乳化剂OP-115加水杨酸钠体系闪烁作用的研究

液体闪烁测量法作为一种新颖的同位素测量技术,具有效率高、样品制备简单、无自吸收等优点,应用十分广泛。闪烁液在测量中起着容纳样品,进行能量传递和转换的作用,配方种类繁多,各有特点。Thomas等曾报道:在使用Triton X-100作切仑科夫计数的波长移位剂时,加入水杨酸钠等其它波长移位剂后,该体系即由切仑科夫计数体系变为液体闪烁体系。我们在实验中使用国产乳化剂 OP-115代替Triton X-100得到类似的结果。     

DMSO、Tween-20和Triton X-100对野葛悬浮细胞异黄酮生产的影响

二甲基亚砜(DMSO)、Tween-20和Triton X-100可以增大悬浮培养细胞的细胞膜和液泡膜的透性,促进细胞内次生代谢物的释放,从而影响这些次生代谢产物的产量。为了提高野葛悬浮细胞中异黄酮类化合物的产量,以1％、3％和5％的DMSO、Tween-20和Triton X-100分别处理野葛叶悬浮细胞,结果显示,Tween-20和Triton X-100皆明显促进细胞生物量和葛根素和异黄酮化合物的释放。5％的Triton X-100处理3d,促进细胞产生总异黄酮化合物,增产率达40．6％。     

不同方法制备大鼠肝脏脱细胞支架及其免疫原性研究

目的:肝脏脱细胞支架(decellularized liver bioscaffold,DLB)在组织工程研究中具有良好前景,但对DLB的免疫原性尚未见探讨.本研究利用不同方案制备大鼠DLB,检测支架成分和体内重塑反应,为制备出低免疫原性的DLB提供改进依据.方法:选取文献报道的三种方案(分别以SDS,Triton X-100和NP-40为主要洗脱成分),制备F344大鼠DLB,进行HE和Masson染色,检测DLB中DNA、氨基葡聚糖(GAG)以及羟脯氨酸(HYP)含量;再将DLB埋植于C57BL/6小鼠的背部皮下,于术后第3、7和14天取出后进行形态学观察和组织学评分.结果:三种方案均成功制备出符合脱细胞标准的大鼠DLB;形态学结果提示TritonX-100和NP-40方案较SDS方案能更好地保护肝脏超微结构;成分检测结果发现NP-40方案去除DNA的能力显著强于SDS和Triton X-100方案(P＜0.05),而对GAG含量的洗脱作用最弱(P＜0.05);异种体内埋置实验提示NP-40方案制备的DLB引起的免疫反应强度明显弱于SDS和Triton X-100方案,体内重塑结局评分显著高于SDS和Triton X-100方案.结论:与SDS和TritonX-100方案相比,NP-40方案能更有效地去除肝脏DNA,较好地保留GAG,诱导移植受体对DLB的良性重塑反应,为进一步的体内研究提供更优化的支架.     

S/D灭活血浆内脂包膜病毒及病毒灭活血浆的研究

研究磷酸三丁酯(TNBP)／Triton X-100对血浆内脂包膜病毒的灭活效果。用VSV病毒和Sindbis病毒作指示病毒,加入血浆后再加磷酸三丁酯／Triton X-100,观察病毒的滴度变化及对血浆蛋白的影响。结果发现终浓度各为1％的磷酸三丁酯／Triton X-100在60min内可以灭活血浆内的两种指示病毒,而血浆蛋白的组成和功能变化很小。经层折、超滤后血浆内磷酸三丁酯和Triton X-100的残余量分别低于5μg/ml,表明S／D处理血浆的安全性和治疗作用都很好,其制剂冰冻血浆或冻干血浆可用于临床治疗凝血因子缺乏症,或用作血容量扩张剂。     

FLUTAX法显示纤毛虫微管胞器的改良

在参考Arregui等报道的方法的基础上,对紫杉醇荧光染色(FLUTAX)显示纤毛虫细胞微管胞器的流程进行了改进,对其中一些试剂的配方作了调整,改进了多聚赖氨酸涂布玻片、皂苷孵育、多聚甲醛固定和Triton X-100渗透等步骤。     

聚乙烯醇脱氢酶的提取及检测

为解决结合在细胞上的可溶性蛋白聚乙烯醇脱氢酶（PVADH）的检测困难问题,从提取及检测两方面对该酶进行研究,并对检测方法进行改进。结果表明,非离子型表面活性剂Triton X-100对可溶性蛋白PVADH的提取效果优于离子型表面活性剂炕基苯磺酸钠（LAS）和溴化十六烷基吡啶（CPB）,酶活力比LAS和CPB提取后所得酶活力分别提高246．5％和831．3％。而非离子型表面活性剂中,Triton X-100与Tween80相比,所得最高酶活提高了101．4％。Triton X—100浓度和提取时间对测定有明显影响,以1％Triton X-100提取18h为宜,最高比酶活达14．9U／g。在PVADH检测体系中,加入电子受体启动反应比加入酶液与底物启动反应可使酶活性分别提高60．6％和126．5％;酶液与吡咯喹啉醌（PQQ）预先保温对检测该酶活性是十分重要的,可使酶活性提高59．1％.在检测系统中加入的KCN、CaCl2和PQQ的适宜浓度分别为1．ommol／L、0．5mmol／L和2μmol／L,可使测定酶活分别提高37．1％、38．7％和214．0％．     

基于遗传算法的光合细菌过氧化物酶电泳分析方法的建立

建立光合细菌中过氧化物酶的酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)分析方法。以电泳图谱的谱带数和灰度为指标, 运用正交试验和遗传算法对该方法的电泳条件进行优化。实验结果表明, 当凝胶中Triton X-100含量为0.31%、菌体破碎时间为19 min、样品中Triton X-100含量为0.79%时, 可获得清晰的沼泽红假单胞菌过氧化物酶图谱; 当凝胶中Triton X-100含量为0.27%、菌体破碎时间为16 min、样品中Triton X-100含量为0.76%时, 可获得清晰的球形红细菌过氧化物酶图谱。本方法为光合细菌中过氧化物酶的分析提供了一种新的、简单、快速的手段。     

胆碱脱氢酶与脂质体的重组

 用预先制备的脂质体与含Triton X-100的胆碱脱氢酶保温随后用Bio-beadsSM-2去除去垢剂而使酶重组到脂质体,Triton X-100的浓度,磷脂-蛋白比,Mg~(2+),pH等均影响重组,脂质体的大小在重组中不是关键因素,重组酶的活力比纯化酶增加70％,重组酶对PMS的Km,相转变温度及活化能均与线粒体内膜接近而不同于纯化酶。     

以Triton X-114液相分离法去除质粒溶液中的内毒素

目的：采用TritonX-114液相分离法去除质粒溶液中的内毒素,以保证实验动物的安全和结果的准确性。方法：通过碱裂解法提取质粒pVAX1和pVAX1-hLDHC,用聚乙二醇6000沉淀对质粒进一步纯化;用TritonX-114抽提的方法,去除质粒溶液中的内毒素。结果：通过3轮TritonX-114抽提,能够将质粒溶液中内毒素水平降至1．95EU／mL,质粒样品的回收率为79．8％,质量保持不变。结论：TritonX-114液相分离法是一种非常有效的去除质粒溶液中内毒素的方法。     

S／D处理血浆过程中的脂包膜病毒灭活试验观察

通过有机溶剂/去污剂对血浆中指示病毒VSV灭活的观察评估有机溶剂/去污剂对脂包膜病毒死活的效果。血浆样品与VSV病毒按9:1混合,然后用1％TNBP/1％ Triton X-100在30℃处理4h,测定开始样品中的病毒总量和S/D处理后不同时间取样内的病毒总量。实验中样品内加入1％TNBP/1％ Triton X-10015min后VSV病毒已全部灭活,灭活效果≥6.0log。按所述S/D处理方法可以完全灭活血浆内所有的脂包膜病毒而没有主要血浆蛋白的损失。     

Triton X-100对70℃处理后光系统Ⅰ颗粒耗氧速率的影响

比较了70℃10min处理前后和加与不加Triton X-100时光系统Ⅰ颗粒的耗氧速率、荧光光谱和吸收光谱等.70℃处理后光系统Ⅰ颗粒的耗氧速率明显降低,Triton X-100可以恢复其耗氧速率.在Triton X-100存在时,光系统Ⅰ颗粒耗氧速率的急剧上升是光系统Ⅰ核心复合物和捕光色素蛋白复合体Ⅰ分离后产生的单线态氧引起的.     

大肠杆菌外膜蛋白的分离及其双向电泳图谱的建立

本文利用温度诱导的两相分离萃取技术选择性分离未经机械破碎的大肠杆菌细胞外膜蛋白,研究TritonX.114的浓度及处理时间对提取外膜蛋白的影响.实验结果表明,Triton X-114的使用浓度和作用时间均显著影响外膜蛋白的提取效率.SDS-PAGE结果表明不同Triton X-114的使用浓度和作用时间只是影响了外膜蛋白的提取效率而对外膜蛋白提取的种类没有影响.实验发现8%的Triton X-114处理3小时为最佳分离条件,分离得到的样品可用于双向电泳分析.通过对比实验发现样品裂解液中包含低浓度的Tris是外膜蛋白双向电泳成功的关键因素,CHAPS与ASB-14或NP-40结合使用可显著提高外膜蛋白的溶解能力,缩短聚焦时间,从而优化了大肠杆茵外膜蛋白双向电泳技术体系,建立了其双向电泳图谱.     

一种优化小鼠成纤维细胞中自噬小体示踪的方法

目的为了提高对自噬小体示踪的精确度和清晰度,全面展示细胞自噬相关进程,优化基于绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3β(GFP-LC3β)标记物的自噬小体示踪方法。方法组织块贴壁法原代培养小鼠耳成纤维细胞,脂质体转染过表达GFP-LC3β;GFP-LC3β充分表达后给予药物刺激以激活或阻断细胞自噬通路,然后进行免疫荧光染色。对染色操作进行优化:首先,延长多聚甲醛的固定细胞时间(从15min延长至45min);其次,提高Triton X-100处理时间,除第一次和最后一次使用PBS润洗,其余每一次使用的PBS都添加0.2%Triton X-100;最后,提升抗体稀释液中BSA和Triton X-100含量,BSA从3%提升至5%,TritonX-100的含量从0.1%提升至0.2%。结果拍照后统计自噬小体发现,新方法更加准确地标记GFP-LC3β指示物,自噬激活条件下示踪准确度显著提升(达4.2倍);新方法更加清晰地呈现自噬小体的形态和胞内分布,将自噬小体示踪的清晰度显著提升(达2.5倍);新方法还能使用不同荧光通道,同时标记其他自噬相关基因。结论本研究提供的一种优化小鼠成纤维细胞中自噬小体示踪的方法将为全面展示细胞自噬进程、深入了解细胞自噬相关机制提供有力的技术支持。     

蓝细菌Anacystis nidulans R-2藻胆体中43 Kd蛋白细胞定位的初步研究

高盐浓度条件下分离了蓝细菌Anacystis nidulans R-2的藻胆体,藻胆体中存在一种43kD的蛋白。Western blotting分析表明,该蛋白能与蓝细菌Fd：NADP氧还酶中FNRE占构域的抗体发生反应,解聚的藻胆体具有FNR黄递酶的活性,初步证明该43kD蛋白就是Fd：NADP氧还酶。Triton X-114分相实验表明,这种43kD的蛋白不能进入Triton X-114相。对藻胆体的部分解聚合实验表明,富含外周杆的组分中不存在43kD的蛋白。     

‘鸭梨’果心多酚氧化酶提取方法的优化

以‘鸭梨’为供试材料,通过设定不同实验条件,分析影响果心多酚氧化酶（polyphenoloxidase,PPO）提取效率的部分因素,以期找到提取‘鸭梨’果心多酚氧化酶的最适条件。结果表明：磷酸盐提取缓冲液的pH≥7．0,提取缓冲液中分别含有0．2％TritonX-100、1％SDS、6％-8％PVP、2％PVPP以及每克果心鲜样中加入2mg抗坏血酸时均能高效提取‘鸭梨’果心PP0。     

FNRD在聚球藻7002中的表达及其性质研究

置于Lac启动子和Kan启动子控制之下的petHL基因分别转化蓝细菌Synechococcussp.PCC7002,从Southern blot分析结果推断,petHL已整合到蓝细菌染色体DNA上。Western blot分析表明,转入蓝细菌体内的petHL基因得到了表达,且Kan启动子启动该基因表达的效率高于Lac启动子。内源FNRD表现出与FNR全酶相同的稳定性。Triton X-114分相实验结果显示,部分FNRD可进入Triton X-114相,推测这些分子可能发生了脂酰化修饰。同时FNRD在体内可能参与了光合电子传递而使光合放氧速率增加。     

膜蛋白研究中Triton X-100的置换

在生物膜结构与功能的研究中,经常会用到Triton X-100,它是一种强的表面活性剂,其疏水端能插入膜脂内,把膜脂与膜蛋白隔离开来,其亲水端能与膜蛋白结合,从而使膜蛋白增溶溶解,提取效果很好。但是,Triton X-100本身很难除尽,尤其是与膜蛋白紧密结合之后。它残存在样品中,会给下一步试验带来不良的影响。本文介绍用易透析的胆酸钠盐从吸附膜蛋白的层析柱上,逐步置换掉Triton X-100的方法,并经红血球凝血试验证明此法是简易有效的。     

固相闪烁晶体用于液闪测量的评价

本文介绍两种固相闪烁晶体制样及测量方法并与乳化剂闪烁液相比较。 ³H, ¹⁴C, ¹²⁵I及 ³⁵S其计数效率(E％)分别达34.1％,89.9％,60.3％及77.4％。液相及两种固相闪烁体间的变异系数(CV％)范围为5.1％—10.3％,同系列样品对不同厂家型号的液闪谱仪,测量效率趋一致。其测量效率、精确度、平行度等近于或优于液相测量。对数波谱分析表明无需淬灭校正并可用于双标记测量。用固相闪烁体制样不需闪烁液,故无毒、无污染、污物体积小且使用方便,克服了液体闪烁测量的不足。因此是较理想的可推广的新型样品制备与测量技术。     

棉铃虫乙酰胆碱酯酶(AChE)的体躯分布及部分纯化

该文研究了棉铃虫Helicoverpa armigera乙酰胆碱酯酶(AChE)的体躯分布及部分纯化技术。在幼虫和成虫体内均以头部AChE活性最高;AChE在成虫和幼虫头、胸、腹部的活性分布分别为78.2%、3.9%、17.9%和90.3%、6.5%和3.2%。通过用Sepharose 4B和Sephadex G-200纯化后,AChE的最高纯化倍数为3.66和17.74倍。样品和洗脱液中含有Triton X-100时,纯化倍数明显高于无Triton X-100的处理组。     

“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验的改进

"观察DNA和RNA在细胞中的分布"在实际教学中实验效果不理想。通过探究实验发现Triton X-100可以作为代替盐酸解离作用的透膜剂,避免盐酸解离过度影响甲基绿对DNA的染色,取得了非常好的实验结果。Triton X-100在本实验中最适使用浓度为0.1%～1%,最适透膜时间为5 min。系统地总结了前人对"观察DNA和RNA在细胞中的分布"实验的改进,提出一套稳定且行之有效的实验操作方案。