非生物胁迫条件下施氏假单胞菌生物膜形成规律的研究

旨在系统研究非生物胁迫因素对固氮施氏假单胞菌A1501生物膜形成能力的影响,测定了不同NaCl浓度、pH值、温度等培养条件下A1501生长及其生物膜形成能力的变化规律。结果显示,上述3种环境因素均对A1501菌的生长及生物膜形成具有影响,且呈现出一定的规律性。NaCl浓度2 mmol/L、p H值6.8、温度30℃是A1501的最适生长条件,而在0.6 mol/L的NaCl、p H值6.0及温度40℃等胁迫条件下,A1501菌的生物膜形成量均达到最高,分别为最佳生长条件下的7.8、7.0和2.0倍。在测试的诸因素中,NaCl浓度对A1501生物膜形成影响最大。以上结果表明,生物膜的形成与菌体生长负相关,即高盐、弱酸、高温等条件不利于A1501的生长,但刺激了其生物膜的形成。     

苯酚好氧降解菌的驯化和筛选

采用燕化集团公司炼油事业部污水厂的活性污泥为菌源 ,好氧条件下以苯酚为唯一碳源和能源驯化、筛选 ,分离出 4种高效降酚微生物 ,初步鉴定为假单胞菌属 (Pseudomonas)。通过正交实验可知 4种微生物的适宜生长条件 :AD1在温度为 30℃ ,NaCl浓度为 0 .9mol/L ,pH值为 5条件下 ,生长状况较好 ;AD2在温度为 30℃ ,NaCl浓度为 0 .3mol/L ,pH值为 5条件下 ,生长状况较好 ;AD3和AD4在温度为 30℃ ,NaCl浓度为 0 .3mol/L ,pH值为9条件下 ,生长状况较好。     

甲型副伤寒沙门菌培养条件的优化

优化甲型副伤寒沙门菌的培养条件,提高菌体产量。方法通过单因素及正交试验,对影响甲型副伤寒沙门菌生长的培养温度、NaCl浓度和pH等条件进行优化。结果甲型副伤寒沙门菌在NaCl浓度0.75%、温度35℃、pH6.5时菌体产量最高。结论通过对甲型副伤寒沙门菌培养条件进行优化,获得较高的菌体产量,为后期诊断试剂盒的开发奠定了基础。     

鲍曼不动杆菌耐药持留菌的特征及Ⅱ型毒素-抗毒素系统的多样性

摘要:【目的】研究鲍曼不动杆菌持留菌的特征,分析鲍曼不动杆菌Ⅱ型毒素-抗毒素(TA)系统的多样性及分布,探讨TA系统与持留菌形成的潜在关联。【方法】采用分属于6 大类中的6种不同抗生素分别筛选的方法分离并定量鲍曼不动杆菌的持留菌;应用PSI-BLAST及TBLASTN程序分析721株鲍曼不动杆菌中的Ⅱ型TA系统;通过聚合酶链式反应(PCR)方法检测44株临床多重耐药(MDR)的鲍曼不动杆菌中5个Ⅱ型TA系统的分布。【结果】我们发现不同抗生素处理得到的鲍曼不动杆菌持留菌的数量并不相同;对多数抗生素而言,浓度越高,得到的持留菌数量越少;处于生长平台期的菌株中相比对数期含有更多的持留菌;多粘菌素B及妥布霉素均具有杀灭部分持留菌的能力;鲍曼不动杆菌所有菌株中均含有Ⅱ型TA系统,HTH/GNAT类型在菌株中分布最为广泛;所有700余株鲍曼不动杆菌基因组中共含有15个潜在的Ⅱ型TA系统;三类普遍存在于已知基因组中的明确功能的Ⅱ型TA系统在临床多重耐药菌株中同样分布广泛,且HigB/HigA的表达量在标准株的持留菌中显著增高。【结论】鲍曼不动杆菌的持留菌水平与菌株的生长状态、抗生素的种类及浓度密切相关。Ⅱ型TA系统在鲍曼不动杆菌已知基因组和临床多重耐药菌株中普遍存在,其中,HTH/GNAT、GP49/Cro(HigB/HigA)及DUF497/COG3514三种类型的Ⅱ型TA系统可能在鲍曼不动杆菌持留菌的形成中扮演重要角色。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)降解菌Devosia sp. A8和Paracoccus yeei A9的生理生化及生长特性

由菌株A8和A9组成的人工混菌能够有效地降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)毒素。为了对双菌降解系统进行深入了解,对这2株菌进行严格的生理生化试验,并通过单因素设计,探究不同培养条件(时间、培养基、温度、pH、NaCl质量浓度、抗生素及摇床转速)对其生长状况的影响。通过生理生化试验,进一步确认了菌株A8和A9分别为Devosia sp.和Paracoccus yeei。生长特性研究结果表明：Devosia sp. A8最适宜生长的培养基为多价蛋白胨-酵母粉(PY)培养基,最适pH为8.0,最适培养温度为30℃,最适NaCl质量浓度为5 g/L;而P.yeei A9的最适培养基则为超优肉汤(SOC)培养基,最适pH为7.0～8.0,最适培养温度为35℃,最适NaCl质量浓度为2 g/L。Devosia sp. A8和P.yeei A9的培养条件较为温和,为以后大规模发酵生产以开发DON降解菌剂或酶制剂提供了有利条件。     

嗜冷微生物和冷育微生物的研究——Ⅳ.冰箱中产生怪味的冷育微生物

由冰箱中存放的豆制品、猪肉、蔬菜等食品中分离到34株产生不良气味的细菌。它们都是革兰氏阴性细菌,经鉴定分别属于假单胞菌属、气杆菌属、产碱菌属、欧文氏菌属和沙门氏菌属。它们都可以在5℃以下生长,最高生长温度均高于30℃,故都是冷育细菌。经气相色谱分析,形成不良气味的原因是在细菌生长过程中,产生了硫化氢、氨和一些挥发性有机酸等代谢产物,不良气味即这些混合气林所致。     

嗜冷微生物和冷育微生物的研究：Ⅳ.冰箱中产生怪味的冷育微生物

由冰箱中存放的豆制品、猪肉、蔬菜等食品中分离到34株产生不良气味的细菌。它们都是革兰氏阴性细菌,经鉴定分别属于假单胞菌属、气杆菌属、产碱菌属、欧文氏菌属和沙门氏菌属。它们都可以在5℃以下生长,最高生长温度均高于30℃,故都是冷育细菌。经气相色谱分析,形成不良气味的原因是在细菌生长过程中,产生了硫化氢、氨和一些挥发性有机酸等代谢产物,不良气味即这些混合气林所致。     

外界高渗环境对枯草芽孢杆菌胞内自由脯氨酸含量的影响

枯草芽孢杆菌(93151)在基本培养基中培养,可耐受高达8%NaCl浓度,而在10%NaCl条件下96h内未见生长。随胞外NaCl浓度的增加,其胞内自由脯氨酸的含量相应明显增加,在8%NaCl浓度下胞内脯氨酸含量可达2.944mg·g-1干细胞重,与无NaCl条件下相比,增加了1572%,而对照菌大肠杆菌仅可耐受4%NaCl浓度,并且在不同NaCl浓度下,胞内脯氨酸含量变化不明显。     

4株海生毛壳菌生物学特性的研究

研究了营养、温度、光照和pH值对4株海生毛壳菌(Chaetomium spp.)的生长及孢子形成和萌发的影响,为进一步利用海洋真菌提供理论依据。结果表明:4株毛壳菌在10～35℃均能生长,WHM12、WHM33和WHM34的生长适温为20～30℃,WHM41的生长适温为15～25℃;4株菌在燕麦片琼脂(OA)培养基和YGA培养基上生长最好;在pH值5～10均能生长,但喜中性及偏碱性的环境;全黑暗处理有利于4株菌的生长;除光照外,营养、温度和pH值对其产孢均有影响。     

耐盐碱菌株的分离筛选及生物学特性和盐碱去除效率的研究

将采集于黑龙江省大庆市盐碱地的土壤样品经适当稀释后,涂布于高盐碱的培养基中,分离纯化获得41株菌。经过不断分别或同时提高培养基的盐、碱浓度进行耐盐碱菌株的筛选,获得1株耐盐碱菌株7,其在pH值13且盐(NaCl)浓度达到200g.L-1的培养基中仍可生长,该菌株既属于极端嗜盐微生物又属于极端嗜碱微生物。分别于不同碳源、氮源、碳氮比、初始pH值和培养温度条件下,对菌株7的生物学特性和盐、碱去除能力进行研究。结果表明,该菌株生长和去除盐碱的最佳碳源为牛肉膏;最佳氮源为蛋白胨;碳氮比为4:1时,最有利于菌株的生长和对盐、碱的去除;菌株生长的最适初始pH值为9.5,最适温度为20℃,而盐、碱去除的最佳温度则为30～35℃。     

盐分、温度及其互作对羊草种子发芽率和幼苗生长的影响

羊草是多年生优质牧草,也是中国松嫩平原的优势建群植物。研究了羊草种子在8种浓度（0、50、100、150、200、300、400和500mmol／L）NaCl胁迫及将胁迫解除后在3种变温（16／28℃、5／28℃和5／35℃）条件下的发芽率以及幼苗的生长变化。双因素方差分析表明,NaCl胁迫解除前后盐浓度、温度及其互作均极显著影响羊草种子萌发和幼苗生长。胁迫解除前,在3种温度下,羊草种子发芽率最高出现在没有盐胁迫的条件下,随着NaCl浓度的增加,发芽率呈下降趋势。5／28℃下,NaCl溶液对种子萌发抑制最小,浓度达到200mmol／L时,仍有25．3％的种子萌发;在5／35℃下,对种子萌发抑制作用最大,浓度超过100mmol／L时,种子萌发被完全抑制;16／28℃的处理介于二者之间。胁迫解除后,羊草种子在3种温度下发芽趋势不同。16／28℃下表现为NaCl浓度较大的处理发芽率较高,5／28℃下则呈先上升（0～150mmol/L）后基本保持不变趋势;5／35℃下则呈先上升后下降趋势。盐胁迫下,羊草幼苗在16／28℃变温下生长最好,其次为5／28℃,5／35℃生长最差。盐胁迫解除后,16／28℃和5／28℃下,0～100mmol／LNaCl处理的幼苗根长和苗长随浓度增加而显著上升,大于此浓度变化较小;在5／35℃下,100mmol/LNaCl处理的幼苗根长和苗长最大,而浓度大于100mmol／L时,则随着NaCl浓度增加呈下降趋势。     

羟基酪醇抑菌活性及抑菌稳定性研究

本研究探究了羟基酪醇对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌和枯草芽孢杆菌等四种供试菌的抑菌活性及抑菌稳定性。采用试管半倍稀释法确定MIC和MBC,并探讨羟基酪醇对供试菌的生长和细胞膜完整性的影响以及在不同介质下的抑菌稳定性。结果表明,羟基酪醇对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌和枯草芽孢杆菌的MIC分别为0.625、0.625、1.250、2.500 mg/mL,MBC分别为1.250、1.250、2.500、5.000 mg/mL。与对照组相比,四种供试菌核酸和可溶性蛋白泄漏显著,细胞膜的完整性被破坏。在不同NaCl浓度下,羟基酪醇对枯草芽孢杆菌的抑菌活性稳定;在1.0%和2.0%NaCl浓度下,羟基酪醇对大肠杆菌和铜绿假单胞杆菌的抑菌活性稳定;在2.0%NaCl介质下低浓度的羟基酪醇对金黄色葡萄球菌的抑菌活性稳定,在0.5%、1.5%和2.0%NaCl介质下高浓度的羟基酪醇对金黄色葡萄球菌的抑菌活性稳定。在蔗糖介质中,羟基酪醇对四种供试菌的抑菌活性均不稳定。因此,羟基酪醇可以作为一种新型的防腐剂。     

环境压力条件与超高压对致病性副溶血性弧菌耐药性的影响（英文）

分析不同环境压力条件(温度、pH、渗透压和超高压)对12株致病性副溶血性弧菌耐药性的影响。利用微量肉汤稀释法测定菌株在不同温度(37℃和30℃)、渗透压(1%和6%NaCl)、pH(6.0和9.0)及超高压(180、250和300 MPa)条件影响下,其对所测抗生素的最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,在1%和6%NaCl质量分数、pH 9.0条件下,副溶血性弧菌的耐药性增强,而在30℃、pH 6和超高压条件影响下,其耐药性减弱。此外,菌株在所测环境压力条件影响下,其对环丙沙星和头孢类抗生素的耐药性基本保持不变。环境压力条件的改变可能会增强致病性副溶血性弧菌的耐药性。     

南极海冰细菌中产低温 α-淀粉酶菌株的发酵和酶学特性的初步研究

从147株南极海冰细菌中筛选出一株高产低温a-淀粉酶的菌株Pseudoalteromonas sp.AN175。生长发酵单因素试验表明,菌株AN175在1%麦芽糖、0.5%酵母粉、0.01%磷酸铁、0.5%氯化钙、1%可溶性淀粉、5%NaCl、pH 6.0的培养基,10℃,30%装液量,130 r/min条件下振荡培养9 d可达到最大酶活132.5 U/mL,为优化前的2倍多。生长和产酶试验表明,该菌生长较常温菌缓慢,酶分泌时间滞后。粗酶特性研究显示,该酶催化的最适条件为温度30℃,pH值8.0。     

金黄色葡萄球菌sdhCAB操纵子影响持留菌形成机制的研究

持留菌是细菌群体中的一小部分细菌,可耐受致死浓度抗生素的处理,是引起慢性感染的重要原因。金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S. aureus)作为常见致病菌,有重要临床意义。分别敲除sdhA和sdhB后,金黄色葡萄球菌持留菌形成水平下降,但sdhCAB操纵子对持留菌形成的作用及机制尚不明确。本研究敲除sdh操纵子,通过酸压力、氧化压力、热压力及抗生素压力实验检测敲除株的持留菌水平,转录组测序检测敲除株的代谢通路变化,高通量微生物细胞表型检测评估敲除株的代谢水平变化。结果显示,敲除sdhCAB或sdhAB后,金黄色葡萄球菌对酸压力、氧化压力的耐受能力均下降;而在抗生素压力、热压力条件下,分别仅sdhCAB敲除株、sdhAB敲除株耐受能力下降。转录组测序发现,sdhCAB敲除后三羧酸循环、甲烷代谢通路及聚合酶Ⅳ等基因表达上调,耐药相关基因、氨基酸代谢基因、糖类代谢基因、卟啉代谢基因及一些转运体基因等表达下调,提示这些通路的基因参与sdhCAB影响持留菌形成的过程。此外,高通量微生物细胞表型检测发现,敲除sdhCAB可降低金黄色葡萄球菌对琥珀酸、柠檬酸、糖原、L-天冬氨酸等64种碳源的代谢。结果提示,sdhCAB操纵子对金黄色葡萄球菌持留菌形成水平有重要影响。本研究初步阐明了sdhCAB操纵子影响持留菌形成的可能机制,为研究和治疗金黄色葡萄球菌慢性感染提供了新的思路。     

木质层孔菌原生质体的制备与再生条件的研究

目的：提高木质层孔菌原生质体的产量和再生率,为进一步诱变育种提高菌株产木质纤维素酶活力打下基础。方法：通过单因素实验分别筛选合适的酶浓度、菌丝的菌龄、酶解温度、酶解时间、渗透压稳定剂与pH值。结果：在酶解液浓度为2.0%纤维素酶＋2.0%蜗牛酶、菌龄60h、酶解温度32℃、酶解时间3h,以0.8mol/L的NaCl溶液为渗透压稳定剂,pH值为5.0时,原生质体形成量达4.13×10^5个/mL,再生率可达6.95%。有效地提高了木质层孔菌原生质体的产量和再生率。     

芽孢杆菌DY-32对原油的降粘作用

筛选得到了一株能利用原油为碳源生长的菌株DY－32,实验中发现此菌对不同的原油都有降粘效果。环境因素如培养时间、接种量及培养温度对降粘率影响很大,确定其最适降粘温度为55℃,而培养基的pH值和NaCl浓度对降粘率的影响不显著,但辅助营养物质的加入能够提高DY－32的降粘率。气相色谱的结果表明原油经DY－32作用后,其中的一些组分被降解,因此,此菌能降粘的主要机理是通过其在原油培养基中生长利用了原油中的组分达到了降粘目的。实验证明此菌在微生物提高原油采收率及烃类物质的生物修复中有很好的应用潜力。     

以四氢嘧啶为主要相容性溶质的中度嗜盐菌I15的分离和特性研究

从草地土壤中分离到一株中度嗜盐菌I15,经过16S rDNA(GenBank登录号为DQ010162)序列分析、形态学和生理生化特征分析,该菌株初步鉴定为Virgibacillus marismortui。I15能在0%～25%NaCl的培养基中生长,最适生长NaCl浓度为10%,最适生长温度为30℃,最适pH为7.5～8.0。在高盐条件下,I15细胞内主要的相容性溶质为四氢嘧啶,在15%NaCl培养基中其含量达到1.608mmol/(g\5cdw),占到相容性溶质总摩尔含量的89.6%。渗透冲击试验表明I15细胞内四氢嘧啶在低渗冲击时能够快速分泌到细胞外,在高渗冲击冲剂时能够较快地重新合成。     

NaCl胁迫对疣苞滨藜种子萌发和早期幼苗生长的影响

在光/暗(12 h/12 h)条件下研究了温度、苞片和NaCl浓度对疣苞滨藜种子萌发及其恢复的影响,同时观察萌发后幼根在NaCl中的生长和恢复情况.结果显示:(1)疣苞滨藜种子在温度周期为5℃/2℃、15℃/5℃、20℃/10℃、25℃/5℃、25℃/15℃中处理12 d后种子萌发率均达到80%以上,其最适萌发温度为25℃/15℃.(2)苞片对种子萌发不存在抑制作用,但能够延缓萌发时间.(3)低浓度的NaCl能促进种子萌发和幼根的伸长,且在0.2 mol/L时达到最大,在0.8 mol/L时完全抑制种子萌发和幼苗的生长.(4)经过不同浓度NaCl预处理后的种子,其萌发恢复率随原处理浓度的升高而升高,且最终萌发率都高于对照.研究表明,NaCl处理对疣苞滨藜种子没有造成伤害,其抑制萌发是通过渗透效应而不是离子毒害;疣苞滨藜种子和幼苗对盐分的耐性是其适应盐渍荒漠环境的重要原因.     

嗜盐菌HBCC-2的16S rRNA基因测序分析及其培养特性

从连云港台南盐场海盐生产区中分离纯化到一株嗜盐古菌HBCC-2,该菌株经PCR扩增后,测定其16S rRNA基因序列,采用BLAST软件对基因库中基因序列进行同源性比较,选取其相似性序列,采用Clustalx1.8和MEGA3.1软件对其16S rDNA序列进行了系统发育分析研究,结果表明HBCC-2菌株与菌株Halorubrum sp.GSL5.48的相似性达99%,结合其形态观察及生理生化反应特性,初步确定该菌株属于嗜盐红菌属(Halorubrum),菌株HBCC-2的16S rDNA序列已登陆到GenBank,其序列号为EF687739.通过比较不同NaCl浓度、pH和培养温度对该菌株生长的影响情况,研究了该菌株的生长特性,结果表明NaCl浓度为4mol/L、温度为35℃和pH为7.0的培养条件下其生长最佳.