三、轮状病毒基因分析 (病毒核酸的聚丙烯酰胺凝胶电泳)

<正>轮状病毒属呼肠孤病毒科(Reoviridae)。此科特征是:病毒直径为60～80nm。双链RNA基因组是由10或11个片段组成,总分子量为10—16×10~6道尔顿,20面对称体,无包膜,能耐脂溶剂,成熟于细胞浆内有高电子密度的病毒核心。     

黄病毒的分子生物学——进展与展望

1984年国际病毒分类委员会(ICTV)建议将黄病毒属从披膜病毒科(Togaviridae)划出来成为新的病毒科——黄病毒科(Flaviviridae)。Westaway等给黄病毒科作了如下的定义:由一组有包膜的单链RNA病毒组成,直径为40—50nm。包膜通常含糖蛋白;RNA有传染性,RNA的分子量约为4×10~6Dalton,3′末端缺乏多聚腺苷酸(PolyA)。体外实验中,病毒基因组RNA可翻译出结构蛋白,无亚基因组(Subgenomic)mRNA合成。成熟病毒颗粒的形态发生位于改变了的内浆网小池(cisternae)中。黄病毒科目前仪由黄病毒属(Flavivirus)组成,黄病毒属大约包括70种病毒,其代     

一种含有单链RNA的香菇球状病毒

从生长不正常的香菇(Lentinus edodes(Berk.)Sing)菌株中分离到一种等轴对称含单链RNA的病毒颗粒。病毒颗粒在电镜下直径为33～34nm,在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中病毒外壳蛋白分子量为22000道尔顿。病毒核酸径DNase1和SI酶解试验及热变性紫外吸收曲线试验证明为单链RNA,在1.5％的琼脂糖凝胶电泳中,病毒核酸呈现一条带,分子量为2.38×10~6道尔顿。     

反转录病毒与致癌基因

RNA 肿瘤病毒,现在一般称之为反转录病毒,是一组动物病毒的总称。自1908年首先发现鸡白血病病毒,1911年发现鸡肉瘤病毒以后,RNA肿瘤病毒一直被认为是某些小鼠与禽类白血病和肉瘤的病因。最近几年,还发现反转录病毒在一些家养动物及猴子中也可引起肿瘤。反转录病毒分布广泛,不仅分布于不同的动物肿瘤中,而且也分布于正常的鸡与小鼠中。与大多数其它类型的动物病毒不同,反转录病毒的感染很少导致细胞的破坏。一般认为,病毒感染引起细胞的死亡,是细胞对外源性毒性因子的敏感性增高所致。然而肉瘤病毒感染的细胞转化为恶性细胞,可以传代,同时产生     

云南省两株环状病毒的分离和鉴定

从云南省采集的中华(?)蚊和棕头库蚊中,分离到两株对3周鼠致死的病毒。血清学鉴定表明,该病毒与披膜病毒科(甲病毒属)、黄病毒科、布尼亚病毒科病毒的免疫腹水,以及呼肠孤病毒科环状病毒(M14)的免疫腹水均不发生反应。电镜观察病毒为球形,具双层壳体的颗粒,直径为70.35±3.07nm,毒粒常常和颗粒状包涵体及管状结构相连;核衣壳具有环状病毒特有的20面体对称结构,直径为56.06±2.42nm。在负染标本中能观察到直径为38.36±2.42nm的核心颗粒。该病毒对乙醚相对抵抗,对酸,热敏感。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,病毒基因组由10条RNA片段组成,分子量在0.3～2.5×10~6道尔顿之间,病毒基因组RNA带形分布(3-3-3-1)类似环状病毒,但与已知环状病毒RNA带形分布都有不同。     

疱疹病毒的微生态问题

疱疹病毒的分子生物学基础疱疹病毒科在医学领域中熟知已久,可分为三个亚科,α、β和γ。α亚科包括人和动物的疱疹病毒,如人的单纯疱疹病毒1型、2型(HSV—1,2),牛乳腺炎病毒,假狂犬病毒,马流产病毒等,其 DNA 分子量范围为87～105×10~6d。β亚科包括人和鼠的巨细胞病毒(HCMV,MCMV),其DNA 分子量为130～150×10~6d.γ亚科包括人的Epstein-Barr 病毒(EBV)和几种灵长类(猴)病毒,其 DNA 分子量为85～115×10~6d。最近发现的人 B 细胞白血病病毒(HBLV),称为人疱疹病毒—6型(HHV—6),亚科不明。     

小麦丛矮病毒核酸的研究

小麦丛矮病毒(Wheat Rosette Stunt Virus.以下简称WRSV)的核酸可以通过SDS-尿素处理和苯酚抽提的方法分离获得。琼脂糖凝胶电泳测得核酸的分子量约为4.4×10~6道尔顿。核酸温度熔解曲线的测定证明它是一个单链的RNA。在电子显微镜下可观察到两种长度的核酸分子,一种长度约为3.5～4.0μ,相当于碱基数为14,000～16,000,另一种约为其一半;并能看到RNA的一些二级结构。     

黄地老虎核型多角体病毒的一些特性

黄地老虎核型多角体病毒(Agrotis segetum Nulear Polyhedrosis Virus简称AsNPV)的国内分离株(AsNPV^C),多角体呈六边形,大小1.7—2.6μm,为多粒包埋类型.每个病毒束内有2—7个核衣壳,大小约52nm×308nm.感染烟青虫(Heliothis assttlta)后分离到的多角体(As-HaNPV)其形状不规则,大小0.7—2.6μm,亦为多粒包埋类型.核衣壳2—6个不等,大小约40nm×300nm.EcoR1和HindⅢ限制性内切酶电泳图谱分析表明,AsNPV^CDNA和As-HaNPV DNA的EcoRI、HindIII酶切图谱一致,两者与HaNPV DNA的EcoRI,HindⅢ酶切图谱存在明显差异,AsNPV^C DNA的EcoRI酶切图谱共有15个片段,分子量在12.74×10⁶—1.18×10⁶道尔顿之间,总分子量约88.6×10⁶道尔顿,相当于134.25kbp.HaNPV DNA的EcoRI酶切图谱共有19个片段,分子量在13.89×10⁶—1.10×10⁶道尔顿之间,总分子量约93.86×10⁶道尔顿,相当于142.25kbp.AsNPV对黄地老虎2龄和4龄幼虫以及对烟青虫4龄幼虫的LD_{50分别为:1.4×10⁵pIB、7.4×10⁴PIB和2.61×10⁴PIB.}     

引发“SARS”的病原体

引发“SARS”的病原体是病毒家族中一种新的冠状病毒 (Coronavirus)变种。冠状病毒因在电子显微镜下呈球形 ,上有突起 ,形状像皇冠而得名 ,列为冠状病毒科 (Soronaviridae)。这一科病毒直径 75～ 160nm ,中央是不同密度的无定形物质 ,外有脂质包膜 ,膜上排列间隔较宽的突起 ,其形状随不同病毒而呈现不同形状 ,如圆端花瓣形、圆锥形、T形等。病毒基因组为连续线形单链RNA ,分子量通常为 5 5× 10 6 ～ 6 1× 10 6 。病毒在寄主细胞质中复制 ,通过其内质网膜出芽成熟。通过组织或器官培养可分离、培养此病毒。此科包括人冠状病毒、禽传染…     

肿瘤病毒及艾滋病病毒的分子生物学

肿瘤病毒——凡能在人和动物体内诱发肿瘤或转化体外培养细胞的病毒叫肿瘤病毒。人类的肿瘤病毒是在动物肿瘤病毒学基础上发展起来的。Ellerman和Bang首先(1908年)发现了鸡白血病,三年后Rous又发现了鸡肉瘤,30年代后相继发现兔、蛙、狗、鼠等种属的肿瘤病毒,特别是1951年Gross首先发现小鼠白血病病毒。近年来发现一些人类肿瘤和病毒的关系极为密切,如:EB病毒(Epstein-Barr Virus,1964年)和伯基特淋巴瘤、鼻咽癌;乙型肝炎病毒和原发性肝癌;人乳头状瘤一些病毒株和子宫颈癌等都有些证据。更重要是     

肿瘤病毒的发现历程及在肿瘤发生机制中的研究意义

1911年Peyton Rous发现禽肉瘤病毒,从而建立了肿瘤病毒学这一学科领域。20世纪30年代,Richard发现哺乳动物肿瘤病毒,60年代发现第一个人类肿瘤病毒--EB病毒,随后相继鉴定出乙型肝炎病毒(HBV)和乳头状瘤病毒(HPV)。肿瘤病毒的深入研究带动了癌基因概念的确立和抑癌基因功能的发现,促进癌症疫苗的研究,后者可以抑制病毒的传染性并降低肿瘤的发病率。20世纪80-90年代发现了人T细胞白血病Ⅰ型病毒(HTLV-1),丙型肝炎病毒(HVC)及卡波西肉瘤病毒(KSHV)。目前已知6种病毒(EBV、HBV、HPV、HTLV-1、HCV、KSHV)引起世界范围10%-15%的癌症,因此,病毒不仅是许多人类癌症的病原体,还可以作为揭示人类恶性肿瘤发病机制的研究工具。     

用杆状病毒载体在昆虫细胞内大量合成Ⅰ型人T细胞白血病病毒功能性P40~x蛋白

人类Ⅰ型T细胞白血病病毒(HTLV-1)是嗜T淋巴细胞病毒,它与一种特殊形式的成人T细胞白血病有关,HTLA-1基因组3′端编码产物-p40~x是一种4万道尔顿的多肽,对HTLV-1长末端重复序列(LTR)内启动子的转录有强的反式激活作用(trans-activation),因而它为病毒复制所必需。 目前已知利用杆状病毒载体表达的外源基因产物有10多种。为了获得足量蛋白以研究p40~x的结构及作     

通过基因组定量研究猪瘟病毒在细胞中的增殖特性

应用间接免疫荧光、Real-time PCR和病毒感染滴度(TCID50)测定技术,分别从病毒抗原、病毒基因组RNA复制水平和病毒感染滴度变化3个方面,研究了猪瘟病毒(CSFV)在PK-15细胞中增殖的特点,用猪瘟病毒石门株感染96孔板培养的细胞,1×102个TCID50/孔,间接免疫荧光检测结果显示感染后8h能检测到被荧光抗体染色的感染细胞,随感染时间的延长,出现荧光的细胞数量逐渐增多,在感染后72h,几乎所有细胞均能出现荧光。Real-time PCR结果显示在细胞感染初期的8~24h,病毒的基因组RNA复制呈加速趋势,其拷贝数在感染后72h达到高峰。此外,在感染后8h能检测到病毒基因组负链RNA转录,不过负链RNA在病毒增殖过程中维持在较低的水平。TCID50测定结果表明CSFV的感染滴度增加趋势与基因组类似,在病毒感染8h后能检测到具有感染性的子代病毒,感染滴度在8~20h之间逐渐增长,24~48h之间增长速度稍减慢,在感染后48~52h达到高峰,能在72h之内维持较高的感染滴度。     

Sabin2型脊髓灰质炎病毒适应人胚肺二倍体细胞不同代次病毒滴度与5′端非编码区变异关系

脊髓灰质炎病毒(Poliovirus)是一类无包膜单股正链RNA病毒,基因组长约7．5kb。其5′端非编码区由约742个核苷酸长,主要与病毒RNA复制、蛋白翻译起始、病毒颗粒的装配及病毒的细胞适应减毒及神经毒力密切相关。我们研究发现,脊髓灰质炎病毒(Sabin株)在人胚肺二倍体细胞(KME17)上致细胞病变较猴肾细胞慢,病毒产量亦明显低于恒河猴肾细胞培养,国内外也有类似的报道。     

我国蚊虫分离的一种新型胞质多形体病毒

0507BS3是从中国新疆喀什地区采集的库蚊和按蚊混合蚊标本分离的病毒株,对C6/36细胞致病变而对Ve-ro和BHK-21细胞不致病变。电镜观察显示病毒颗粒呈圆球形,直径约60nm(n=20),无包膜,单层衣壳,衣壳内有中央核。基因组核酸电泳显示基因组包括10条双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)片段。病毒第10基因片段核酸序列测定显示该片段全长964bp(GenBankID:FJ150869),具有单一开放读码框,编码长度为275个氨基酸的蛋白,分子量约30.8kD。病毒第10基因片段核酸序列比对未发现相似的病毒核酸序列,氨基酸序列与胞质多形体病毒(Cytoplasmic polyhedrosis virus,CPV)第10基因片段编码的多形体蛋白部分区段匹配。病毒第10基因片段和已知各型CPV第10基因片段核酸序列共同进行系统进化分析显示该病毒位于独立的进化分枝,提示0507BS3病毒可能是一种新型CPV病毒。     

蓖麻蚕核型多角体病毒DNA的物理图谱

昆虫的核型多角体病毒(NPV)属杆状病毒属(Baculovirus),具有70—100×10~6道尔顿的双链、环形以及超螺旋的基因组(Genome)。近年,国际上不少实验室以NPV为材料,从事病毒生物学、病毒遗传学的研究,其中以苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)NPV的研究最为集中。国内,严家骐等在蓖麻蚕(Ar)NPV-DNA,李载平等、马延高等在家蚕NPV-DNA方面分别从DNA的分离纯化,理化性质、酶切特性以及生物活性方面有较详细的研究。     

野田村病毒RNA的复制机制

野田村病毒科Nodaviradae分为2个属,分别为主要感染昆虫的α野田村病毒属(Alphanodavirus)和主要感染鱼类的β野田村病毒属(Betanodavirus)。野田村病毒的基因组由2条单链正义RNA分子(RNA1和RNA2)所组成,RNA1编码蛋白A,即病毒负责复制病毒两条基因组的依赖RNA的RNA聚合酶催化亚基。RNA2编码衣壳前体蛋白α,此前体蛋白α先组装成原病毒粒子,再经历一次自我催化的成熟切割成2个病毒的衣壳蛋白β和γ,就成了成熟的有感染性的病毒粒子。在RNA复制过程中,从RNA1的3′末端会合成一个不被包装进病毒粒子的亚基因组RNA3。RNA1能在无RNA2的情况下自我复制,并持续地产生亚基因组RNA3,RNA3的合成采取的是提前终止机制。本文还介绍了野田村病毒复制的调节、非结构蛋白的功能和病毒复制在细胞内的定位。     

昆虫杆状病毒的增强子(Enhancer)

人们早已发现,许多真核细胞DNA、动物病毒DNA和RNA肿瘤病毒基因组具有一种基因调控序列,能增加它所连接基因的转录效率,这种核苷酸序列称之为增强子或激活子(Enhancer或Activator)。最近,美国科学家Guarino和Summers等人首次发现昆虫杆状病毒苜蓿尺蠖丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica Nuclear Polyhedrosis Virus,AcNPV)基因组中有散在分布的增强子序列。它们是一种特殊方式的核苷酸重复序列,可大大增加病毒延迟早期基因(Delayed-Early Gene)的转录效     

流行性出血热病毒核酸的提取

本文报告流行性出血热R22和A9株病毒培养,同位素标记及核酸提取的初步研究,並获得了该病毒核酸的3个片段即L、M、S、分子量分别约为:3.8、1.9和0.86×10~5道尔顿,不论用20～70％蔗糖密度梯度离心提纯的病毒,或用30％蔗糖垫层离心的粗制病毒,均获同样结果,但多数情况下,用蔗糖密度梯度离心时,除病毒峰外,还发现主要由细胞组份(即线粒体和核糖体等)组成的另一峰,并经常影响病毒RNA的提取,对如何获得纯净病毒及其核酸进行了讨论。     

肿瘤细胞内的细胞骨架(续)

Ⅶ、癌基因产物和细胞骨架 A.癌基因产物和粘着斑为了理解细胞转化作用诱导细胞骨架变化的机理,其发展最快的研究途径之一,可能就是观察不同的癌基因产物的行为和它们对细胞骨架的关系。pp60~(are)或RNA肿瘤病毒RSV的Src癌基因已被认为是与这种病毒转化的细胞中的表型改变有关(综述见参考文献201)。起初曾经指出,作为RSV病毒转化特点