基因组文库的研究进展

基因组文库是分子克隆和基因组学的技术基础,它主要经历了噬菌体系列文库、人工染色体系列文库和多元载体系列文库三个阶段。介绍了λ噬菌体文库、cosmid文库、P1噬菌体及PAC文库、fosmid文库、YAC文库、BAC文库、MAC文库、HAC文库、BIBAC文库和TAC文库,罗列了部分文库的研究成果和发展情况,总结了基因组文库的发展进程,并对基因组文库向多基因发展作了展望。     

植物大片段 DNA 的研究进展

植物大片段 DNA 的研究成为了基因组学研究的一个重要方面．对它的研究得益于容纳大片段 DNA 片段载体的发展．对构建植物大片段 DNA 的载体、植物大片段 DNA 的提取方法、植物大片段 DNA 的主要应用领域的最新进展进行了介绍．     

TAR载体克隆染色体目的片段的研究进展

分离染色体DNA上的目的片段,对其进行结构及功能的分析,对于发现新基因,研究基因功能都具有很大的意义。利用TAR克隆技术可以直接从基因组中分离所需的目的片段,这比传统的通过筛库获得目的片段的方法简便、快速、准确并且特异性强 。     

构建丝状真菌大片段基因组文库载体DNA的制备

载体DNA的制备是构建大片段基因组文库的关键步骤之一,高质量载体DNA受到酶切、脱磷等因素的影响,以载体pBHYG为材料,优化了限制性内切酶胁HindⅢ酶切和小牛肠碱性磷酸酶(CLAP)脱磷的作用条件,并在T4连接酶作用下自连,通过胶回收纯化制备了可用于进一步构建大片段基因组文库的线性载体DNA。     

质粒克隆载体研究进展

质粒克隆载体研究进展靳卫东宋增璇（中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室,天津３０００２０）关键词质粒克隆载体质粒是基因工程重要的载体之一。它是细胞内的共生型遗传因子,它能在细菌中垂直遗传并且赋予宿主细胞一些特殊表型。质...     

放线菌基因组大片段克隆载体及异源表达宿主改造的研究进展

大规模基因组测序发现放线菌基因组内包含有极丰富的天然产物合成基因, 是非常有价值的资源。放线菌基因组中负责天然产物合成的基因通常成簇存在。要想完整地克隆这些较大的基因簇并且进行功能研究, 或者通过异源表达激活原本沉默的天然产物合成基因簇, 需要大容量的载体系统和合适的异源宿主。本文重点介绍了放线菌中常用于基因组大片段克隆的载体及异源表达宿主改造的研究进展。     

高覆盖率水稻ＢＡＣ库的构建及抗病基因相关克隆的筛选

利用含Ｘa4、xa5和xa13 3个水稻白叶枯病抗性基因的累加系ＩＲＢＢ５６构建了一个水稻细菌人工染色体文库,该文库包含５５２９６个克隆,平均插入升段为１３２kb。按水稻基因组为４５０Ｍb计,该文库覆盖１４倍基因组,筛选出任一水稻基因或序列的概率为９９．９９％。用均匀分布的３个叶绿体基因和４个线粒体基因克隆作探针筛选文库,结果显示该文库中含细菌器基因组ＤＮＡ同源序列的克隆数小于１％、用分布于水稻３条不同染色体、分别与Ｘa4、xa5和xa13连锁的ＤＮＡ标记筛选文库,分别检测出１１－１０６个阳性克隆,为克隆这些基因打下了基础。该文库对水稻基因组的高度覆盖率和较大的插入片段,非常适合于物理作图和基因的分离和克隆。     

小麦—簇毛表6VS／6AL易位系可转化人工染色体（TAC）文库的构建

可转化人工染色体（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ,ＴＡＣ）是具有克隆和转移大片段基因能力的新型载体,是植被基因克隆和转化的有效工具。为了克隆泪科抗白粉病基因和其它基因,本研究用ＴＣＡ载体ｐＹＬＴＡＣ１７构建了带有抗白粉病基因Ｐｍ２１的小麦＝簇毛麦６ＶＳ／６ＡＬ易位系的基因组ＤＮＡ文库。该文库包含２１０万个克隆平均插入征段３５ｌｂ,相当于     

细菌人工染色体的研究和应用

细菌人工染色体 (Bacterialartificialchromosome ,BAC)是第二代大片段DNA的克隆载体系统。因其嵌合率低 ,遗传稳定性好 ,重组DNA容易分离和制备 ,转化效率高等 ,弥补了YAC的不足 ,很快在基因组研究中处于中心地位。近年来 ,已有多种BAC载体被构建出来 ,这些BAC载体在复杂基因组大片段文库的构建 ,基因的图位克隆 ,基因组物理图谱的构建 ,基因和基因组测序 ,基因组织结构分析 ,染色体组织和进化 ,以及基因的遗传转化和调控研究中得到了广泛的应用。     

Cloning Vectors for Rice

We developed various binary vectors that can be used for expressing a foreign gene in rice. Vectors pGA3426, pGA3436, and pGA3626 are intended for overexpression of a gene using the maize Ubiquitin promoter, whereas pGA3780 is for rather mild expression of a gene using the rice Actin1 promoter. Vector pGA3777 is for expressing two genes simultaneously. We also developed binary vectors for expressing a fusion protein with a tag. Four vectors (pGA3427, pGA3428, pGA3429, and pGA3438) are for protein tags with sGFP, HA, His, and Myc, respectively. Vector pGA3383 is for analyzing promoter activity using the GUS reporter. In this vector, multiple cloning sites in front of GUS can be utilized for accepting a promoter fragment. We also generated transient expression vectors for studying the subcellular localization of a protein. Vectors pGA3452, pGA3651, and pGA3652 are for GFP fusion; pGA3574 for RFP fusion; pGA3697 for Myc tag; and pGA3698 for HA tag. In addition, we generated pGA3506, pGA3516, pGA3592, and pGA3593 for facilitating the subcloning of full-length cDNA clones into our binary vectors.     

人胃癌细胞株BGC-823 DNA二轮转化细胞基因组文库的构建及其转化基因的克隆

以人胃癌细胞株BGC-823 DNA二轮转化的鼠成纤维细胞为材料,用λ噬菌体EMBL_3,作克隆载体,构建了转化细胞的基因组文库。用~(32)P标记的人Alu重复顺序和原癌基因c-Ha-ras为探针,对100万基因文库噬斑进行原位杂交筛选,找出了两个可以同时与上述探针杂交的阳性克隆。经对两个阳性克隆DNA进行分子杂交表明,它们均含有来自人胃癌细胞株BGC-823的转化基因Ha-ras,进一步运用质粒载体pBR322对这一转化基因进行次级克隆,并进行了限制性内切酶图谱的初探,从而为研究胃癌转化基因的结构、DNA序列及与原癌基因的异同奠定了基础。     

一种适用于片段替换/插入突变扫描的克隆方法

功能序列的改造是基因工程的一项基础技术。序列改造往往涉及较大片段的插入或替换,为了获得更优化的改造序列,这种片段插入或替换经常需要以扫描方式进行。传统的酶切连接方式在这种情况下可能难以实现或者费时费力。建立了一种golden gate方法结合混合克隆和快速鉴定的策略（简称Gmix）,利用该策略,成功地将外源基因（Gaussia荧光素酶基因）以4种模式,扫描式插入或替换HBV复制质粒的指定区域。该方法成功率高,操作简便快速且成本较低,适合于其他DNA序列的类似改造工作。     

刺猬高重复顺序DNA的分子克隆及核苷酸顺序分析

为了分析比较食虫目高重复顺序的结构特征,我们将食虫目动物刺猬的高重复顺序DNA进行了分离、纯化、分子克隆,并测出了1186bp的核苷酸顺序。经分析发现在碱基组成上它与食虫目另一动物臭鼩有许多相似之处,如:G-C碱基对与A-T碱基对在整个片段中分布很不均衡;片段内部含有许多连续多次重复的短片段等,很可能为食虫目动物所特有。     

Cloning of Y derived DNA sequences of bovine origin inEscherichia coli

We have constructed a partial library of Y chromosome derived DNA sequences of bovine origin inEscherichia coli. That, the recombinants arc Y derived and Y specific was ascertained by differential colony hybridization using male and female DNA probes. Out of 1000 recombinants analysed, 17 were found to be Y derived as well as Y specific and were of repetitive nature. Restriction analysis revealed that most of them had short DNA inserts.     

Cloning the Deleted DNA Fragment from a Deletion Mutant of Planetree by Genomic Subtraction

A novel type of mutant of planetree (Platanus occidentalis L. ), which was produced via γ-ray irradiation, does not form lower buds yet its vegetative organs grow normally. Genetic analysis showed that this was clue to the deletion of DNA fragments in the mutant genome. Through genomic subtraction technique, a 2.0 kb DNA segment (pBS 2.0) was isolated, which is only present in wild planetree genome, but is absent in mutant genome.     

编码人疱疹病毒－6型核糖核苷酸还原酶和P41蛋白基因的克隆和序列测定

本文报道人疱疹病豢－６型（ＨＨＶ－６）ｐＳＴＹ２８ＤＮＡ片段的序列测定。应用分子克隆、缺损突变体（Ｄｃｌｅｔｉｏｎｍｕｔａｎｔ）制备和序列测定等技术,完成了３．９ｋｂＨＨＶ－６ｐＳＴＹ２８ＤＮＡ片段的全序列测定。经ＤＮＡＳＩＳ核酸蛋白软件分析,该片段含有两个开读框架（ＯＲＦ）核糖核苷酸还原酶（ＲＩＲ）ＯＲＦ有２４１４个核苷酸,可编码８０５个氨基酸;Ｐ４１蛋白由１１００个核苷酸组成。与其他疱疹病毒作氨基酸同源性比较,ＨＨＶ－６ＲｉＲ与人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）有高度同源性,最适记分（Ｏｐｔｉｍｉｚｅｄｓｃｏｒｅ）达４５９。实验结果支持Ｅｓｆｔａｔｈｉｏｕ提出的论点,ＨＨＶ－６属于β－疱疹病毒。     

DNA克隆载体的发展和应用

ＤＮＡ克隆载体的发展和应用刘建喜林爱星丁翔陈永福（中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,北京１０００９４）ＴｈｅＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＤＮＡＣｌｏｎｉｎｇＶｅｃｔｏｒｓＬｉｕＪｉａｎｘｉＬｉｎＡｉｘｉｎＤｉｎｇＸｉａ...     

葡萄球菌A蛋白基因的克隆及其IgG受体区新型表达载体的构建

旨在克隆SPA基因并将该基因的IgG结合区亚克隆至毕赤酵母表达载体中。以金黄色葡萄球菌CowanI菌株基因组为模板,对葡萄球菌A蛋白(SPA)基因全长序列进行PCR扩增,再将PCR产物克隆入pMD18-T质粒,将DNA测序所得的结果用Blastn软件进行在线同源比对,经鉴定为SPA基因序列后,在线对其进行功能区域(IgG-Fc受体区)的预测,将该区域亚克隆入表达载体pPICZaA。结果显示,从CowanI菌株中成功地扩增到SPA基因,与NCBI中公布的序列同源性高达97%,同时构建了IgG-Fc受体区新型的表达载体