应用免疫-PCR检测癌症的初步研究

探索一种简便、灵敏度高、特异性强且易推广的血清中突变型ｐ５３蛋白检测方法,用于肿瘤早期诊断。用突变型ｐ５３蛋白的单克隆抗体,与特定ＤＮＡ片段连接制成基因探针,用免疫－ＰＣＲ技术,对１１７例病人血清样品进行检测。在１１７例病人血清样品中,检测总阳性率为４１．８８％（４９／１１７）,在临床怀疑为癌症及肿瘤病人中阳性率达５２．１１％（３７／７１）。     

上呼吸道病毒感染患者血清细胞毒因子活性的研究

应用结晶紫染色法测得４３例上呼吸道病毒感染患者血清细胞毒活性（血清经５６℃、３０ｍｉｎ灭活）。结果表明;病人血清中的细胞毒活性明显升高,９３％的病人细胞毒活性达５０％以上。     

应用反转录-套式PCR方法检测肾综合征出血热病人血清中的汉坦病毒特异性RNA

采用５′端生物素标记汉滩病毒特异性寡核苷酸探针,结合磁性分离技术和异硫氰酸胍－酚一步法（胍酚法）提取病毒ＲＮＡ,进行反转录－套式ＰＣＲ,检测肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病人血清样本,胍酚法能检测血清中至少几个ＰＦＵ病毒的ＲＮＡ,比磁珠法敏感１０倍,整个检测过程在５小时完成。应用该方法对１３７份汉滩型和汉城型ＨＦＲＳ病人血清进行检测分型,总阳性率达６０．５０％。其中,病程在７日以内（急性期）的病人血清仍能检测到２２．７３％阳性率。扩增产物经打点杂交检测证实为特异性扩增,并能准确分型。与空斑减少中和试验（ＰＲＮＴ）分型的符合率为１００％。对２０份正常人及２４份非ＨＦＲＳ患者血清进行ＰＣＲ扩增,结果均为阴性。将全部试剂做成试剂盒,为基层单位早期诊断肾综合征出血热病人提供了操作简便、特异、敏感、快速、直接的诊断方法。     

应用血清学方法鉴别急性和慢性病毒性乙型肝炎

本文用ELISA间接法检测急性和慢性乙型肝炎病人血清特异性抗HBcIgG,用ELISA捕捉法检测特异性抗HBcIgM。11例急性乙肝病人急性期抗HBcIgM100％阳性,抗HBcIgG全部阴性;恢复期抗HBcIgM 81.8％阴转,抗HBcIgG则100％阳转。17例慢性乙肝病人抗HBcIgM82.35％阳性,抗HBcIgG 100％阳性。被检血清经密度梯度超速离心,证实抗HBcIgM和抗HBcIgG两类抗体反应在急性和慢性乙肝病人血清中具有不同的动态规律。     

应用反转录——套式PCR方法检测肾综合征出血热病人血清中的汉坦病…

采用５’端生物素标记汉滩病毒特异性寡核苷酸探针,结合磁性分离技术和异硫氰酸胍－酚一步法（胍酚法）提了病毒ＲＮＡ,进行反转录－套式ＰＣＲ,检测肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病人血清样本,胍酚法能检测血清中至少几个ＰＦＵ病毒的ＲＮＡ〉比磁珠法敏感１０倍,整个检测过程在５小时完成。应用该方法对１３７份汉滩型和汉城型ＨＦＲＳ病人血清进行检测分型,总阳性率达６０．５０％。其中,病程在７日以内（急性期）的从血清仍     

结核杆菌可溶性细胞壁抗原与重组38Kd蛋白用于结核病血清学诊断的价值

目的探讨结核杆菌CW抗原和rTPA38蛋白用于结核病血清学诊断的价值。方法以CW和rTPA38蛋白为抗原,LAM为对照,用DICFA检测血清中的抗结核抗体。结果191例肺结核病人血清,用CW、rTPA38和LAM检测的敏感性分别为78．0％、65．5％和72．3％,特异性分别为95．9％、98．4％和95．9％。统计分析显示CW和rTPA38检测肺结核病人血清抗结核抗体的敏感性差异有非常显著性（χ^2=16．230,P〈0．01）。两者检测健康人和非结核组病人血清的特异性差异有显著性（χ^2=3．972,P〈0．05）。检测痰涂片阳性血清86例,发现CW和rTPA38与痰阳的一致率分别为84．9％和69．8％,CW抗原与痰涂片的阳性反应明显高于rTPA38。结论CW抗原有较好的敏感性和特异性,且与痰涂片有较高的符合率,有助于结核病的血清学诊断。     

应用免疫-PCR检测癌症的初步研究

探索一种简便、灵敏度高、特异性强且易推广的血清中突变型p53蛋白检测方法,用于肿瘤早期诊断.用突变型p53蛋白的单克隆抗体,与特定DNA片段连接制成基因探针,用免疫-PCR技术,对117例病人血清样品进行检测 .在117例病人血清样品中,检测总阳性率为41.88%(49/117),在临床怀疑为癌症及肿瘤病人中阳性率达52.11%(37/71).     

血中检测SARS冠状病毒N蛋白在SARS实验室早期诊断中的作用

为明确严重急性呼吸综合症(SARS)冠状病毒N蛋白在SARS实验室早期诊断中的作用,通过微量中和试验及酶联免疫方法、间接免疫荧光法检测疑似病人恢复期血清(大于28天)中SARS-IgG抗体,确诊SARS患者。同时收集发病不同时期SARS及普通发热病人血清,利用酶联免疫方法检测SARS-CoVN蛋白,并与荧光定量PCR早期诊断方法相比较。共检测：广州地区2003年12月～2004．年1月新发4例确诊SARS患者不同时期的血液和咽漱液标本;恢复期血清SARS-CoV中和抗体阳性病人不同时期的血清46份;广州地区2003年1月～4月临床确诊SARS患者159例的血清和56例疑似患者血清;非SARS普通发热病人血清97份;正常人体检血清100份。结果：4例新发SARS患者的不同时期标本中,3例患者急性期血均检出N蛋白,优于常用的荧光定量PCR检测方法。46份SARS-CoV中和抗体阳性的血清标本,N蛋白检出率为100％。159例临床确诊病例中,发病早期5天以内SARS-CoVN蛋白的检出率为92．3％,随后呈现逐步下降的趋势,在发病第18天仍可检出。56例临床疑似患者发病早期也有23．2％检出率。而97例普通发热病人及100份正常人血清中均未能检测出SARS-CoVN蛋白。表明在血清中检测SARS冠状病毒N蛋白的方法敏感性和特异性都好,对SARS实验室早期诊断具有重要作用。     

用转染EB病毒基因片段的真核细胞检测鼻咽癌病人的抗EB病毒核抗原-1(EBNA-1)抗体

用转染EBV DNA Bam HI K片段后稳定表达EBNA-1的K_4细胞作为靶细胞,检测50份鼻咽癌病人和38份健康对照者血清中的IgG/EBNA-1抗体;阳性率分别为100％和92％。前者的平均几何滴度为89.4,后者为18.3,前者约为后者的5倍。同一批被检血清经SPA吸收去除IgG竞争性抑制后,鼻咽癌病人的IgA/EBNA-1抗体阳性率达78％(GMT 20.9),健康人的IgA/EBNA-1抗体阳性率仅5.3％,效价亦很低(GMT 5.2)。表明IgA/EBNA-1抗体对鼻咽癌是比较特异的,可考虑作为鼻咽癌血清学诊断的指标之一。     

捕捉法ELISA检测脊髓灰质炎IgA抗体方法的建立与应用

建立了一种检测脊髓灰质炎(简称脊灰)IgA抗体的捕捉法ELISA(Aac-ELISA)。方法敏感,快速,特异,用于检测144份脊灰可疑病人的血清,IgA抗体检出率为77.8％(112/144).而这些血清的IgM抗体检出率为65.2％(94/144)。如同时检测IgM和IgA抗体,则阳性率可达91.7％(132/144)。麻痹后1～3天内IgA的检出率为76.5％(13/17),4～7天内为95％(19/20)。最长检出IgA的一例可疑病人,其血清收集于病后第59天。本方法在一部分16天后可疑病人IgM阴性血清中查出IgA阳性,故可以作为查IgM抗体诊断方法的补充,尤其适用于诊断感染后未能及时收到血清标本,IgM已经转阴而IgA抗体仍为阳性的病人。     

用ELISA诊断伤寒

<正>我们用ELISA法检测了伤寒病人血清和不同热病患者与健康对照血清中抗伤寒杆菌LPS抗体的IgM、IgG和IgA。也比较了ELISA和肥达试验的诊断价值。     

梅毒螺旋体重组抗原酶联免疫吸附试验的建立及应用

建立梅毒螺旋体重组抗原酶联免疫吸附试验（ELISA）,用于梅素血清学诊断和调查。其法,用表达的重组抗原IPN17和TmpA,建立检测血清特异抗体的间接ELISA,并与其它检测方法比较,分别检测梅毒参比血清、病人及献血员血清。其结果,敏感性、特异性均为100％。新建ELISA与TPHA的总符率为95．7％,明显高于RPR与TPHA的总符合率（89．1％）。献血员人群抗体阳性率为0．3％－0．69％,健康人群中抗体阳性率较低。     

单份血清肥达凝集试验在甲型副伤寒诊断中的价值

目的：评价疑似甲型副伤寒病例单份血清肥达凝集试验(WAT)的诊断价值。方法：以甲型副伤寒沙门菌血培养阳性和／或血清鞭毛特异性抗原阳性的甲型副伤寒病例(n=76)、血培养阴性和／或血清抗原阴性的对照发热病人(n=92)和健康饮食从业人员(n=63)为检测对象,用WAT测定以上三种人群血清甲型副伤寒沙门菌O、H、A抗体,分析评价不同O、H、A判断值诊断甲型副伤寒的敏感性、特异性、阳性预测值和阳性似然比等指标。结果：获得三种人群O、H、A凝集价的分布及其几何平均滴度,20％对照发热病人O抗体效价≥160,而健康从业人员仅有3．2％的O抗体效价≥160,对照发热病人和健康人相应H抗体效价分别占17％和4．8％,A抗体效价分别占16％和1．6％。53％血培养阳性和血清鞭毛抗原阳性甲型副份寒病例O抗体效价≥160,相应H、A抗体效价分别占41％和51％。用敏感性、特异性、阳性预测值、阳性似然比等指标评价单份血清WAT诊断甲型副伤寒的价值,提出O或H或A≥160和O≥160或A≥80可作为WAT辅助诊断甲型副伤寒的标准。结论：单份血清WAT有助于甲型副伤寒的诊断,该试验对血培养阴性的临床疑似甲型副伤寒病例及其高危人群中甲型副伤寒病例的诊断有实用意义。     

检测脊髓灰质炎IgM抗体捕捉法ELISA的建立及其在早期快速诊断中的应用

首次建立了用于脊髓灰质炎快速、分型诊断的血清IgM抗体捕捉法ELISA。检测了52例疑似病人,IgM阳性率为76.9％(40/52),而粪便病毒分离率仅为44.2％(23/52),前者的阳性检出率明显高于后者。做病毒分型诊断结果,与分离病毒中和试验定型的总符合率为92.86％(39/42)。检测601例来自全国各省的脊灰疑似病人血清,其阳性率波动于13％～92.3％,平均为61.1％。阳性率与收集血清的病日相关,发病0～3天收集者,阳性检出率为69.5％,4～25天者为64％,26～54天者为52％,55天以上者则未能检出。本检测方法需时1.5天,简便、敏感、特异,重复性良好,适用于脊灰的早期快速诊断。对其实用性进行了讨论。     

抗人IgA多克隆抗体ELISA法的建立和应用

用马抗人IgA抗体ELISA法,结合血清预处理,检测鼻咽癌(NPC)患者,其他肿瘤病人和正常人血清中的IgA/EA抗体结果表明,95.1％NPC病人阳性(抗体几何平均滴度为294.1),而健康对照组仅2.4～4.5％,ELISA与免疫酶染色(IE)法测得的血清抗体滴度之间有一定的相关性。但前者比后者测得的几何平均滴度(GMT)高9倍,本法敏感、特异、快速、简便,适用于现场大规模普查。     

应用基因重组Epstein-Barr病毒早期抗原P83蛋白检测鼻咽癌患者血清中的IgA/EA抗体

将pUCB质粒表达的P83蛋白应用于免疫印迹法(IB)和ELISA中,检测了85例鼻咽癌(NPC)患者和100例健康人血清,同时与免疫酶法(IE)作比较。结果表明,免疫印迹法对NPC患者血清阳性检出率为94％;ELISA法阳性检出率为88％;而IE法阳性率为64％。三种方法检测健康人血清出现低水平IgA/EA抗体的阳性率分别为4％、3％及2％。用IE法检测IgA/EA抗体为阴性的NPC患者血清,用IB法检测的阳性率达87％,ELISA法阳性检出率为77％。IB法与ELISA法之间具有较好的正相关(r=0.67,P<0.01)。     

HBV X基因在大肠杆菌中高效表达及血清抗X抗体检测

本文分别用大肠杆菌(E．Coli的Lpp启动子和M13噬菌体的geneⅡ启动子表达了分子量约为17 kDa的HBx蛋白,并以抗合成x多肽抗血清和抗x融合蛋白抗血清对该重组蛋白进行了分析鉴定(用ELISA法和Western印迹法),然后用重组x蛋白检测肝病病人血清中抗x抗体。我们采用一种改进的ELISA方法检测了212份血清标本,结果表明：肝硬化、慢活肝、肝癌、慢迁肝和急性乙型肝炎病人血清中抗x抗体阳性率分别为49．3％,47．6％、37．8％,29．6％和40．0％,高滴度的抗体主要存在于肝硬化和慢活肝病人血清中。     

戊型肝炎病人血清抗—HEV IgG与IgM和HEV RNA的动态变化

利用酶联免疫试验（ＥＩＡ）及逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,检测了２１０份急性非甲非乙非丙肝炎患者血清和４０例戊型肝炎（戊肝）病人系列血清。在急性非甲非乙非丙肝炎血清中,抗－ＨＥＶ ＩｇＧ、抗－ＨＥＶ ＩｇＭ和ＨＥＶ ＲＮＡ阳性率分别为６２．８６％、４５．２３％和４０．４８％。在戊肝系列血清检测中,抗－ＨＥＶ ＩｇＧ阳性率发病１个月内为９２．５％,发病２￣６个月１００％,１２个月９４．７％,     

单克隆抗体间接免疫荧光法检测巨细胞病毒分离培养中的抗原

应用抗巨细胞病毒(HCMV)蛋白抗原(分子量为20千道尔顿)的单克隆抗体(McAb-20k)和HCMV IgG特异性阳性血清以间接免疫荧光试验检测28例器官移植病人尿标本接种人胚肺细胞后的HCMV感染情况,结果前法于接种后48小时检测到HCMV阳性病人9例,后者于接种6天检测到阳性病人11例。与病毒分离结果相比较,两法的敏感性分别为81.8％和90.9％,特异性相应为100％和94.12％,符合率均为92.9％,比病毒分离提前数天至数周作出诊断,重复性良好。因此,抗HCMV蛋白抗原的单克隆抗体间接免疫荧光法是一种有效的、早期快速而又敏感特异的诊断方法,操作简便,既使没有单抗,可用HCMV IgG阳性血清代替,也可取得较好效果,值得在一般实验室推广应用。     

嗜肺军团菌和弯曲杆菌在间接荧光抗体试验中的血清学交叉反应

50名培养证实弯曲杆菌胃肠炎的患者血清中作了嗜肺军团菌抗体检查。间接免疫荧光试验检测有10名患者(20％)出现阳性滴度(≥16)。36份急性期患者血清只有1份检测到抗体,而14份在症状出现10天以上获得的血清中却有10份(71％)有抗体。所有阳性血清均含有特异性IgM抗体而特异性IgG或IgA未能在任何标本中检测到。从42例类似沙门氏菌胃肠炎病人血清中未能检测到军团菌抗体。这些结果显示在嗜肺军团菌和弯曲杆菌之间有血清学交叉反应。