步发现可替代现有抗生素的抗菌物质奠定基础。方法首先利用低温离心和超滤法对植物乳杆菌培养后的上清液进行初步提取,用打孔法行抑菌试验,明确其对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌等临床分离菌株的抑菌活性;并进一步经加热、调整pH及过氧化氢酶等处理上清液后,再验证其活性变化。结果植物乳杆菌的培养上清液对铜绿假单胞菌等多株临床分离菌株均具有一定的抑菌活性,且以pH在6以内时该物质抑菌活性较好,过氧化氢酶处理后或加热至100℃、30min,上清液的抑菌活性依然存在。结论在植物乳杆菌的培养上清液中存在着具有抑菌活性的物质,对从临床标本所分离的部分革兰阴性菌及革兰阳性菌有抑菌作用,该物质对热耐受,其活性受pH变化的影响。     

原花青素对变形链球菌生物膜的体外抑制作用

目的分析原花青素对变形链球菌生物膜的体外抑制作用。方法采用96孔微量板液体微量稀释法进行抑菌试验,观察对变形链球菌生长的抑制情况。盖玻片上形成变形链球菌生物膜模型,用共聚焦显微镜观察原花青素和对照试剂N-乙酰半胱氨酸对变形链球菌生物膜的影响。结果原花青素对变形链球菌的抑制作用比较强。原花青素在终浓度为2~5mg/mL,N-乙酰半胱氨酸在终浓度为7.5~75mg/mL对变形链球菌生物膜均有明显的影响。N-乙酰半胱氨酸明显减少了生物膜的多糖,而原花青素明显减少了生物膜的蛋白。结论原花青素和对照药物N-乙酰半胱氨酸具有不同的抗生物膜机制,原花青素对生物膜蛋白影响更多一些,而N-乙酰半胱氨酸对生物膜多糖的影响更多一些。     

刚果红平板法筛选血链球菌胞外多糖缺失突变株

细菌胞外多糖不但能够保护细菌,防止外界环境变化和侵蚀者对菌体细胞的侵害,而且在医学微生物学中还具有特有的生物学活性, 包括抗辐射、抗氧化等特性。尽管细菌胞外多糖受到了学者的广泛关注,但胞外多糖的生物合成机制还不十分清楚。以血链球菌为模式生物,以随机插入突变机制构建的血链球菌胞外多糖形成基因文库为受试对象,建立了一种简单易行的刚果红平板法用于筛选血链球菌细胞外粘多糖形成缺失突变株的方法,为日后研究细菌胞外多糖形成机制以及临床上筛选胞外多糖缺失突变株奠定了基础。