高产稳产聚羟基烷酸的重组大肠杆菌的构建

重组大肠杆菌Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉＨＭＳ１７４（ｐＴＺ１８ＵＰＨＢ） 含有携带聚羟基烷酸（ＰＨＡ） 合成基因（ ｐｈａＣＡＢ）＊＊ 的质粒ｐＴＺ１８ＵＰＨＢ,是很有潜力的ＰＨＡ 生产菌,但存在着质粒不稳定和不能合成３羟基丁酸（３ＨＢ） 与３羟基戊酸（３ＨＶ） 共聚物［Ｐ（３ＨＢｃｏ３ＨＶ）］ 的缺陷。将ＲＫ２ 质粒上的ｐａｒ ＤＥ 基因引入ｐＴＺ１８ＵＰＨＢ 构成质粒ｐＪＭＣ２ ,该质粒可以在宿主Ｅ．ＣｏｌｉＨＭＳ１７４ 中稳定遗传。将培养基中的磷酸盐浓度降至１８ ｍ ｍｏｌ／Ｌ,发现Ｅ．Ｃｏｌｉ ＨＭＳ１７４（ｐＪＭＣ２） 能够以丙酸为前体合成Ｐ（３ＨＢｃｏ３ＨＶ） ,其中３ＨＶ 在共聚物中的含量为５ ％ ～８ ％ 。在５Ｌ自动发酵罐中分批补料培养Ｅ．Ｃｏｌｉ ＨＭＳ１７４（ｐＪＭＣ２） ,培养基初始磷酸盐浓度为１５ ｍ ｍｏｌ／Ｌ,３０ ｈ 后每升培养液中干菌体可达４２－５ ｇ,Ｐ（３ＨＢｃｏ３ＨＶ） 占干重的７０ ％ ,其中３ＨＶ 在共聚物中的含量为４－９ ％ 。     

真养产碱杆菌合成3-羟基丁酸与3-羟基戊酸共聚物发酵条件研究

在摇瓶条件下,对真养产碱杆菌（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｅｕｔｒｏｐｈｕｓ）的３羟基丁酸与３羟基戊酸共聚物（ＰＨＢＶ）发酵过程中ＨＶ组分的前体物质———丙酸的加入时间和加入量进行了研究,结果表明,ＰＨＢＶ中ＨＶ组分含量与丙酸的加入时间和加入量有密切的关系,丙酸的最佳加入时间为菌体生长阶段结束后的多聚物合成初期;尽管高浓度丙酸下可获得较高的ＨＶ组分含量,但会明显抑制菌体的生长和产物的合成。通过对２Ｌ小罐中ＰＨＢＶ合成阶段流加不同糖／酸比混合液所得的发酵结果的比较,并在综合考虑ＰＨＢＶ浓度、ＨＶ组分含量、生产强度和生产成本等基础上,提出了在ＰＨＢＶ合成期流加液的糖／酸比应随菌体对丙酸利用能力的下降而不断增加的流加策略,在此条件下,细胞干重、ＰＨＢＶ浓度和ＰＨＢＶ含量和ＨＶ摩尔分率分别达到５２１ｇ／Ｌ、４０８ｇ／Ｌ、７８３％和１６２ｍｏｌ％,ＨＶ组分对丙酸的产率系数为０５ｇ／ｇ,ＰＨＢＶ的生产强度达到０７４ｇ／（Ｌ／ｈ）。     

真养产碱杆菌积累聚-β-羟基丁酸发酵条件的研究

对Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｈｕｓ培养过程的研究表明,氮源的限制或缺乏刺激细胞大量积累聚－β－羟基丁酸（ＰＨＢ）,但ＰＨＢ合成期氮源的完全缺乏,会导致细胞的ＰＨＢ合成速率迅速下降,氧的限制也可刺激Ａ．ｅｕｔｒｏｐｈｕｓ合成ＰＨＢ,但胞内ＰＨＢ的积累远小于氮源控制下的情况。在细胞的不同生长期限制氮源的供应会明显影响ＰＨＢ的发酵过程,当残留菌体浓度达到２０ｇ／Ｌ至３０ｇ／Ｌ时停止流加氮水,可     

真养产碱杆菌合成3-羟基丁酸与3-羟基戊酸共聚物发酵条件研究

在摇瓶条件下,对真养产碱杆菌（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｅｕｔｒｏｐｈｕｓ）的３羟基丁酸与３羟基戊酸共聚物（ＰＨＢＶ）发酵过程中ＨＶ组分的前体物质———丙酸的加入时间和加入量进行了研究,结果表明,ＰＨＢＶ中ＨＶ组分含量与丙酸的加入时间和加入量有密切的关系,丙酸的最佳加入时间为菌体生长阶段结束后的多聚物合成初期;尽管高浓度丙酸下可获得较高的ＨＶ组分含量,但会明显抑制菌体的生长和产物的合成。通过对２Ｌ小罐中ＰＨＢＶ合成阶段流加不同糖／酸比混合液所得的发酵结果的比较,并在综合考虑ＰＨＢＶ浓度、ＨＶ组分含量、生产强度和生产成本等基础上,提出了在ＰＨＢＶ合成期流加液的糖／酸比应随菌体对丙酸利用能力的下降而不断增加的流加策略,在此条件下,细胞干重、ＰＨＢＶ浓度和ＰＨＢＶ含量和ＨＶ摩尔分率分别达到５２１ｇ／Ｌ、４０８ｇ／Ｌ、７８３％和１６２ｍｏｌ％,ＨＶ组分对丙酸的产率系数为０５ｇ／ｇ,ＰＨＢＶ的生产强度达到０７４ｇ／（Ｌ／ｈ）。     

微生物合成可降解塑料聚羟基链烷酸（PHA）

本文综述利用微生物合成主要包括聚羟基丁酸（ＰＨＢ）和聚羟基丁酸－羟基戊酸（ＰＨＢＶ）在内的聚羟基链烷酸的若干要素,如微生物种资源、生物合成途径、发酵以及产物的性质和应用。     

真养产碱杆菌突变株65—7产羟基丁酸与羟基戊酸共聚物的研究

研究了真养产碱杆菌突变株６５－７,以葡萄糖为主原料,添加丙酸或戊酸,采用二步发酵积累共聚物聚β－羟基丁酸－β－羟基戊酸（ＰＨＢＶ）。摇瓶总发酵时间为５０ｈ,细胞干重达７－１１ｇ／Ｌ,共聚物含量占细胞干重的７０％以上,其中β－羟基戊酸（３ＨＶ０含量占ＰＨＢＶ的１０－７２％,主要取决于不同碳源的组成,丙酸和戊酸对ＨＶ的转化率分别为０．４１－０．６３ｇＨＶ／ｇ丙酸和０．４０－０．７４ｇＨＶ／ｇ戊酸,制得     

氮源流加对Alcaligenes eutrophus 积累聚β-羟基丁酸的影响

以真养产碱杆菌（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｈｕｓ）为聚β－羟基丁酸９ＰＨＢ）的生产菌株,在分析了ＰＨＢ发酵过程参数变化的基础上,进一步探讨了ＰＨＢ合成期不同的硫酸铵流加速度对ＰＨＢ合成的影响。研究结果表明,在ＰＨＢ合成阶段,培养基中氮源的完全缺乏。导致细胞合成ＰＨＢ能力的下隆;在ＰＨＢ合成期,不同的氮源流加速率对ＰＨＢ合成过程存在着显著的影响,当流加速率较小时,尽管最终胞内ＰＨＢ含量很高     

真养产碱杆菌突变株65－7产羟基丁酸与羟基戊酸共聚物的研究

研究了真养产碱杆菌突变株６５－７,以葡萄糖为主原料,添加丙酸或戊酸,采用二步发酵积累共聚物聚β－羟基丁酸－β－羟基戊酸（ＰＨＢＶ）。摇瓶总发酵时间为５０ｈ,细胞干重达７－１１ｇ／Ｌ,共聚物含量占细胞干重的７０％以上,其中β－羟基戊酸（３ＨＶ）含量占ＰＨＢＶ的１０－７２％,主要取决于不同碳源的组成,丙酸和戊酸对ＨＶ的转化率分别为０．４１－０．６３ｇＨＶ／ｇ丙酸和０．４０－０．７４ｇＨＶ／ｇ戊酸,制得的ＰＨＢＶ产品纯度９９％以上,分子量６．９×１０^{５相似文献}   

蛋白激酶B及其在磷脂酰肌醇3-激酶介导的信号转导中的作用

蛋白激酶Ｂ（ＰＫＢ）是原癌基因ｃ－ａｋｔ的表达产物,它参与由生长因子激活的经磷脂磷肌醇３－激酶（ＰＩ３Ｋ）介导的信号转导过程。与许多蛋白激酶相似,ＰＫＢ分子具有一特殊的ＡＨ／ＰＨ结构域（ＡＨ／ＰＨｄｏｍａｉｎ）,后者能介导信号分子间的相互作用。ＰＫＢ是ＰＩ３Ｋ直接的靶蛋白。ＰＩ３Ｋ产生的脂类第二信使ＰＩ－３,４,Ｐ２和ＰＩ－３,４,５－Ｐ３等均能与ＰＫＢ和磷酸肌醇依赖性蛋白激酶（ＰＤＫ）的ＡＨ／Ｐ     

生物可降解塑料的必酶生产研究进展

近十几年来,随着化学合成塑料造成环境污染的日趋严重,微生物合成生物可降解塑料的研究受到人们的广泛重视。聚羟基烷酸（ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙａｌｋａｎｏａｔｅｓ;ＰＨＡ）具有与化学合成塑料相似的性质,能拉丝、压模、注塑等,而且具有合成塑料所没有的特殊性能;如利用其生物相容性可作为外科手术缝线、人造血管和骨骼代用品,术后无需取出。因而在工业、农业、医药和环保等行业都具有广阔的应用前景。 目前,微生物发酵生产是获得生物可降解塑料的主要途径。对ＰＨＡ研究最多的是聚羟基丁酸（ｐｏｌｙ－３－ｈｙｄｒｏｘｙｂｕ…     

利用葡萄糖发酵产聚β－羟基丁酸菌株的选育

采用常规紫外线诱变处理真养产碱杆菌Ｈ１６,获得高效利用葡萄糖产聚β－羟基丁酸（ＰＨＢ）的突变株。摇瓶发酵试验证明,突变株耐糖程度及其积累ＰＨＢ的能力均优于亲株Ｈ１６。ＰＨＢ积累量达１０ｇ／Ｌ以上。     

热休克蛋白、蛋白水解酶和磷酸酶在大鼠肝再生中的含量和活性变化

本文以２／３肝切除（ｐａｒｔｉａｌ ｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｙ,ＰＨ）大鼠为模型,探讨了ＰＨ后酸性和碱性磷酸酶（ａｃｉｄ ａｎｄ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｓ,ＡＣＰ和ＡＫＰ）,构成性热休克蛋白７０／诱导性热休克蛋白６８（ＨＳＣ７／ＨＳＰ６８）,酸性和中性蛋白水解酶在肝再生期间（０－１４４ｈ）的动态变化。结果显示,在肝切除后的肝再生期间;（１）ＡＣＰ和ＡＫＰ均出现两个活性高峰（４和４８ｈ     

真养产碱菌利用甜菜糖蜜发酵产聚β－羟基丁酸的研究

探讨了以廉价原料甜菜糖蜜培养真养产碱菌（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｅｕｔｒｏｐｈｕｓ）Ｈ１６生产聚β－羟基丁酸（ＰＨＢ）的可行性。对培养基优化试验表明,菌体产量可达２０ｇ／Ｌ,ＰＨＢ产量达９．８ｇ／Ｌ,糖转化率为２７．５％。用２升自控发酵罐进行验证,在良好的供氧条件和特定的ｐＨ值自控条件下发酵周期从４８小时缩短到４０－４２小时,菌体和ＰＨＢ量都有提高。菌体最高产量２６ｇ／Ｌ,ＰＨＢ最高产量１３ｇ／Ｌ,糖转化率为２０．４％。ＰＨＢ占细胞的含量,摇瓶和罐上结果都在５０％左右。     

phbB,phbC基因在大肠杆菌中的表达及对马铃薯植株的转化和检测

利用从真养产碱杆菌（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｅｕｔｒｏｐｈｕｓ）Ｈ１６染色体ＤＮＡ中克隆到的催化聚β羟基丁酸酯（ｐｏｌｙβｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ,ＰＨＢ）生物合成的两个关键酶基因：依赖ＮＡＤＰＨ的乙酰乙酰ＣｏＡ还原酶基因（ｐｈｂＢ）以及ＰＨＢ合酶基因（ｐｈｂＣ）,同时利用大肠杆菌高效表达载体ｐＫＫ２２３３,构建了嵌合有ｐｈｂＢ和ｐｈｂＣ基因的表达载体ｐＫＣＢ,转入大肠杆菌ＪＭ１０９,通过显微镜观察及气相色谱分析检测ＰＨＢ的合成。在确证克隆基因正确的基础上构建了马铃薯块茎特异性表达载体ｐＰＳＡＧＢ（含ｐｈｂＢ基因）、ｐＢＩＢＧＣ（含ｐｈｂＣ基因）和ｐＰＳＡＧＣＢ（含ｐｈｂＢ和ｐｈｂＣ双基因）,转化５个马铃薯品种,经检测获得２０个转基因阳性株系。     

识别未衍生化的13—羟化GAs及其葡萄糖苷的单克隆抗体

抗ＧＡ３ 及其葡萄糖苷的ＭＡＢ１０单克隆抗体源于以ＧＡ３ 中的３ 位羟基（３－ＯＨ）为偶联位点,人血清白蛋白（ＨＳＡ）为载体合成的ＧＡ３－３－ＨＳＡ 免疫原． 该抗体对１３－羟化ＧＡｓ（１３－ＯＨＧＡｓ、ＧＡ１、ＧＡ３、ＧＡ５ 等）和ＧＡ３ 葡萄糖苷具有高亲和力． ７ 位羧基的甲酯化可显著降低ＭＡＢ１０ 对１３－ＯＨ ＧＡｓ的亲和力,而３－ＯＨ 的糖苷化却未降低其亲和力． 用该抗体建立的两种分别用于ＧＡ３ 及其葡萄糖苷测定的酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）,其检测线性范围均为０．２～２０ ｐｍ ｏｌ． 借助这两种ＥＬＩＳＡｓ,研究了羊蹄（Ｒｕｍ ｅｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）叶片中ＧＡ３ 及其类似ＧＡｓ和葡萄糖苷的动态变化．结果表明,叶片衰老与游离态ＧＡｓ的糖苷化有关;而６－ＢＡ 延缓衰老则可能与其减缓ＧＡｓ的糖苷化有关     

DDPH对猪肺动脉平滑肌细胞PDGF·BB和bFGF表达的影响：免疫细胞化学研究

ＤＤＰＨ［１－（２．６－二甲基苯乙氧基）－２－（３．４二甲氧基苯乙胺基）丙烷盐酸盐］是南京药科大学合成的降压新化合物,也具有降低肺动脉高压和抑制肺动脉平滑肌细胞增殖作用。本实验用细胞培养、免疫细胞化学、图像分析、３Ｈ－ＴｄＲ、细胞周期测定等方法,进一步探讨ＤＤＰＨ对缺氧性肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣＳ）增殖的抑制机制。结果：缺氧促进肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣｓ）的ＰＤＧＦ·ＢＢ和ｂＦＧＦ两种生长因子的表达（积分光密度ＯＤ值）增高。缺氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）能促进ＰＡＳＭＣＳ的ＰＤＧＦ·ＢＢ的ＯＤ值增高,ｂＦＧＦ的ＯＤ值无明显改变。加药组（ＨＥＣ－ＣＭ＋ＤＤＰＨ）的ＰＤＧＦ·ＢＢ和ｂＦＧＦ的ＯＤ值均显著降低,尤以ＰＤＧＦ·ＢＢ的ＯＤ值减少最多．提示：ＤＤＰＨ能抑制ＨＥＣＣＭ引起ＰＡＳＭＣＳ的ＰＤＧＦ·ＢＢ和ｂＦＧＦ表达增多和细胞增殖。结果与大鼠实验观察相符。     

血小板生长因子(PDGF-BB)刺激体外培养兔肺动脉平滑肌细胞DNA和蛋白质合成

应用细胞培养、３Ｈ－ＴｄＲ和３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入方法,观察血小板生长因子ＢＢ（Ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒＢＢ）对体外培养兔肺动脉平滑肌细胞ＤＮＡ和蛋白质合成的影响。结果表明：（１）当ＰＤＧＦ－ＢＢ浓度为１０ｎｇ／ｍｌ时,３Ｈ－ＴｄＲ掺入值已较对照组显著增高（６２６２．５±４１２．９ｖｓ８３３．５±１２４．０,Ｐ＜０．０５）;当ＰＤＧＦ－ＢＢ浓度为２０ｎｇ／ｍｌ时,３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入值亦较对照线显著增高（１０２１２．８±６３８．３ｖｓ７３４０．３±１１９７．９,Ｐ＜０．０５）。（２）ＰＤＧＦ－ＢＢ浓度在５－２５ｎｇ／ｍｌ范围内,３Ｈ－ＴｄＲ,３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入值与剂量直线相关（ｒＤＮＡ＝０．９７,ｒｐｒｏｔ＝０．９０Ｐ＜０．０５）。说明ＰＤＧＦ－ＢＢ刺激体外培养兔肺动脉平滑肌细胞ＤＮＡ和蛋白质合成。     

新型生长抑肽对成纤维细胞的DNA合成及某些癌基因表达的影响

从细胞水平和基因水平研究了新型生长抑肽（ＥＰＰ）的生物学作用,研究表明：ＥＰＰ对ＮＣ３Ｈ１０及ＴＣ３Ｈ１０细胞的ＤＮＡ合成均有抑制作用,当ＥＰＰ与ｃＡＭＰ的位点选择性类似物８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ共同作用时,其对ＮＣ３Ｈ１０细胞的ＤＮＡ合成的抑制作用消失,而对ＴＣ３Ｈ１０仍具有抑制作用;核酸杂交分析表明,ＥＰＰ可以抑制ｃ－ｆｏｓ、ｎｅｕ、ｋｉ－ｒａｓ三类癌基因在转化细胞中的表达。证明了ＥＰＰ对转化细胞的生长具有一定的抑制效应,且与８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ联合使用时其效果更佳。     

真养产碱杆菌从不同碳源合成可降解塑料：发酵过程及产物种类确定

真养产碱菌利用不同碳源合成可降解塑料聚羟基丁酸和聚（羟基丁酸－羟基戊酸）。二者可由碳－１３核磁共振谱区分,从作者所研究的未见诸文献的该菌碳源衣康酸得到的聚合物,被用来举例说明如何确定它为ＰＨＢ。此外还述及发酵程序、影响产率的因素及所得可降塑料应用近况等。     

用SDS．NaClO从重组大肠杆菌中分离聚-β-羟基丁酸酯

聚β羟基丁酸酯（ＰＨＢ）是微生物合成的一种以颗粒状态存在于细胞中的高分子聚合物,由于它具有生物可降解性、生物相容性等特性,在医学上具有独特而广阔的应用前景。从微生物细胞中分离ＰＨＢ的方法有溶剂萃取法［１］、化学试剂法［２４］和酶法［５］。目前工...