桂枝汤对胃H,K—ATP酶活力的影响及对消炎痛引起胃H,K—ATP酶抑…

中药桂枝汤在整体水平上能极其显著的激活胃Ｈ,Ｋ－ＡＴＰ酶的活力,而离体水平上对该酶呈现明显抑制效应,消炎痛在整体和离体水平上均对胃Ｈ,Ｋ－ＡＴＰ酶呈现抑制作用,。桂枝汤在整体水平上对消炎痛引起胃Ｈ,Ｋ－ＡＴＰ酶的抑制作用有保护效应,这些结果提示桂枝汤可能通过机体整体调节实现其提高胃Ｈ,Ｋ－ＡＴＰ酶活力作用的,从而在Ｈ,Ｋ－ＡＴＰ酶水平上初步阐述了中药桂枝汤调整胃功能的可能作用机理,而且也为扩充桂枝     

消炎痛对猪胃H＋／K＋—ATP酶质子转运功能的抑制

作为猪胃Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的非竞争性抑制剂,消炎痛明显抑制Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ泡囊的质子转运功能,造成质子泄漏。在０．１５ｍｇ／ｍｌ蛋白深度下,４％的消炎痛结合于Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ泡囊上。它能渗入膜脂相并显著降低膜的流动性。并使Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ内源荧光受到淬灭。从实验结果看来,消炎痛对猪胃Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ质子转运功能的抑制来自对酶蛋白和膜结构影响两个方面,而非仅抑制     

油酸对消炎痛引起的胃粘膜损伤大鼠胃粘液分泌的影响

本工作研究油酸对消炎痛引起胃粘膜损伤大鼠胃粘液分泌的影响。胃粘液测定采用阿尔新蓝(Alcian blue)与胃液中糖蛋白结合的方法。将1.0ml 油酸注入到结扎幽门的大鼠空肠内,就可引起胃壁粘液及游离粘液分泌量的明显增加。以0.25、0.5和1.0ml 油酸注入到不结扎幽门的大鼠空肠内,也能显著增加胃壁粘液分泌,保护胃粘膜。这两种作用表现着剂量依赖关系。不论以油酸灌胃或注入空肠、回肠,都能明显增加胃壁粘液量,而灌胃的作用比注入肠内更明显。以1.0ml 30%甘油、0.1%乙酸及1/15N HCl 分别注入空肠,都不能刺激胃壁粘液的分泌。上述结果表明,油酸具有刺激胃粘液分泌的作用。因此,加强胃粘液分泌可能对粘膜起到屏障作用,这是油酸保护胃粘膜损伤的机制之一。     

消炎痛对猪胃H~＋／K~＋－ATP_（ase）抑制的动力学

消炎痛作为一种可引起胃粘膜急性病变的药物,用分离提纯的猪胃Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ证明,它可以显著的抑制此酶的活力,０．１ｍｇ／ｍＬ时即可抑制酶活力２７％,０．５ｍｇ／ｍＬ时可抑制全部活力,其Ｋ（０．５）为０．１８ｍｇ／ｍＬ。消炎痛对Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的抑制随３０℃时预保温时间的延长而加剧,１０ｍｉｎ预保温可抑制总活力的５０％。消炎痛并不影响Ｈ＋／Ｋ＋－ＴＡＰａｓｅ的转换温度（３９℃）以及最适ｐＨ（约ｐＨ７．５）,但酸性条件下消炎痛对Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ抑制比碱性条件下强烈。在我们的实验条件下,消炎痛对Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的抑制与Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ量成正比,它不影响酶的Ｋｍ值（０．１１ｍｍｏｌ／Ｌ）,而是显著降低Ｖｍａｘ,因而它是此酶的可逆性非竞争性抑制剂,其Ｋｉ为０．３２ｍｍｏｌ／Ｌ。     

外源胆固醇对水稻根端线粒体ATP酶活力的影响

外源胆固醇无论是通过根系吸收或是直接与离体线粒体一起温育的方式,在试验浓度范围内均能提高水稻根端线粒体ATP酶的活力,同时观察到外源胆固醇能明显降低ATP酶表现活化能(Apparent activation energy,AEa)在Arrhenius图上的折点温度。其中通过根系吸收进入线粒体膜内后,其线粒体ATP酶AEa的两个折点温度由对照的27.7℃和15.5℃分别降低到24.5℃和12.7℃;直接与离体线粒体一起温育的两个折点温度分别降低到18.8℃和9.6℃。试验结果证明,适量的外源胆固醇不仅对水稻根端线粒体ATP酶活力具有明显的促进作用,而且对降低线粒体膜脂的相变温度也有明显的调节作用。     

神经节苷脂GM_3对肌质网Ca~（2＋）－ATP酶活力的调节

研究了神经节苷脂ＧＭ_３参入肌质网膜后Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶活力的变化,结果表明：ＧＭ_３参入肌质网膜后,对肌质网Ｃａ~（２＋）ＡＴＰ酶活性（ＡＴＰ水解活力与转运活力）有明显的激活作用．当参入的ＧＭ_３浓度为８μｍｏｌ／Ｌ、参入时间为１２０ｍｉｎ、温度为３０℃时,对Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶的激活作用最大．     

花生油及油酸对消炎痛引起的大鼠胃粘膜损伤的保护作用

本工作研究了花生油及油酸对由消炎痛所致的大鼠胃粘膜损伤的保护作用。用花生油1.0ml,油酸0.25、0.5和1.0ml 灌胃均能明显地减轻由消炎痛引起的胃粘膜损伤,其中油酸的作用还呈现明显的量-效关系。而30%甘油、油酸乙酯、5%葡萄糖或0.1%乙酸各1.0ml灌胃则无效。将油酸注入空肠,其作用与灌胃相似。阿托品、酚妥拉明和心得安不能阻断油酸的上述保护作用。这些结果表明,花生油及油酸具有明显的保护胃粘膜的作用。油酸这种作用主要不是通过提供能量,也不是通过副交感神经和交感神经传递,而可能是通过它作用于小肠刺激多种胃肠激素释放而产生的。     

二硫苏糖醇对叶绿体H~＋－ATP酶复合体CF_0的修饰

ＤＴＴ（二流苏糖醇）可解除ＴＰＴ（氯化三苯锡）对叶绿体光合磷酸化的抑制、减弱ＴＰＴ对类囊体跨膜△ｐＨ的抑制和对类囊体腔内质子外流的促进。由于ＴＰＴ较专一作用于ＣＦ０,推测ＣＦ０受ＤＴＴ修饰。这从ＤＴＴ可消除ＴＰＴ对去除ＣＦ１的类囊体残缺膜△ｐＨ的重建和对残缺膜光下收缩的促进得到进一步的证明。ＤＴＴ的作用是还原二硫键成为游离的巯基,因而ＣＦ０可能含有二硫键。从光下ＤＴＴ或暗中ＤＴＴ处理残缺膜对ＴＰＴ作用的影响,可以看到ＤＴＴ对ＣＦ０的修饰是需光的,类囊体膜在光下发生的构象变化,使ＣＦ０的二硫键暴露而被ＤＴＴ修饰。ＣＦ０的二硫键较ＣＦ１γ的二硫键更快、更敏感地被ＤＴＴ所修饰。     

牛心线粒体ATP酶抑制蛋白对酶的催化部位构象的影响

以标记在ＡＴＰ酶（Ｆ_１）催化部位的ＴＮＰ－ＡＴＰ为荧光探针,比较测定了Ｆ_１与其抑制蛋白（ＩＦ_１）结合前后的ＴＮＰ－ＡＴＰ荧光光谱、荧光寿命和荧光偏振光谱。结果表明在ＩＦ１的作用下,酶分子催化部位的极性下降,ＴＮＰ－ＡＴＰ分子运动的自由度减小,提示ＩＦ_１引起了Ｆ_１催化部位的构象改变。     

Structural aspects of the gastric H,K-ATPase

The gastric H,K-ATPase is an alpha,beta heterodimer. The large catalytic subunit is composed, in the case of the hog enzyme, of 1033 amino acids, whereas the beta subunit is composed of about 291 amino acids and is heavily glycosylated. The membrane topology of the alpha subunit is difficult to predict using hydropathy analysis. Tryptic hydrolysis of intact, inside out vesicles followed by cysteine labelling with fluorescein-5-maleimide provided experimental evidence for an 8 membrane spanning model for the alpha subunit, between residues 104 and 162 (M1/M2), 291 and 358 (M3/M4), 776 and 835 (M5/M6), and 853 and 946 (M7/M8). No evidence was found for a pair of segments (M9/M10) towards the C terminal end of the molecule, contrary to predictions for the Na,K- and Ca-ATPases. Iodination of intact vesicles followed by carboxypeptidase Y cleavage of the C terminal tyrosines showed that the C terminal end of the alpha subunit was cytoplasmic. The epitope for antibody 146 was extracytoplasmic and located between residues 871 to 874 between M7/M8. The binding site of the K competitive imidazo-pyridine, SCH28080, was to the extracytoplasmic loop between M1 and M2, whereas the binding of the covalent SH reagent generated from acid activation of omeprazole in acid transporting vesicles was to 2 cysteines at positions 813 (or 822) and 892 predicted to be in the extracytoplasmic loops connecting M5/M6 and M7/M8, respectively. The beta subunit was only hydrolysed in broken vesicles. A fragment beginning at position 236 was liberated under these conditions only in the presence of reducing agents, showing that cysteine 210 and 263 were disulfide linked. It seems that this subunit has only a single membrane spanning segment as predicted by hydrophobicity. Binding of either SCH28080 or omeprazole to the extracytoplasmic face of the enzyme affected cytoplasmic conformational changes, showing that there was transmembranal transmission of changes of shape of the protein.     

The human non-gastric H,K-ATPase has a different cation specificity than the rat enzyme

The primary sequence of non-gastric H,K-ATPase differs much more between species than that of Na,K-ATPase or gastric H,K-ATPase. To investigate whether this causes species-dependent differences in enzymatic properties, we co-expressed the catalytic subunit of human non-gastric H,K-ATPase in Sf9 cells with the β₁ subunit of rat Na,K-ATPase and compared its properties with those of the rat enzyme (Swarts et al., J. Biol. Chem. 280, 33115-33122, 2005). Maximal ATPase activity was obtained with NH₄⁺ as activating cation. The enzyme was also stimulated by Na⁺, but in contrast to the rat enzyme, hardly by K⁺. SCH 28080 inhibited the NH₄⁺-stimulated activity of the human enzyme much more potently than that of the rat enzyme. The steady-state phosphorylation level of the human enzyme decreased with increasing pH, [K⁺], and [Na⁺] and nearly doubled in the presence of oligomycin. Oligomycin increased the sensitivity of the phosphorylated intermediate to ADP, demonstrating that it inhibited the conversion of E₁P to E₂P. All three cations stimulated the dephosphorylation rate dose-dependently. Our studies support a role of the human enzyme in H⁺/Na⁺ and/or H⁺/NH₄⁺ transport but not in Na⁺/K⁺ transport.     

中西医结合治疗消化性溃疡并H.yilori感染的效果分析

目的：研究消化性溃疡并幽门螺杆菌(H3pylori )感染初治失败患者血浆网膜素-1 (Omentin-1)水平的变化及中西医结合干预 治疗的效果。方法：选择2011 年9 月～2015 年9 月在我院进行诊治的消化性溃疡患者82 例观察组,采用阿莫西林,奥美拉唑、拉 霉素和清幽口服液等中西医结合治疗,并选择20 例健康体检者为对照组。采用ELISA 法检测血浆Omentin-1 水平,分析血浆 Omentin-1 水平与一氧化氮（NO）、白细胞介素-2（IL-2）、内皮素-1(ET-1)、肿瘤坏死因子alpha（TNF-alpha）的关系。观察中西医结合治疗 前后病例组血浆Omentin-1 水平的变化并评价根除的疗效及安全性。结果：进行中西医结合治疗后, H.pylori根除率达 88.6%;有34 例溃疡痊愈,22 例显效,33 例有效,3 例无效,愈合率为68.29% (56 /82),有效率为96.34% (79/82);观察组血浆 Omentin-1 水平为(18.15 ± 3.96) ng/mL,明显低于对照组的(23.12 ± 6.03) ng /mL(P<0.05);与对照组相比,观察组的NO、IL-2 水 平明显降低(P<0.05),ET-1,TNF-alpha和IL-6 水平明显升高(P<0.05);与治疗前相比,经中西医结合治疗后NO、IL-2 水平明显降低 (P<0.05),ET-1,TNF-琢和IL-6 水平明显升高(P<0.05);观察组血浆Omentin-1 与IL-2、NO 呈明显正相关( r = 0.412,P<0.05 和r = 0.382,P<0.05),与IL-6 和TNF-琢呈明显负相关( r =-0.246,P<0.05 和r = -0.258,P<0.05)。结论：中西医结合治疗能升高血浆 Omentin-1 水平,有效提高溃疡愈合率及H.pylori根除率,抑制炎性因子的分泌,增强内源性NO保护作用和机体免疫功能。     

Effect of thyroid hormone on the distribution and activity of Na, K-ATPase in ventricular myocardium

Employing detergent-free sucrose-density gradient fractionation method we isolated cholesterol-rich lighter membrane fractions containing ∼10% of protein, ∼30% of cholesterol in membranes of ventricular myocardium. Cholesterol-rich lighter membrane fractions contain >70% of Na, K-ATPase and caveolins 1 and 3 and <10% of β-actin. Treatment of hypothyroid rats with T₃ increased the relative abundance of both α1 and β1 Na, K-ATPase subunits in total membranes by 4- to 5-fold (with no change in caveolin-3), and resulted in 1.9-fold increase in enzyme activity. T₃-induced Na, K-ATPase subunits were preferentially distributed to the lighter fractions (#s 4, 5 and 6); and increased abundance of α1 and β1 were 34-70% and 43-68%, respectively. We conclude that the activity of Na, K-ATPase is not uniform in cardiac membranes, and while a significant amount of Na, K-ATPase is present in cardiac cholesterol-rich membrane fractions, the intrinsic activity is significantly less than the enzyme present in relatively cholesterol-poor membranes.     

中医药治疗胃溃疡的特色

胃溃疡是临床常见但十分棘手的消化系统疾病,主要临床表现为长期性、周期性、节律性上腹部疼痛。现代治疗多采用西医治疗,效果显著,但复发率高、不良反应较大。大量研究表明,祖国医学对治疗胃溃疡具有独特的优势,且在临床上取得了良好的疗效,尤其是大大降低了胃溃疡的复发率。关于中医药治疗胃溃疡的方式非常成熟且规范全面,主要包括辨证论治、专方加减、专药治疗、其他中医治法等,说明中医药治疗胃溃疡具有一定的特色及广阔的前景,同时也面临一些问题,需要医务人员共同思考并解决。现将中医药治疗胃溃疡的现状概述如下。     

传输靶向COX-2 siRNA联合化疗药物对大鼠胃癌细胞生长

目的：通过动物实验探讨传输靶向COX-2 siRNA联合化疗药物对大鼠胃癌细胞生长的抑制作用。方法：24 只健康SD 大鼠 平分为三组,治疗组用COX-2-siRNA转染的胃癌SGC7901 细胞接种,同时进行环磷酰胺、丝裂霉素C 化疗治疗;阴性对照组,用 阴性对照siRNA 转染的胃癌SGC7901 细胞接种,同时进行环磷酰胺、丝裂霉素C 化疗治疗;对照组(n=8),用未经转染的胃癌 SGC7901 细胞接种,不进行化疗治疗;三组转染后都接种了裸鼠。结果：治疗组、阴性对照组及对照组胃癌细胞凋亡率分别为 （22.28± 0.12）%、（1.23± 0.17）%和（1.03± 0.14）%,治疗组与阴性对照组和对照组比较差异都有统计学意义(t=18.152,17.555, P<0.05)。治疗组的抑瘤率为76.7%,阴性对照组和对照组分别为12.8%和6.89%,治疗组的抑瘤率明显高于其他两组(x2=15. 211,13.899,P<0.05)。Western blotting检测结果显示治疗组的COX-2 蛋白表达含量得到了明显抑制。结论：传输靶向COX-2 siRNA和化疗药物的配合应用可有效抑制COX-2 蛋白的表达,从而抑制胃癌细胞的生长,从而起到更好的治疗效果。     

不同时程束缚水浸应激对大鼠胃排空的影响

目的研究不同时程慢性束缚水浸应激对大鼠胃排空的影响。方法48只雄性150 g左右SD大鼠被随机分为6组,即实验3、72、8 d组和对照3、72、8 d组,每组8只。实验期间,每日观察大鼠体重、一般状况及行为学指标。实验组23℃水域箱内束缚水浸1 h/d,对照组自由摄食饮水。采用半固体排空实验（阿拉伯胶炭糊）来检测胃排空率,数据录入SPSS 13.0进行分析处理。结果①体重增加情况：不同组别和不同应激时间这两个因素对体重增加的影响差异均有显著性。②胃排空率：对照各组间比较均无统计学差异。3 d组间（实验3d组与对照3 d组）大鼠胃排空率无差异;而7 d组间和28 d组间比较则明显异常。随着应激时间的延长,实验组胃排空率呈现了先增高（7 d时）后降低（28 d）的变化趋势,且实验3 d组与7 d组、7 d组与28 d组间比较均有明显的统计学意义,而3 d组与28 d组比较则无统计学差异。结论不同时程的慢性束缚水浸应激可以导致大鼠胃排空率改变;随着应激时间的延长,呈现先上升后下降的规律。     

传输靶向COX-2 siRNA联合化疗药物对大鼠胃癌细胞生长的抑制作用

目的：通过动物实验探讨传输靶向COX-2siRNA联合化疗药物对大鼠胃癌细胞生长的抑制作用。方法：24只健康SD大鼠平分为三组,治疗组用COX-2-siRNA转染的胃癌SGC7901细胞接种,同时进行环磷酰胺、丝裂霉素C化疗治疗;阴性对照组,用阴性对照siRNA转染的胃癌SGC7901细胞接种,同时进行环磷酰胺、丝裂霉素C化疗治疗;对照组（n=8）,用未经转染的胃癌SGC7901细胞接种,不进行化疗治疗;三组转染后都接种了裸鼠。结果：治疗组、阴性对照组及对照组胃癌细胞凋亡率分别为（22．28±0．12）％、（1．23±0．17）％和（1．03±0．14）％,治疗组与阴性对照组和对照组比较差异都有统计学意义（t=18．152,17．555,P〈0．05）。治疗组的抑瘤率为76．7％,阴性对照组和对照组分别为12．8％和6．89％,治疗组的抑瘤率明显高于其他两组（x^2=15．211,13．899,P〈0．05）。Western blotting检测结果显示治疗组的COX-2蛋白表达含量得到了明显抑制。结论：传输靶向COX-2 siRNA和化疗药物的配合应用可有效抑制COX-2蛋白的表达,从而抑制胃癌细胞的生长,从而起到更好的治疗效果。     

Obestatin对血浆ghrelin和nesfatin-1水平及胃排空的影响

目的:探讨侧脑室注射obestatin对大鼠血浆酰基化ghrelin、去酰基化ghrelin、nesfatin-1水平的影响以及对胃排空的调控。方法:侧脑室注射obestatin,采用酶免疫测定(EIA)法检测血浆酰基化ghrelin、去酰基化ghrelin、nesfatin-1水平以及胃排空率的变化。结果:侧脑室分别注射0.1、0.3或1.0 nmol obestatin,大鼠血浆酰基化ghrelin、去酰基化ghrelin以及nesfatin-1水平无显著改变(P0.05),且酰基化ghrelin与去酰基化ghrelin比率无显著改变(P0.05);侧脑室注射obestatin,大鼠摄食量无显著改变,但胃排空率明显增加(P0.05);胃排空率明显延迟(P0.05)。与侧脑室注射1.0 nmol Obestatin组相比,注射1.0 nmol Obestatin+CRF,大鼠摄食量无显著改变,胃排空率明显延迟(P0.05)。各组摄食量及进入十二指肠内食物量无明显差异(P0.05)。结论:中枢obestatin促进大鼠的胃排空,可能与h/r CRF通路有关。     

内源性Orexin-A调控大鼠胃运动的中枢及外周机制

目的:探讨内源性Orexin-A(OXA)对大鼠胃运动的中枢和外周作用机制。方法:选取成年Wistar大鼠为研究对象,通过禁食诱导大鼠合成内源性OXA。血浆OXA浓度采用放射免疫法测定。实验前大鼠注射OXA受体拮抗剂SB334867,观察内源性OXA的作用。迷走神经切断术用来观察迷走神经的介导作用。胃排空采用分光光度法测量,消化间期胃运动通过在胃窦部植入一应力传感器测量。Orexin前体(PPO)在胃和下丘脑组织的表达,采用蛋白印迹确定。结果:禁食18 h后,血浆OXA水平和PPO蛋白表达显著增加(P0.05),在禁食36 h组达到最高水平(P0.01)。内源性OXA促进胃排空(P0.05),抑制消化间期胃蠕动(P0.05)。外周注射SB334867均能阻断上述胃动力效应(P0.05),但对PPO表达没有影响。迷走神经切断术不能阻断内源性OXA的介导作用(P0.05)。结论:禁食能诱导内源性OXA的合成,内源性OXA能加速胃排空,同时它又抑制消化间期胃蠕动。