共查询到20条相似文献,搜索用时 31 毫秒
1.
反义核酸技术(antisensenucleicacidstechnology)是根据核酸杂交原理设计的以选择性地抑制特定基因表达为目的的一类核酸研究新技术,它包括反义RNA(antisenseRNA,asRNA)、反义DNA(antisenseDNA,asDNA)及核酸(ribozyme,Rz)三大技术领域,反义核酸技术同基因治疗一样已经成为一项引人瞩目研究领域。本文对核酸作用的原理和在抗病毒方面的研究进展作一综述 相似文献
2.
以赤霉素(GA)处理后的G2豌豆为材料,构建了一个2.0×106的cDNA文库,用随机筛选法从该cDNA文库中得到一个完整的cDNA.其中1115bp全序列分析表明,它编码了豌豆5S核糖体RNA(5SribosomalRNA,5SrRNA),基因内部存在着与核糖体蛋白L5及5SrRNA结合蛋白(5SrRNABindingProtein)同源的区段,这些同源区段是蛋白与RNA结合的位点.基因内部还存在着大量的重复序列. 相似文献
3.
反义RNA对人胃癌细胞生长抑制及恶性表型的阻断作用 总被引:2,自引:0,他引:2
ras原癌基因的点突变是人胃癌发生发展的重要机理之一。利用能表达c-H-ras癌基因反义RNA的质粒,导入人胃癌细胞系BGC-823,研究了ras癌基因反义RNA对人胃癌细胞生长及恶性表型的作用,结果表明,c-H-ras反义RNA可引起BGC-823生长速率及形态的变化,在半固体培养基中细胞集落形成能力减弱,部分也抑制了BGC-823在裸鼠体内的致瘤性。c-H-ras反义RNA对其RNA的过量表达 相似文献
4.
ras原癌基因的点突变是人胃癌发生发展的重要机理之一。利用能表达c-H-ras癌基因反义RNA的质粒,导入人胃癌细胞系BGC-823,研究了ras癌基因反义RNA对人胃癌细胞生长及恶性表型的作用,结果表明,c-H-ras反义RNA可引起BGC-823生长速率及形态的变化,在半固体培养基中细胞集落形成能力减弱,部分地抑制了BGC-823在裸鼠体内的致瘤性。c-H-ras反义RNA对其RNA的过量表达呈特异性抑制作用。 相似文献
5.
牛生长激素基因在马铃薯中的表达 总被引:5,自引:0,他引:5
将牛生长激素基因cDNA 与Patatin ClassI启动子及NOS3终止子连接,构建了表达载体pPBGT. 用直接法将表达载体转入农杆菌(Agrobacterium tum efaciens) LBA4404(pRAL4404)菌株, 用此菌株转化马铃薯(Solanum tuberosum )得到再生植株. 经NPTⅡ活性检测,总DNA PCR和Southern blot证明目的基因已整合到马铃薯基因组中.RNA 点杂交和Western blot表明牛生长激素基因已在转基因马铃薯块茎中转录和表达 相似文献
6.
编码天麻抗真菌蛋白cDNA的分子克隆 总被引:9,自引:0,他引:9
用重组DNA 技术研究了编码天麻抗真菌蛋白(GAFP)的基因,从天麻(Gastrodia elataBl.)块茎中提取Poly(A) m RNA 后合成cDNA,构建成表达型cDNA 文库,用纯化的蛋白质探针通过免疫筛选找出对应的cDNA 克隆。在进一步证明所选用的cDNA 克隆含有重组的λ-phage DNA 后,提取和纯化含有插入片段重组子的DNA,用Eco RI酶切分析可见插入片段。已分离出编码天麻抗真菌蛋白的基因 相似文献
7.
8.
反义RNA调节肿瘤细胞O~6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶活性 总被引:1,自引:0,他引:1
报道了逆转录病毒载体介导的反义RNA对肿瘤细胞O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)活性的调节作用.构建了三个表达MGMT反义RNA的逆转录病毒载体并用它们转染HeLaS3肿瘤细胞,观察细胞在转染前后MGMTmRNA水平、MGMT活性及其对ACNU抗药性的变化.发现针对MGMTmRNA5’端的反义RNA能够有效地降低MGMTmRNA水平和MGMT活性并使细胞对ACNU的敏感性提高4.6倍;针对MGMTmRNA全长的反义RNA也能在一定程度上调节细胞的MGMTmRNA水平和MGMT活性并增加细胞对ACNU的敏感性,而针对3’端序列的反义RNA对MGMT活性没有调节作用. 相似文献
9.
陈星云 《国外医学:分子生物学分册》2000,22(4):236-240
反义寡核苷酸可以通过与mRNA相互作用调节的基因表达,但是其作用的强弱受多种因素的影响。反义RNA和反义DNA在调节基因的表达方面各有优缺点;采取适当的方法增强反义寡核苷酸的摄取及促进其释放可以大大提高它们的作用效率;反义寡核苷酸在活体内主要经肾脏和肝脏代谢,有一定特异性和非特异性副作用。根据不同的目的,选择适当的反义寡核苷酸用于研究或疾病的治疗与预防,具有很重要的理论意义和现实意义。 相似文献
10.
采用PEG沉淀和差速离心的方法提纯雀麦花叶病毒的G和T分离物。利用蛋白酶K和两相酚法制备雀麦花叶病毒的总RNAs。将G和T分离物RNAs进行琼脂糖凝胶电泳,结果发现Br-MV-G除含有正常的RNA组分外,还出现了另一新的RNA_(3b)组分,其分子量为0.50×10 ̄6。RNA_(3b)只出现在大麦寄主中,而在昆诺基上缺失。RNA_(3b)仅依靠于其来源的G分离物的RNAs进行复制。以RNA_(3b)为模板合成 ̄(32)P-cDNA探针,和BrMV-G分离物的RNAs进行分子杂交试验表明:RNA_(3b)属RNA_3的缺陷型组分,它依赖于BrMV-G-RNA_3的帮助才能在大麦寄主中复制。RNA_(3b)的出现和缺失对BrMV的症状表现没有影响。 相似文献
11.
RNA聚合酶Ⅲ启动子的结构与功能 总被引:3,自引:0,他引:3
RNA聚合酶Ⅲ (polⅢ )是真核生物催化合成tRNA和 5SrRNA及一些核小RNA和胞质RNA必需的酶。RNA聚合酶Ⅲ能够识别tRNA基因中一些高度保守的特征性DNA序列而启动下游DNA的转录 ,这些序列称为RNA聚合酶Ⅲ启动子。RNA聚合酶Ⅲ启动子不仅广泛存在于真核细胞中tRNA、U6核小RNA(SNR6 )等的基因中 ,也是病毒催化合成一些小片段RNA如腺病毒VARNA所必需的。RNA聚合酶Ⅲ启动子因其能在体内外高效快速地转录某些小片段基因 ,已被人们广泛地应用于核酶和反义RNA技术中 ,在众多的RNA… 相似文献
12.
橡胶延伸因子REF(Rubber Elongation Factor)是橡胶生物合成中最重要的酶之一.作者利用REF基因序列设计并合成引物. 通过提取胶乳总RNA 用RT法合成cDNA 后,通过PCR技术扩增并克隆了REF基因和3端非编码区. 序列测定结果表明,REF基因全长414 个碱基,编码138 个氨基酸,3端非编码区长112 bp. 与Goyvaerts E 等人发表的序列比较:REF基因同源率为100% ,3端非编码区有2 bp 的差异,同源率为98% . 将所克隆的REF基因及3非编码区进行地高辛标记, 对胶乳和叶片总RNA 进行点杂交分析,结果表明,胶乳总RNA 呈阳性反应,叶片总RNA 则呈阴性反应. 相似文献
13.
水稻D1snoRNA及其基因的鉴定和功能分析 总被引:1,自引:0,他引:1
测定和比较了籼稻(OryzasativaL.sp.indica)、粳稻(O.sativaL.sp.japonica)和多年生野生稻(O.rufipogonW.Grifith)hsp70基因第一个内含子中D1DNA以及部分上游序列,并通过Northern杂交及cDNA序列分析对D1DNA编码的D1snoRNA进行了实验鉴定。D1snoRNA属于反义snoRNA家族,它与水稻25SrRNA互补序列为14个核苷酸长。根据理论计算,D1snoRNA具有指导水稻25SrRNA中第807位的核糖甲基化功能。D1DNA与C1DNA相隔仅105个核苷酸,在内含子中如此短的距离内连续编码两种snoRNA是罕见的,这一结构为研究串联结构的snoRNA转录后加工机制提供了一个良好的研究体系。 相似文献
14.
RRM RNA 结合蛋白在基因的转录后调控中起着重要作用.人GRY-RBP 是我们实验室最近克隆的一个新的全长cDNA,编码一个RRM RNA 结合蛋白.GRY-RBP 的全编码区用PCR扩增后,克隆到pET30a+ 表达载体中,在E.coli中获得了高效表达,表达的GRY-RBP重组蛋白占细菌总蛋白的21% .利用融合在GRY-RBPN 端的His.Tag,采取亲和层析的方法纯化了表达的重组蛋白.为了检测GRY-RBP的RNA 结合活性及其所结合的RNA 性质,将表达的蛋白与poly(A)-Sepharose 4B结合,发现GRY-RBP能与polyA (A)结合,结合活性能被可溶性的poly(A)、poly(C)减弱.改变NaCl浓度和加入不同浓度的酵母tRNA竞争物后,poly(A)结合活性不变. 相似文献
15.
将含有Anabaenasp.PC7120反义glnA基因片段的穿梭表达质粒pDC-ATGS转化单细胞蓝藻聚球藻Syne-chococcussp.PCC7942,通过同源重组,外源DNA定位整合到染色体上。经过抗菌素筛选,获得一种高效泌氨的Synechococcussp.7942突变种。 相似文献
16.
在调节特定基因的表达上,反义RNA是一种重要的手段。但由于存在降解、非特异性转移及安全性等问题,反义RNA在个体基因治疗中无法得到充分利用。受体介导的内吞作用为定向转移反义RNA提供一种运载工具,它可以将反义RNA定向、高效、低毒、高安全性地转移到靶细胞中发挥作用,因而将大大加快反义RNA基因治疗的临床应用。 相似文献
17.
基因沉默:获得性免疫的新途径 总被引:3,自引:0,他引:3
基因沉默 (genesilencing)首先发现于转基因植物。发生沉默的基因可以是外源性转移基因 ,也可以是入侵的病毒或宿主内源性基因。双链RNA(dsRNA)作为启动因素或中间体为不同生物基因沉默所共有。通常 ,基因沉默发生在两种水平上 ,一是由于DNA甲基化、异染色质化及位置效应等引起的转录水平上的基因沉默 (transcriptionalgenesi lencing ,TGS) ,另一种是在基因转录后水平上通过对目标RNA特异性降解而使基因失活的转录后基因沉默 (post transcriptionalgene… 相似文献
18.
反义凝血酶受体基因的表达对人ASMC增殖的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
介入治疗后再狭窄的发生严重降低了该治疗手段的最终疗效.为探讨再狭窄的发生机理、寻找有效的预防手段,利用反义RNA技术构建了含有部分反义凝血酶受体(ATR)cDNA片段的真核表达质粒pcDNA3/ATR,并观察了其对培养的人主动脉平滑肌细胞(ASMC)增殖的影响.结果表明pcDNA3/ATR的瞬时转染即能显著抑制人ASMC的3H-TdR参入量,且该作用与导入的DNA量呈剂量依赖性.说明部分反义凝血酶受体基因的表达可以抑制ASMC的增殖 相似文献
19.
Epstein—Barr病毒反义LMP1基因对鼻咽癌细胞CNE2株生长的抑制 总被引:3,自引:0,他引:3
将0.6kbLMP1前段基因反向插入逆转录病毒载体(pZIP)中,构建成pZIP-反义LMP1载体,再转入PA317包装细胞中,用G418筛选性克隆,获得产生1.7×10^5(CFU/ml)反杂交实验证实pZIP-反义LMP1载体基车整合到CNE2细胞的DNA中,并且有载体基因RNA的表达,观察反义LMP1基罟对CN#2细胞生长的影响,发现反义LMP1基因可降低细胞生长速度,减弱CNE2细胞在这果 相似文献
20.
为制备用地高辛精(Digoxigenin,Dig)标记的酶氨酸羟化酶(TyrosineHydroxylase,TH)RNA探针,本研究用分子生物学技术重组质粒PGEMTHI,即分别将携带T7和Sp6启动子的PGEM-3zf质粒和携带TH基因的PKSTH质粒用限制性内切酶消化并行分离纯化,得到带T7和sp6启动子的DNA片段和TH基因片段;经T4DNA连接酶连接后转入大肠杆菌,得到pGEMTH1重组克隆。经小量提取质粒井用酶切分析检测,证实其确有TH基因且方向正确。将此质粒再经限制性内切酶消化则得到线状DNA片段,用T7RNA聚合酶转录合成带有Dig标记的高比活度的单链RNA探针;经斑点杂交试验证实该探针具有较高的可靠性。这将为基因治疗帕金森氏病动物模型的疗效检测提供有效手段。 相似文献