A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗稳定性研究

为确定A C群脑膜炎球菌多糖疫苗有效期。对该疫苗在不同储藏温度下的稳定性进行了系统研究,将C群多糖抗原放置在37℃,A C群多糖疫苗分别放置在2-8℃,37℃和56℃,定期取样,用琼脂糖CL-4B凝胶柱层析后,测定Kd值在0.5以前的多糖回收率,结果表明,C群多糖抗原在37℃保存9周,A C群多糖疫苗于2-8℃保存4年,37℃保存88周,56℃保存10个月,多糖抗原或多糖疫苗的Kd值小于0.4,多糖回收率大于75%,符合规程要求;因而A C群脑膜炎球菌多糖疫苗的有效期可定为在2-8℃储藏条件下3年6个月。     

ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗的免疫原性评价

目的评价ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗在昆明健康人群接种的免疫原性,为流脑防治策略提供依据。方法 2010年对昆明市2岁!3、岁!、4岁!、5岁!、6岁!、10岁!、≥15岁共7个年龄组分层随机抽取筛选出654名健康人,分别采集免前和免后1个月血清。用微量杀菌力试验(TTC法)分别检测血清中抗A、C、Y和W135群脑膜炎球菌杀菌抗体的水平。结果免后1个月抗A、C、Y和W135群脑膜炎球菌的杀菌抗体阳转率分别为96.99%、96.37%、88.43%和87.07%,抗A、C、Y和W135群膜炎球菌血清的杀菌抗体几何平均滴度(GMT)分别为1∶297.991、∶195.80、1∶72.74和1∶45.95。结论 ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗在≥2岁以上的健康人群中有较好的免疫原性。     

脑膜炎球菌菌苗研究进展

<正> 脑脊髓膜炎是全球性的流行病,发病急,病死率高。自1966年以来,在巴西、挪威、美国、越南、芬兰、英国、蒙古和中国等国都曾发生脑膜炎大流行,最高发病率在11-370/10万之间(1,2),病死率高达20％(3)。在非流行区脑膜炎球菌无症状带菌率为5-10％(4)。     

亚撒哈拉非洲脑膜炎球菌多糖疫苗的群体和常规免疫

WHO报告,1988～1997年非洲国家发生脑膜炎球菌病70．4万例(可能明显低估),约10万人死亡。1996年发生了18多万病例流行,这次流行的准确数字尚不清楚,仅根据爆发期间带亲属到医院看病的家庭比例来估计,有大量的感染病人未发现或死于医院外,有时因社会政治目的而低报。     

EDTA络合滴定法测定脑膜炎球菌多糖疫苗原液中的残留钙离子

目的建立EDTA络合滴定法,测定A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中残留钙离子含量,为疫苗的质量控制提供依据。方法在p H12的条件下,用乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)滴定液测定C群脑膜炎球菌多糖疫苗原液中的残留钙离子,并对该方法的线性范围、准确性和重复性进行验证及初步应用。结果钙离子质量浓度在0.200 2~1.602 0 mg/m L范围内,钙离子含量与消耗滴定液的体积呈现良好的线性关系,r0.99;在对照实验碳酸钙和无水氯化钙中,钙离子的回收率分别为100.9%和100.3%,相对标准偏差(RSD)分别为0.35%和0.21%;C群多糖原液加标回收实验中钙离子的回收率为99.7%~101.2%,RSD≤0.77%;测定6批C群脑膜炎球菌多糖原液中的钙离子浓度,RSD均≤5.6%。结论建立的EDTA络合滴定法简便、快速、准确,适用于A群C群多糖疫苗原液中钙离子含量的快速测定。     

检测四价脑膜炎球菌多糖疫苗中A群多糖含量ELISA法的建立

目的建立双抗体夹心ELISA法,对A群流脑多糖抗原进行特异性定量测定。方法制备抗A群多糖的特异性多克隆抗体,所得抗血清经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后,用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记多克隆抗体。分别以抗A群多糖多克隆抗体作为包被抗体及酶标二抗,建立双抗体夹心ELISA法,优化反应条件,对A群多糖抗原进行特异性定量测定。结果一系列验证试验表明,该法特异性较好,未检出与C、Y、W135群多糖的交叉反应;1.25～20 ng/mL多糖浓度范围的剂量反应曲线线性最佳,相关系数大于0.98,经实验内10次及不同试验间以16、84、ng/mL测定3次A群多糖中的含量,变异系数在6.3%～11.5%间,回收率在91.8%～105.9%之间,符合常规质控要求,检测限量为4 ng/mL。采用该法测定3批ACYW135群四价脑膜炎球菌多糖疫苗中A群多糖含量、分子大小及回收率的结果均符合规程草案质量标准。结论建立的双抗体夹心ELISA法可尝试用于ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗中A群多糖的关键质量指标的检测。     

C群脑膜炎球菌多糖-rP64K结合物的制备及免疫原性

用1-氰基-4-二甲基氨基吡啶·四氟化硼(CDAP)活化C群脑膜炎球菌多糖(GCMP),以己二酰肼(ADH)作为连接子,与重组B群脑膜炎球菌外膜蛋白64 KD(rP64K)在碳二亚胺的(EDAC)作用下结合,制备GCMP-P64K结合物。纯化后免疫NIH小鼠,用间接ELISA法检测小鼠血清中抗GCMPIgG抗体水平,并GCMP-TT结合物比较载体诱导的免疫抑制。所制备多糖-蛋白结合物(GCMP-P64K)保持了GCMP抗原特异活性,结合物免疫小鼠后可诱生比多糖单独免疫更高水平的GCMP血清IgG抗体,并能形成免疫记忆,为研究理想载体蛋白提供了新的思路。     

2～59岁健康人群接种ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗的免疫原性观察

目的评价ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗在2～59岁健康人群中的免疫原性。方法 2～59岁健康人群接种者随机抽样(n=60),接种一剂四价脑膜炎球菌多糖疫苗。采集接种前和接种后1个月血清,采用体外杀菌试验(Serum bactericidal assay,SBA)检测血清中抗A、C、Y、W135群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度。结果免疫前、后血清抗A群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度GMTs(95%CI)分别为1241(736,2091)和7559(5520,10351)(P<0.05);抗C群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度GMTs(95%CI)分别为4(9,21)和4787(2947,7775)(P<0.05);抗W135群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度GMTs(95%CI)分别为16(9,28)和368(162,883)(P<0.05);抗Y群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度GMTs(95%CI)分别为120(58,246)和1373(687,2745)(P<0.05)。免疫前和免疫后血清抗A群脑膜炎球菌的杀菌滴度≥128的比例分别为87(77.4,95.1)%和100(83.2,100)%;抗C群脑膜炎球菌的比例分别为17(8.3,28.5)%和97(88.5,99.6)%;抗W135群脑膜炎球菌的比例分别为13(5.9,24.6)%和68(55.0,79.7)%;抗Y群脑膜炎球菌的比例分别为57(43.2,69.4)%和85(73.4,92.9)%。免疫后较免疫前抗A群、C群、W135群和Y群脑膜炎球菌杀菌抗体滴度≥4倍升高的比例分别为50(27.2,72.8)%、97(88.5,99.6)%、62(43.2,73.9)%和55(41.6,67.9)%。结论虽然免疫前人群由于地方和国家免疫计划的实施已具有较高水平的抗A群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度,但接种ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后可以使其保护水平进一步提高,并使人群对C群、W135群和Y群脑膜炎球菌的低水平杀菌抗体滴度均显著升高达到保护水平,证明ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗在2～59岁健康人群中具有比较好的免疫原性。     

A＋C群脑膜炎球菌多糖疫苗的制备及其接种人体后的血清学效果

在现行的A群脑膜料球菌多糖原液制造工艺的基础上,经部分改进后进行C群脑膜炎球菌多糖原液的生产。3批中试A＋C群脑膜炎球菌多糖疫苗经全面检定后,各项指标均符合WHO《生物制品规程》的要求。该疫苗在接种人体后,5－13岁儿童组,抗A群及抗C群脑膜炎球菌的血清杀菌抗体4倍增长率为96．59％和92．15％;≤2岁儿童组,抗A群及抗C群脑膜炎球菌的血清杀菌抗体4倍增长率为68．60％和69．77％。2组儿童接种后1个月的抗A群及抗C群膜炎球菌血清杀菌抗体几何平均滴度（GMT）与接种前均有显著性差异（P＜0．001）。     

速率比浊法检测ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗中各群多糖含量

目的建立速率比浊法准确检测ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗(group ACYW135 meningococcal conjugate vaccine)的各群多糖含量。方法制备多糖参考品和抗血清,建立检测ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗各群多糖含量的速率比浊法,对建立的方法进行验证及初步应用。结果①建立的方法具备高度的特异性,各群血清仅与本群多糖抗原发生特异性反应,与非本群多糖抗原无交叉反应;②在质量浓度为0.5～5.0μg/mL多糖参考品检测区间线性良好,相关系数r>0.98;③各群血清的最低检测限均低于质量浓度为0.35μg/mL;④批内和批间变异系数(CV)值分别为0.83%～5.34%和2.33%～13.88%,加样回收率为90.5%～118.4%,精密度和准确度均符合常规质量控制要求;⑤初步应用结果显示,建立的方法可准确检测疫苗的各群多糖含量,且与火箭电泳法检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论建立的方法简便快捷、灵敏准确、自动化程度高,可有效检测ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗的各群多糖含量。     

脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的标准化研究

目的用干粉原料完全替代以消化液为主要原料的培养基配方,实现脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的标准化生产。方法用筛选改良的酪蛋白酸水解物干粉替代50%盐酸酪蛋白水解液,以改良酵母浸出粉替代酵母透析液和酵母浸出粉,适当调整培养基配方,改进并稳定培养基制备工艺,确定适宜质量指标,并对各项质量指标数据进行分析。结果改进后的脑膜炎球菌多糖疫苗干粉培养基有效地降低了批间差异,各项质量指标均符合脑膜炎球菌培养要求,培养基的各项质量指标更加稳定可控,在生产中得到了良好、稳定的生长结果。结论用干粉原料完全替代脑膜炎球菌多糖疫苗培养基中的消化液和酵母透析液是成功的,同时改良的干粉培养基进一步明确了配方标准,使原料准备、制备工艺、质量指标控制更加标准化,有效提高了培养基质量,有利于规模化生产,促进了脑膜炎球菌多糖疫苗生产用培养基的标准化工作。     

顶空气相色谱法测定四价脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中残余二氧六环

目的建立并验证四价脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中残余二氧六环的检测方法。方法采用顶空气相色谱法,样品中加入碳酸钠固体,产生"盐析"效应,以增加二氧六环在顶空瓶中的浓度。通过HP-5毛细管柱(30 m×0.32 mm×0.25μm,5%Phenyl Methyl-Siloxane),氢火焰检测器测定四价脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中残余二氧六环。结果二氧六环平均回收率及变异系数分别为86.16%～106.54%和2.4%～8.7%,在0.5004～40.032mg/L范围内相关系数值r=0.999 41,线性关系好,最低检测限为0.5 mg/L,最低定量限为2.5 mg/L。结论该方法溶剂用量少、灵敏度高、出峰特异、专属性强、色谱峰型好、分离度高、出峰时间短、影响因素少,是一种易于实现仪器自动化的分析方法。     

薄膜过滤法在A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗无菌检查中的应用

采用薄膜过滤法对A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的无菌检查方法进行验证.结果表明,薄膜过滤法具有取样量大,操作简便,污染几率小,能确保检验结果的准确性、有效性和重现性,该方法适用于A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的无菌检查方法.     

脑膜炎奈瑟氏球菌疫苗

本章主要介绍疫苗发展前景中提到的A群、C群脑膜炎球菌结合疫苗和B群蛋白质疫苗。关于脑膜炎球菌疫苗发展史的综述发表于1995年。     

脑膜炎球菌菌苗的发展现状及展望

根据荚膜多糖的结构及抗原性不同,将奈瑟氏脑膜炎双球菌分为１２个血清群。绝大多数的脑脊髓膜炎是由Ａ、Ｂ和Ｃ群流脑球菌所引起。Ａ、Ｃ群流脑多糖菌苗自１９６９年研制成功后,在世界范围内迅速得到广泛使用,对防止由Ａ、Ｃ群流脑球菌引起的暴发性脑脊髓膜炎起到了重要作用。由于Ｂ群流脑多糖抗原对人体缺乏免疫原性,外膜蛋白（ＯＭＰ）及脂多糖（ＬＰＳ）被用作研制Ｂ群菌苗的目的抗原。目前使用的多糖菌苗或ＯＭＰ菌苗都存在一定的局限性。将Ａ、Ｃ群多糖抗原结合到蛋白载体上对成人免疫取得了很好的结果,可望弥补多糖抗原对低年龄组儿童免疫效果不佳的缺点。新的多渠道的尝试,如多价ＯＭＰ菌苗、抗遗传基因型菌苗等或许能在不远的将来制备出全面的、有效的流脑菌苗。     

A群脑膜炎球菌多糖菌苗固体总量试验

本试验采用５０℃干烤法在不同实验条件下对Ａ群脑膜炎球菌多糖菌苗的固体总量进行了测定,并对其结果进行了比较。实验结果表明：（１）１ｍ１,２ｍｌ和４ｍ１取样量的固体总量之间无显著性差异。（２）采用２ｍｌ取样量用不同规格称量瓶和不同规格吸管对测定结果无明显影响。（３）采用１ｍ１、２ｍｌ和４ｍｌ取样量试验结果重复性均好。但从标准差及变异系数看,取样２ｍｌ或４ｍｌ者,试验误差更小,结果更为准确。     

A群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合物中游离多糖测定方法的建立

本文建立一种测定A群脑膜炎球菌多糖－破伤风类毒素（PS－TT）结合物中游离多糖的方法。用80％乙醇使PS－TT结合物沉淀,再用60％乙醇洗涤沉淀使未结合多糖溶解,使与TT结合的和未结合的多糖分离并分别测定。该方法可有效分离结合的与未结合的多糖并分别测定,结合物中外加多糖可定量回收。本方法适用于测定A群脑膜炎球菌多糖－破伤风类毒素结合物中游离多糖含量。