黄花菜不同外植体形成的愈伤组织再生苗观察

研究了黄花菜不同外植体愈伤组织的形成与植株再生。结果表明,出愈率是花柄>花茎>叶片。愈伤组织在MS+6-BA 2mg/L的培养基上出现致密愈伤组织颗粒,经增殖→分割→增殖的程序逐渐形成“球状体”似的愈伤组织。叶片、花茎形成的球状体经20代继代培养,再生能力没有减退,苗形态正常,根尖细胞染色体数目为2n=2x=22。该球状体经秋水仙素处理获得多种形态的四倍体苗和少数重复加倍现象。花柄球状体再生苗中出现了叶片花瓣状或类似花蕾状的形态异常苗,其频率与花柄所处的花期及花蕾大小有密切关系。再生异常苗的球状体继代培养,或者由异常苗叶片重新形成的球状体仍然再生异常苗。花柄球状体经秋水仙素处理,获得的变异株其染色体数目类型较多。因而不宜用花柄作黄花菜快速繁殖的外植体。     

红芽芋球茎片两步法离体快繁及其再生苗生理和光合特性研究

以江西铅山红芽芋(Colocasia esculenta L.Schott var.cormosus‘Hongyayu’)试管苗为材料,建立了芋球茎片两步法离体快繁体系,并对其再生苗的形态指标、染色体数目、生理和光合特性以及叶绿素荧光特性进行了检测。结果表明:(1)红芽芋球茎片单芽诱导的最佳培养基为MS+KT 2 mg/L+6-BA 1 mg/L+NAA0.1mg/L,诱导培养30d后将单芽从球茎片上分离,再接种到生根培养基(MS+KT 2mg/L+NAA 0.1mg/L)上培养30d即可形成完整植株,移栽成活率高达98%;(2)由球茎片单芽、丛生芽、不定芽离体快繁获得的红芽芋再生苗在形态指标、叶下表皮气孔参数、染色体数目、生理生化指标以及叶片光合特性参数和叶绿素荧光特性方面均无显著差异。说明红芽芋球茎片两步法离体培养的再生苗繁殖系数高、染色体数目稳定,该离体快繁体系可应用于江西铅山红芽芋的工厂化生产。     

江西铅山红芽芋脱毒苗球茎愈伤组织诱导及其再生体系的建立

以江西铅山红芽芋脱毒苗为试材,研究不同因素对红芽芋脱毒苗球茎愈伤组织诱导及其再生体系的影响,以期对红芽芋脱毒苗的再生体系进行优化。结果表明,红芽芋脱毒苗球茎愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+TDZ 2 mg·L^-1+2,4-D 1 mg·L^-1。红芽芋脱毒苗球茎愈伤组织分化的最佳培养基是MS+TDZ 2 mg·L^-1+NAA 1 mg·L^-1。红芽芋脱毒苗不定芽生根的最佳培养基是1/2MS+NAA 0.5 mg·L^-1+PP₃₃₃ 0.5 mg·L^-1。红芽芋再生苗最好的移栽基质为发酵后的腐锯木屑。红芽芋脱毒苗球茎愈伤组织再生苗移栽时最佳的PP₃₃₃浓度为20～50 mg·L^-1。本试验成功建立了红芽芋脱毒苗球茎愈伤组织的再生体系,为红芽芋脱毒苗转基因的研究和种质创新奠定了基础。     

黄花菜药材性状鉴别、HPLC指纹图谱建立及多组分含量测定

通过性状鉴别、含量测定和指纹图谱建立三个方面开展黄花菜药材质量研究,首先对不同产地黄花菜润湿后展开,测量各结构数据,并对测量结果进行相关性分析。其次采用HPLC法测定多批次黄花菜指纹图谱及主要成分含量,并对各批次指纹图谱进行相似性评价和主成分分析。本实验建立了黄花菜药材HPLC指纹图谱,确定了45个共有峰,根据对照品指认了4个共有峰,并对其含量进行测定。实验结果显示黄花菜药材的外部形态具有显著性差异,且和产地、海拔、经纬度等有一定的关联。研究结果可以为黄花菜药材的质量控制提供可靠评价方法。     

蝴蝶兰EMS离体化学诱变及再生植株RAPD检测

用EMS对离体培养的蝴蝶兰类原球茎薄切片进行化学诱变,研究了不同浓度、不同时间诱变处理对类原球茎薄切片生长、类原球茎再生及再生苗生长的影响,并对再生苗DNA进行了RAPD检测。结果表明,诱变剂EMS对类原球茎薄切片生长产生重要影响,部分薄切片褐化死亡,再生类原球茎生长受到抑制,再生苗数量减少,表现出明显的伤害作用,这种伤害作用随诱变剂浓度的加大和处理时间的延长而加重。诱变剂EMS使部分再生苗畸变,叶片皱缩、变厚。并产生2株叶形、叶色突变体。部分再生苗表现出RAPD图谱带型的多态性,暗示DNA序列发生了一定的变异。EMS适合诱变剂量为浓度0．4％处理2d～4d。     

繁殖方式对矮慈姑生长的影响

矮葱姑的种子繁殖和球茎营养繁殖对植株生物量和高度都有明显的影响。种子繁殖苗生物量的增长曲线方程不同球茎繁殖苗的生物量增长曲线方程从生物量比较可见,在生长初期。球茎繁殖苗的生物量远大于种子繁殖苗。生长过程中,种子繁殖苗的生长速率大于球茎繁殖苗。在生长后期,二者生物量接近。种子繁殖苗的高度动态方程与球茎繁殖苗的高度动态方程也不一样。种子繁殖苗和球茎繁殖苗高度的增长速率在生长的前期均高于生长后期。     

土人参的组织和单细胞培养及试管苗开花结实

以土人参的花梗、茎和叶片为外植体在ＭＳ培养基上诱导出愈伤组织,诱导率为７５％－９０％。愈伤组织经分化和生根培养再生了完整植株。由组织培养再生苗的幼茎诱导的愈伤组织建立悬浮系。由悬浮系分离的单细胞在２／３ＭＳ液体培养基中振荡培养或振荡培养３周后转入双层培养均再生了愈伤组织,再生率分别为０．２８％和０．４１％。愈伤组织在含有较低浓度６－ＢＡ的培养基上分化出苗。幼苗生长迅速,每３周扩增６．７倍,再生植株     

中国西北地区萱草属花粉形态研究

本文借助光学显微镜和扫描电镜,对我国西北地区萱草属6种1变种的花粉形态进行了比较研究,不同的种类,其花粉形态或多或少有所不同,说明花粉形态在种间具有分类意义,而且6种、1变种可自然地分为两大类群,第一类群包括小黄花菜、北萱草、黄花菜,第二类群包括北黄花菜、折叶萱草、萱草、重瓣萱草。#br#北黄花菜、小黄花菜的花粉形态差别较大,证明把小黄花菜做为北黄花菜的变种是不妥当的。     

黄花菜球状体经秋水仙素处理后再生苗加倍效果及快速增殖的研究

黄花菜(Hemirocallis citrina)是我国特产蔬菜,湖南省是主产区,目前种植的优良品种花蕾达不到部颁重量标准,我们试图用细胞工程技术诱发黄花菜多倍体,提高花蕾重量,改良品质。用秋水仙素处理黄花菜球状体,再生苗获得了较好的加倍效果。有芽状突起的球状体经0.05%的秋水仙素溶液处理,加倍效果在50%以上;没有芽状突起的球状体加倍效果仅为14.2%左右,而且球状体在培养中愈伤组织化。     

魔芋试管气生球茎的诱导研究

以谢君魔芋无菌试管苗为试材研究离体条件魔芋试管气生球茎的形成,利用正交试验设计对培养基及培养条件进行优化选择。结果表明叶片插入培养基7d后开始形成愈伤,并在复叶叶脉处形成1-2个气生球茎。培养基、培养温度、光照强度、碳源是魔芋试管气生球茎诱导的主要限制因子。改良MS培养基中添加NAA、Kt、碳源分别为0.5mg/L、0.5mg/L、4%S 4%M为最佳诱导培养基;最佳培养条件为温度28℃,光周期8/16,光照强度800lx。     

广藿香叶盘法高效再生体系主要影响因素的研究

广藿香是重要的芳香药用植物,利用基因工程技术对广藿香进行品种改良,需要建立一个高效的广藿香植株再生体系。该研究以广藿香无菌苗叶片为材料,将叶盘外植体分别置于不同条件下培养,观察、统计其再生植株的数量及生长状况。通过研究15~50 d的苗龄、第2~4节上的叶及培养基中2,4-D、NAA、BA和KT的浓度和配比等因素对广藿香叶盘再生植株的影响,在此基础上优化培养条件,建立广藿香高效再生体系。结果表明:广藿香无菌苗的苗龄、叶片在茎上的着生位置以及培养基中的植物生长调节物质浓度和配比都对广藿香的植株再生有显著影响;优化培养条件为以培养30 d的广藿香无菌苗顶芽下第2对展开叶片切割的叶盘为外植体,在含0.1 mg·L-1NAA和0.5 mg·L-1BA的MS培养基中培养28 d,叶盘的不定芽发生频率达到100%,单个叶盘的平均再生芽数为96.5个,经生根培养及温室炼苗,再生植株的移栽成活率达到96%。广藿香叶盘植株再生体系的建立为其基因转化研究及优良品种的快速繁育奠定了基础。     

冬凌草离体培养体系的建立及主要次生代谢产物的测定

以冬凌草叶片为外植体,研究不同浓度激素组合对冬凌草愈伤组织诱导及植株再生的影响,并对不同外植体(茎、叶)诱导愈伤、芽的分化能力及再生植株内主要次生代谢产物的含量进行了比较研究。结果表明:在MS 2.0 mg/L 6-BA 1.0 mg/L NAA培养基上诱导愈伤组织效果较好;在MS 2.0 mg/L 6-BA的培养基上诱导芽的效果较好;叶片和茎段在愈伤诱导培养基上均能产生大量的愈伤组织,但其再分化能力以茎段最好;再生苗生根培养基以0.3 mg/L IBA最好;以叶为外植体诱导的再生植株中冬凌草甲素、迷迭香酸的含量均高于以茎为外植体诱导的再生植株。     

马铃薯不同组织的诱导分化及其对遗传转化效率的影响

在农业快速发展过程中,基因工程作为改造马铃薯性状的重要手段,一直备受关注。优化马铃薯组织培养体系及外源基因转化条件是进行马铃薯转基因工作的基础。以三种熟性不同的马铃薯栽培品种（东农303、早大白、大西洋）的试管苗为试验材料,采用正交实验,对茎段和试管薯的分化体系进行筛选、优化,建立不同品种茎段的愈伤再生体系及试管薯直接分化再生体系。将以LYCB为目的基因,以NPTII为筛选标记的载体,利用农杆菌转化法,分别对三种材料试管苗的茎段及试管薯进行转基因操作,并对转化条件进行优化,以建立适合于不同品种马铃薯茎段及试管薯的遗传转化体系。以研究中得到的最佳离体再生体系及最优遗传转化体系为基础,利用PCR方法,进行阳性植株检测并统计。研究发现,在东农303、早大白、大西洋三种品种中,经由茎段愈伤组织转化,获得的阳性植株转化率分别为36%、35%、28%;经由试管薯直接分化,获得的阳性植株转化率分别为43%、45%、17%。在后期转基因操作中,东农303/早大白转化时可采用试管薯作为试验组织,大西洋则适合用茎段。     

仙客来组织培养中再生器官类型及增殖稳定性比较

对‘胜利女神’(Cyclamen persicum cv. Victoria’)和‘大红’(C. persicum cv. ‘Dahong’)两个仙客来品种成苗叶片诱导的愈伤组织,在6-BA与NAA配合的12个分化培养基上继代培养,第一次继代主要产生大量的不定芽芽点,从第二次继代后会得到5种类型的再生器官,分别为不定芽芽点、多芽球茎、多芽新梢、单芽球茎和叶片状芽丛。通过对不同再生器官增殖稳定性的试验表明,‘大红’品种的多芽球茎和多芽新梢在继代培养中再生相同器官的稳定性比较强,由于多芽球茎的增殖率大于多芽新梢,在继代中选择多芽球茎为再生体系较理想;不定芽芽点在以后的继代中会分散产生各种再生器官,不宜作为增殖器官;单芽球茎和叶片状芽丛继代分散性强,为不正常再生器官。‘胜利女神’品种多芽球茎和多芽新梢继代的稳定性比‘大红’品种差,易于产生多种不正常器官。     

利用激光微束将外源基因导入高等植物细胞的研究

本实验室已建立了激光微束向植物细胞导入外源基因的试验程序。用已建立的程序对多种经济作物和林木进行外源基因导入的研究,均得到了GUS基因瞬时表达的结果,正在继续研究GUS基因的整合表达。 广泛地选用了不同科属的植物及不同外植体进行外源基因导入的研究,所用材料如下:在被子植物中选用单子叶无性繁殖的兰科花卉兰花(Dendrobium)小圆球茎为外植体;以双子叶植物中的草本植物锦葵科的棉花(G.hirsulum L.)再生胚状体为外植体;十字花科油菜,选用     

84K杨愈伤组织再生体系和直接分化再生体系遗传转化的比较性研究

植物转基因必须以建立良好的植物转化受体系统为基础,而良好的受体系统必须以具有高频率的转化率及较强的再生能力为前提。实验以84K杨叶片为材料研究其在不同培养条件、不同种类及浓度的植物激素对其脱分化及再分化的影响,并建立了两种成熟的组织再生系统,得出组织培养体系与遗传转化体系的受体系统在激素配比方面存在一定差距,所以在此基础上进行了PCK1、PCK2两个基因的愈伤途径和不定芽途径途径的遗传转化,并对两种遗传转化体系进行了对比性分析并总结出两种体系的优缺点。     

33个黄花菜品种及3种野生黄花菜的过氧化物酶同工酶分析

１９８４－１９８７年先后全国１６个省区收集了３３个黄花菜（ＨｅｍｅｒｏｃａｌｌｉｓｃｉｔｒｉｎａＢａｒａｎｉ）品种和３个野生黄花菜品种。８７－９４年连续７年观察了各品种的主要形态特征,农艺性状。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析比较了各品种的过氧化物酶同工酶谱。结果表明,凡形态上差异较大者,过氧化物酶谱同工酶谱差异也大;形态上无明显差异者,过氧化物酶同工酶谱也基本相同,表现了很强的对应性。各地栽培的黄花菜中普遍存在着同物异名或同名异物现象。收集的３３个黄花菜品种整理归并为２５个不同的品种;１７号早黄花（野生）、１９号四月花（栽培）均为北萱草（Ｈｅｍｅｒｏｃａｌｌｉｓｅｓｃｕｌｅｎｔｓ）,１８号野黄花为折叶萱草（Ｈｅｍｅｒｏｃａｌｌｉｓｐｌｉｃａｔａ）。为研究黄花菜品种的亲缘起源关系及进行杂交育种工作提供了一些理论依据。     

绿玉树试管苗物理化学诱变及其抗寒突变体的筛选

以已建立的微体繁殖体系为基础,对绿玉树再生丛芽进行Co^60γ射线不同剂量的辐射和不同浓度EMS诱变处理,以HYP为突变体选择压,筛选出抗HYP突变体小苗,并对突变体小苗进行抗寒测试。结果表明：辐射剂量影响丛芽的增殖、突变率及芽苗的生长,1．5KR为绿玉树丛芽辐射诱变比较适宜的剂量。0．2％的EMS亦能诱导绿玉树丛芽块产生突变芽,但与正常培养获得的再生小苗相比,诱变后产生的抗HYP芽苗生长缓慢,再生小苗矮小。抗HYP突变小苗的抗寒性比正常植物的抗寒性强。     

大麦成熟胚愈伤组织的诱导和植株再生的研究

以10个大麦优良品种为实验材料,成熟胚为外植体,研究基因型、种子的不同切割方式、培养基、激素等对大麦成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生的影响.结果表明,种子纵切后接种出愈率显著高于横切;改良MS培养基能提高出愈率;在愈伤组织诱导过程中,不同品种对激素2,4-D与Dicamba的反应表现不同;初代愈伤组织经过3次继代培养后会转变为两种类型的胚性愈伤组织;不同品种的植株再生在不同浓度有机添加物的分化培养基上表现不同;长时间的继代培养,一些品种在植株再生过程中出现一定数量的白化苗.供试材料均能进行愈伤组织诱导,但是只有部分品种能再生植株.本实验筛选出愈伤组织诱导频率和绿苗分化率均较高,适合于遗传转化的受体材料,如87-3175、87-0053、97-4010、97-6004及208813-509.     

文心兰NaN3离体化学诱变及RAPD检测

采用3种浓度的NaN3分别对离体培养的文心兰类原球茎薄切片进行不同时间诱变处理,考察了不同浓度、不同时间诱变处理对类原球茎薄切片生长、类原球茎再生及再生苗生长的影响,并对再生苗DNA进行了RAPD检测.结果表明:诱变剂对类原球茎薄切片生长产生严重影响,部分薄切片褐化死亡,再生类原球茎生长受到抑制,再生苗数量减少,表现出...