利用微束激光将外源基因导入小麦幼胚并获得转基因植株的研究

近几年来,国内外学者在小麦遗传转化方面进行了大量研究。在我们实验室利用微束激光成功地将外源基因导入了小麦幼胚细胞并获得转基因植株。 选用小麦京花1号幼胚,PJIT_(101)质粒为实验材料,激光微束仪是中国科学院遗传研究所和重庆京渝激光生物所共同研制的Nd—YAG激光显微照射系统。 将京花1号开花后12—14天幼嫩种子,用0.1％的HgC_(12)灭菌10分钟用无菌水冲洗3—4次,剥取幼胚,用高渗缓冲液泡2—4小时。激光照射前洗去高渗液,加新鲜的Ms培养液,吸取0.5ml含幼胚细胞的悬浮培养液,加40—50ulPJIT_(101)质粒(50ug/ml),注入Rose小室,然后激光照射。     

利用激光微束穿刺法将杀虫蛋白基因导入油菜的研究

利用激光微束照射油菜子叶柄,将来自苏云金杆菌的杀虫蛋白（Ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌｃｒｙｓｔａｌｐｒｏｔｅｉｎ,ＩＣＰ）基因导入油菜细胞中,经植株再生和卡那霉素筛选,获得了转基因植株。对转基因植株进行了ＰＣＲ检测和饲虫实验,发现转基因植株为ＰＣＲ扩增阳性,某些植株表现出了较强的抗虫性。实验结果表明外源抗虫基因已被整合到油菜基因组并得到了表达。     

一种将外源基因导入植物的新方法：激光微束穿刺法

一种将外源基因导入植物的新方法──激光微束穿刺法王兰岚,周奕华,宋桂英,陈正华（中国科学院遗传所,北京,１００１０１）关键词转基因植物;转化作用;激光微束穿刺法ＡＮＥＷＷＡＹＯＦＦＯＲＥＩＧＮＧＥＮＥＴＲＡＮＳＦＯＲＭＡＴＩＯＮＯＦＰＬＡＮＴ—ＬＡＳ...     

利用激光微束穿刺法将GUS基因导入百脉根并获得转基因植物的研究

利用激光微束穿刺法将ＧＵＳ基因导入百脉根并获得转基因植物的研究周奕华韩厉玲王兰岚宋桂英陈正华（中国科学院遗传研究所北京１００１０１）ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＧＵＳＧｅｎｅｉｎｔｏＬｏｔｕｓａｎｄＡｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎｏｆＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＰｌａ...     

利用微束激光穿刺法将菜豆几丁质酶基因导入油菜的研究

利用微束激光穿刺法将菜豆几丁质酶基因导入油菜的研究杨仲毅王兰岚刘志岩张铁汉刘桂珍陈正华（中国科学院遗传研究所,北京,１００１０１）ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＢｅａｎＣｈｉｔｉｎａｓＧｅｎｅｉｎｔｏＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓｂｙＬａｓｅｒＭｉｃｒｏｂ...     

利用激光微束将外源基因导入高等植物细胞的研究

基因工程这一生物高技术为改变生物性状和快速育种提供了有力工具。目前克隆目的基因已有一些较为有效的方法。而将外源基因有效地导入细胞,尤其是导入农作物细胞到目前为止还没有一种通用于各种植物的方法。因此从事生物工程的学者都在努力寻求建立一种有效的、完善的导入外源基因的转化方法。本实验室建立了激光微束向植物细胞导入外源基因的试验程序。用已建立的程序对各种经济作物和林木进行了外源基因导入的研究。所用植物材料：禾本科小麦幼胚、双子叶植物锦室科棉花胚状体、豆科植物的百脉根子叶、兰科花卉兰花小圆珠茎、木本植物大…     

利用微束激光穿刺法将菜豆几丁质酶基因导入油菜的研究

本文以甘蓝型“双低”油菜新品种Ｈ１６５为实验材料,以子叶柄为外植体,研究了微束激光转化系统中的一些关键因素,如取材时间以播中后４－５天为宜;高渗液预处理２０－４０分钟者最佳;外源ＤＮＡ浓度以０．０５－０．１μｇ／μｌ获得转基因植株最有利等。已建立一种操作简便,重复性好,并能准确定位于靶体细胞的转化体系,并用这个转化体系成功地将菜豆几丁酶基因导入油菜,并获得转基因植株。经ＰＣＲ扩增检测为阳性,实验结     

利用微束激光穿刺法将抗真菌基因导入棉花的研究初报

以棉花感受态萌动种胚作为外源基因转化的受体,用激光微束穿刺法将β-1,3-葡聚糖酶及几丁质酶双价基因导入棉花,所构建的植物表达载体pB IBGC携带有筛选标记npt-Ⅱ(新霉素磷酸转移酶)基因。激光转化处理的种胚经卡那霉素筛选,已经获得抗性小植株。研究了微束激光转化法用于棉花感受态萌动胚转化预培养的时间、高渗液对材料的处理等。研究表明:用微束激光转化处理种胚是一种操作简便、重复性好的转化方法,用该法可将外源基因导入植物感受态萌动胚,避开植株离体再生的困难。     

用激光微束穿刺法将双抗虫基因导入红掌的研究

红掌(Anthurium andraeanum Lind.)是世界名贵花卉,其花独特,佛焰苞艳丽,瓶插寿命长,作为切花栽培有很高的经济价值.慈菇蛋白酶抑制剂是来源于慈菇储藏器官(根茎)的一种天然抗虫物质,属于丝氨酸蛋白酶抑制剂类,能抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和激肽释放酶,对某些鳞翅目、双翅目以及鞘翅目等昆虫有毒杀作用.通过激光微束穿刺法将构建的含抗虫基因API-A、API-B和选择性标记基因NPT-Ⅱ的质粒pBUBA导人红掌细胞中,通过卡那霉素抗性筛选和聚合酶链式反应(PCR)技术分析表明,抗卡那霉素的绿苗中大部分为阳性植株.     

利用激光微束将外源基因导入高等植物细胞的研究

本实验室已建立了激光微束向植物细胞导入外源基因的试验程序。用已建立的程序对多种经济作物和林木进行外源基因导入的研究,均得到了GUS基因瞬时表达的结果,正在继续研究GUS基因的整合表达。 广泛地选用了不同科属的植物及不同外植体进行外源基因导入的研究,所用材料如下:在被子植物中选用单子叶无性繁殖的兰科花卉兰花(Dendrobium)小圆球茎为外植体;以双子叶植物中的草本植物锦葵科的棉花(G.hirsulum L.)再生胚状体为外植体;十字花科油菜,选用     

利用RNA干涉技术及微束激光转化法培育抗病毒马铃薯

针对马铃薯生产中危害严重、分布广泛并且具有强烈协生作用的马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒,开展了抗病毒病的育种研究。采用RT-PCR技术分别克隆了267 bp的编码马铃薯X病毒外壳蛋白(PVX-cp)基因的相对保守区段X和294 bp的编码马铃薯Y病毒外壳蛋白(PVY-cp)基因的相对保守区段Y两个片段,将其按顺序连接,形成融合基因XY,然后分别将融合基因XY正向和反向插入到载体pHANN IBAL中,得到了载体pH IV,再用NoⅠt对pH IV进行酶切,将产生的大片段插入到载体pART27中,得到同时以PVX-cp基因和PVY-cp基因为靶标的XY的RNA i载体pAR IV。采用微束激光穿刺转化技术转化马铃薯品种Favorita的愈伤组织,得到了14株表型正常的转基因植株,转基因植株的southern b lot分析表明,导入的外源融合基因拷贝数介于2~4之间。攻毒实验表明,其中11株转基因植株对PVX、PVYo以及PVX和PVYo混合侵染均表现免疫,而其它3株的病毒浓度也低于对照。这一结果将为利用RNA i干涉技术开展植物抗多种病毒病的育种提供重要依据,验证了所构建的RNA干涉(RNA interference RNA i)载体具有良好的功能,同时又一次证明微束激光穿刺法是一种有效的遗传转化手段。     

激光微束在植物外源基因转化上的应用

本文概述了近年来激光微束在植物外源基因转化上的最新进展,激光微束转化法的关键技术及应用。并对其今后的应用前景作了展望。     

激光微束在两种鱼受精卵上打孔技术研究

在埃及胡子鲶和苏氏芒鲶两种鱼受精卵上,用脉冲ＹＡＧ激光微束打孔技术,成功地导入了外源指示剂和用激光微束打过孔的受精卵孵化出了仔鱼,为今后激光微束打孔植入外源基因和针类转基因研究做了一些有意义的探索工作。     

小麦外源DNA导入及转化的初步研究

采用改进的酚-RNA酶法从野生一粒、野生二粒、提莫菲维和波兰小麦幼苗中提取总DNA,用子房注射法和花粉管途径导入云南铁壳麦1号和湖北生产上应用的鄂恩1号小麦,发现D1代出现供体性状或新的变异性状,有些变异性能遗传到后代。     

玉米花粉诱导普通小麦产生单倍体技术介绍

采用玉米花粉诱导普通小麦产生的单倍体幼胚,经离体培养一个世代即可获得纯系。在陕西杨凌地区,1月27日-2月7日室内分期点播多类型玉米,3月1日移栽入大棚中,从4月中旬开始便可获得持续的多类型玉米花粉。小麦散粉前3-5d授粉,12h和36h后用250mg·L^-1 2,4-D处理后的得胚率最高（18．2％）。用1／2MS＋0．2mg·L^-1 IAA＋0．2mg·L^-1 6-BAP＋2％蔗糖＋7．5g·L^-1琼脂培养基进行幼胚离体培养的效果最好,平均幼苗产生率为92．15％。授粉100朵小花可以获得大约16个单倍体幼苗。