分子生物学鉴定为淋病奈瑟氏菌表型的多态性

３０株ＰＣＲ鉴定为淋球菌的变异株，与人工诱导的淋球菌Ｌ型相似。其形态为Ｇ＾＋和Ｇ＾－膨大双球菌或偶呈葡萄状，有细胞壁缺损及可滤过性。触酶试验（９３．３％）阳性、葡萄糖和氧化酶试验（９６．７％）转阴。形态及生化有与金葡萄相似处，借助ＤＭＡ酶和卵磷脂酶试验初步鉴定。金葡萄均为阳性、淋球菌变异株均为阴性，其中少数（３．３％）菌株ＤＮＡ酶试验阳性，故同时用ＰＣＲ检测可大大提高淋球菌检出率及准确率。     

中温碱性脂肪酶的研究：Ⅲ.扩展青霉PF868变株碱性脂肪酶的纯化及其…

扩展青霉ＰＦ８６８变株发酵液经硫酸铵盐析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－２００及Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱层析纯化,获得纯化倍数为３２．４的酶粉。该酶分子量为２３４４２Ｄａｌ,酶学特性表明：该酶的最适作用温度为３２℃,５０℃保温３０ｍｉｎ仍保留５０％酶活性,最适ｐＨ为９．０,作用ｐＨ稳定范围在７．０－１０．０之间,Ｃａ＾２＋和Ｍｇ＾２＋对酶有激活作用,Ｆｅ＾２＋,Ｃｕ＾２＋和Ｍｎ＾２＋酶活力有抑制作用。     

跨膜Ca~（2＋）梯差通过调节膜脂流动性影响G_s激活腺苷酸环化酶

将牛脑皮层激活型Ｇ－蛋白（Ｇｓ）和腺苷酸环化酶（ＡＣ）重建于大豆磷脂脂质体,形成具有或不具有１０００倍跨膜Ｃａ＾２＋梯差的四种脂酶体,研究了跨膜Ｃａ＾２＋梯差对Ｇｓ功能的影响及其与膜脂物理状态的关系。结果表明,在具有与生理条件相似的正向跨膜Ｃａ＾２＋梯差的脂酶体Ａ中,ＡＣ的基础活力和Ｇｓ对ＡＣ的激活活力均最大;而跨膜Ｃａ＾２＋梯差与生理条件相反时（脂酶体Ｄ）,ＡＣ的基础活力和Ｇｓ对ＡＣ的激活作用最     

淋球菌的营养分型及质粒的生态分布

淋球菌营养型及质粒类型是其重要的生物表型。我们对９３￣９４年度在长春地区分离的９８株淋球菌,进行了营养型分布,质粒微生态分布的实验研究,结果,属于原养型（Ｗｒ）３８株,占３８．７％;ＡＨＵ＾－型３４株,占３４．７％;Ｐｒｏ＾－型１７株,占１７．４％;Ｓｅｒ＾－型６株,占６．１２％;Ｉｌｅ＾－型３株,占３．１％,未见ＰＡＶ＾－型。所有菌株中,共检出四种类型的质粒,其分子量分别为２．６Ｍｄ,４．５Ｍｄ     

淋球菌AFLP基因分型的初步研究

采用扩增片段长度多态性技术(AFLP)对奈瑟氏淋球菌菌株进行基因分型研究。以EcoRI和MesI酶切26株淋球菌临床分离株基因组,并进行AFLP分析。同一地区的淋球菌分离株之间存在相当大的DNA多态性。AFLP是鉴别淋球菌临床分离株有用而敏感的基因分型技术,有助于了解流行淋球菌菌株的来源、流行菌株之间的克隆相关性,以及抗生素耐药性菌株的传播情况。     

淋球菌耐药性与耐药质粒的研究

为了解湛江地区淋球菌耐药现状及耐药质粒的分布,并初步探讨其相互关系,对１９９８￣１９９９年广东省湛江地区健康鉴定出的９８株淋球菌流行株,应用纸片扩散法测定细胞对１０种抗生素的敏感性,并采用碱裂解法进行质粒抽提,分析耐药质粒的分布情况,选取ＮＧ４、ＮＧ３１、ＮＧ４３、ＮＧ７０进行细菌的接合试验,以观察耐药质粒能否通过接合进行传递以及传递后受体菌耐药性的变化。结果显示６．１２％菌株对全部抗生素敏感,４８．９６％的菌株对３种及３种以上的抗生素耐药;共检出四种不同分子量的质闰,７．４ｋｂ和４．２ｋｂ质粒检出率较高,分别为５９．１６％和６７．３２％,质粒谱型１２种,以７．４ｋｇ＋４．２ｋｇ和３９．５ｋｇ＋７．４ｋｇ＋４．２ｋｇ为主,占３８．７６％。在细菌的接合传递试验中,ＮＧ４３可通过接合传递将其耐药性传递给淋球菌及大肠     

粘质赛氏菌胞外蛋白酶的提取,纯化及部分性质研究

经过硫酸铵３０％￣５０％分级沉淀、二步柱层析可获聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的粘质赛氏菌胞外蛋白酶制品,收集可达５３％,并制备了酶的结晶。该酶以Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００柱层析及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量约为８１０００,该酶的最适ｐＨ为７．０,最适温度为４５℃,Ｚｎ＾＋、Ｍｎ＾＋、Ｆｅ＾２＋、Ｃｕ＾２＋、Ｃｏ＾２＋等重金属离子不同程度地抑制酶活性。     

从霍乱样腹泻患者分离出一株霍乱弧菌不凝集变异株及其鉴定

本文报道从一霍乱样腹泻患者粪便中分离出一株不凝集弧菌。该分离菌株的形态及生化反应等均与霍乱弧菌流行株相似,但与霍乱弧菌“Ｏ”多价血清不凝集。采用限制性核酸内切酶谱分析发现其染色质ＤＮＡ酶切图谱与霍乱弧菌流行株很相似,呈高度同源,认为该不凝集株可能是由霍乱弧菌变异形成,这在震乱流行病学上具有重要的意义。     

应用单克隆抗体ELISA检测淋球菌

利用抗淋球菌外膜蛋白的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）制备的淋球菌酶免疫试剂（ＧＯＮＯ－ＥＩＡ）检测实验室已知淋球菌的阳性低限值菌数为６．２５×１０~４／ｍｌ。对脑膜炎奈瑟氏菌、微黄色奈瑟氏菌、卡它布兰汉氏球菌、大肠埃希氏菌、绿脓杆菌和乳酸杆菌等无交叉反应。检测临床生殖泌尿系统标本４８４例,以淋球菌培养法对比,ＧＯＮＯ－ＥＩＡ的敏感性为８１．４３％,特异性为９４．９２％,,总符合率为９２．９７％。ＧＯＮＯ－ＥＩＡ方法简便,快速,整个实验不超过１２０分钟,是适用于临床实验诊断的理想方法。     

用简并寡核苷酸探针筛选对虾白斑综合征病毒DNA多聚酸基因片段

根据一些病毒的ＤＮＡ多聚酶氨基酸序列中特有的保守序列ＶＹＧＤＴＤ设计的简并寡核苷酸,经地高辛标记后与对虾白斑综合征病毒基因库克隆杂交,筛选出一段长度为７０７ｂｐ的ＥｃｏＲＩ基因片段,该片段在一个开放阅读框内。并含ＤＮＡ多聚酶Ｂ家族特有的保守序列ＹＧＤＴＤＳ。经与基因库比较,其氨基酸序列与藻类ＤＮＡ病毒科（Ｐｈｙｃｏｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）的几株藻类病毒的ＤＮＡ多聚酶片段有部分相似,因此推测该核苷酸片     

血小板激活时胞质游离钙浓度与两种颗粒数变化的相关性

用电镜形态计量法检测血小板α颗粒（αＧ）和致密颗粒（ｄＧ）的数密度,用钙荧光指示剂Ｆｕｒａ２检测血小板胞质游离Ｃａ＾２＋浓度（「Ｃａ＾２＋」ｉ）,观察到在钙离子导体Ａ２３１８７作用下,血小板「Ｃａ＾２＋」ｉ明显升高。凝血酶与ＡＤＰ也都分别引起「Ｃａ＾２＋」ｉ升高,且有浓度依赖性,选用三种激动剂的不同量以反映血小板不同程度激活时,测定「Ｃａ＾２＋」与颗粒数密度,分析两者间的相关性,发现αＧ和ｄＧ的数     

肯氏相思^60Co—γ辐照诱变研究

采用不同剂量（３０００，５０００，７０００Ｒａｄ）＾６０Ｃｏ－γ辐照肯氏相思种子，选育出诱变优株（Ｍ１），以Ｍ１的种子（Ｍ２）扩种试验，观测Ｍ１和Ｍ２代的形态，物候，并测定过氧化物酶同功酶带谱，酶活性，蛋白质含量，结果表明，各处理的优株与对照都存在差异。在相同生态条件下，Ｍ１代林木生长量和Ｍ２代地上部生物量分别高于对照１１．４８％￣２１．６４％和１４．６２％￣７３．８９％，以５０００Ｒａｄ辐照剂量     

人红细胞生成素（EPO）工程细胞建立及特性分析

构建了ＥＰＯ真核表达质粒,成功地实现了其在ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＾－细胞中的表达,所得到的ＥＰＯ工程的细胞株的形态与ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＾－细胞相似,细胞株小瓶静止培养时最高表达水平为２－３μｇ／１０＾６ｃｅｌｌｓ／２４铺达稳定,连续传代三个月和反复冻存复苏三次,细胞表达水平无明显下降。经过对细胞的一系列特性分析表明,该细胞株无支原体、真菌及细菌污染、无致瘤性,形态正常,染色体畸变率与出发株相当。     

激光参数对果胶酶产生菌变株产酶特性的影响

采用Ｋｒ＾＋、Ａｒ＾＋、Ｈｅ－Ｎｅ、ＬＤ、ＹＡＧ倍频等多种激光辐照果胶酶产生菌－黑曲霉。在同一波长、同一照射剂量下,不同辐照功率与时间的组合将产生变株产酶特性的不同变化,实验中存在着一个最佳辐照时间与功率的组合。在同一照射剂量、同一辐照功率与时间组合的条件下,变株果胶酶活变异率随波长变化基本呈线性关系。紫外光、可见光产生的酶活正变率与最大增幅高于红外光。激光的连续或不同调制频率的输出方式可能影响黑     

一株产柚苷酶的罗伦隐球酵母的鉴定及柚苷酶表达

【目的】对一株新分离的、产生柚苷酶的疑似酵母菌株Jmudeb008进行鉴定,确定其分类的种属关系,阐明葡萄糖对该菌株表达柚苷酶的影响。【方法】利用形态观察、核酸分析及生理生化实验对Jmudeb008进行种属鉴定;用含有0.5g/L柚皮苷及不同浓度葡萄糖的培养基培养Jmudeb008,通过检测培养过程柚皮苷、柚皮素及葡萄糖浓度的变化研究葡萄糖对Jmudeb008表达柚苷酶的影响。【结果】Jmudeb008的菌落形态及个体形态都与典型的酵母相似,其26SrDNAD1/D2区域和5.8SrDNA-ITS区域的序列与罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii)的同源性为99%,葡萄糖发酵试验阴性,尿酶试验阳性,重氮基蓝B试验阳性、硝酸盐还原试验阴性符合该菌种特性,因此鉴定为罗伦隐球酵母。Jmudeb008在以柚皮苷为唯一碳源的培养基中或当培养基中葡萄糖消耗完以后会分泌柚苷酶,而有葡萄糖存在时不分泌柚苷酶。【结论】分离得到了能产柚苷酶的罗伦隐球酵母,该酵母产柚苷酶受葡萄糖分解代谢调节。     

淋病流行株外排系统与外膜通透性和多重耐药性的关系

探讨外排系统、外膜通透性与淋病流行株多重耐药性的关系。应用K—B法和琼脂稀释法从湛江地区分离出62株淋球菌多重耐药株。利用SDS—PAGE测定淋球菌外膜孔蛋白的表达;应用直接荧光法测定能量抑制剂加入前后淋球菌对抗生素的摄入和积累情况,比较耐药菌与敏感菌内膜泵蛋白表达的差异;利用煮沸法提取细菌DNA,PCR扩增mtrR基因,并对扩增产物测序,比较敏感株与多重耐药株的差异。结果5株多重耐药菌均有外膜孔蛋白表达的缺失或下降,同时伴有外排泵蛋白的表达;5株敏感淋球菌无mtrR的突变,10株多重耐药株均有mtrR基因的突变。表明外排系统、外膜通透性与淋病流行株的多重耐药性密切相关。     

甲基乙二醛—双（脒腙）处理对光敏核不育水稻多胺含量的影响及其与育？…

ＭＧＢＧ（ｍｅｔｈｙｌｇｌｙｏｘａｌ－ｂｉｓ（ｇｕａｎｙｌｈｙｄｒａｚｏｎｅ）处理短日可育,处于光敏感时期的农垦５８Ｓ,可显著降低花粉可育度和自交结实率,但并不影响其正常的生长,ＭＧＢＧ处理长日不育株地效果不明显,以１０＾－４ｍｏｌ．Ｌ＾－１处理短日可育株效果最佳,ＭＧＢＧ主要影响穗子中下部枝梗的结实,对上部结实影响较小。ＭＧＢＧ处理引起腐胺增加而使亚胺精胺和精胺减少,推测亚精有胺和减少是育性下降     

芳香黄杆菌弹性蛋白酶的纯化及性质研究

报道了弹性蛋白亲和层析分离弛化芳香黄杆菌产胞外弹性蛋白酶,经一步柱层析可获聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的酶制品,收率可达５０％,并制备了酶的结晶。该酶在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上测得分子量为２１３８０,ＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点８．９最适作用温度为５０℃,最适作用,ＰＨ为７．４在４０℃以下热稳定性良好,ＰＨ４．５－９．５范围内稳定,重金属离子Ｆｅ＾３＋,Ｚｎ＾２＋,Ｃｏ＾２＋,Ｈｇ＾２＋,Ｎｉ＾２＋Ａｇ＾＋,Ｃｕ     

柚苷酶产生菌的选育及发酵条件研究

根据柚皮苷的物理及化学特性,设计和试验了一种新的柚苷酶产生菌筛选模型。在１５３株曲霉中筛选到一株产柚苷酶菌株ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒＺＧ８４,摇瓶发酵酶活力为３２０ｕ／ｍｌ。经自然分离和ＤＥＳ诱变处理,得到ＺＧ８６菌株,酶活力达１１２４ｕ／ｍｌ。对其培养条件和产酶条件进行了研究。     

11例重度内源性高甘油三酯血症患者脂蛋白脂酶基因…

对成都地区１１例重度内源性高甘油三酯血症患者脂蛋白脂酶基因外显子１－９的序列进行了分析。结果发现，１１例患者中有４例其ＬＰＬ基因在外显子６，８及９具有３种杂合子变异。其中一种为ｈｒ＾３６１－Ｔｈｒ（外显子８，Ｃ＾１３３８→Ａ）突变，为无义突变，尚未见报道，在７４例血脂正常中国人中的发生频率为１１．４％。另外２种变异Ａｌａ＾３６１－Ｔｈｒ（外显子６，Ｇ＾１０３７→Ａ）及Ｓｅｒ＾４４７－Ｔｅｒ外显子９