醛化人血清火箭免疫电泳Ig定量技术——Ⅰ.人血清蛋白质醛化条件及IgG定量的初步探讨

本文确定了醛化人血清的最适条件是:0.3毫升稀释的血清加0.2毫升2.2M甲醛,37℃保温5分钟。已醛化的血清在含1.4%兔抗人IgG抗血清的琼脂糖凝胶中电泳150分钟,出现单一的正极峰,染色后可用厘米直尺测量峰高。同一血清样品同时使用Mancini免疫单扩散法进行测定。两法结果相比较,误差无显著性意义。认为本文醛化条件用于血清IgG定量测定具有快速、敏感和重复性良好等优点。     

醛化人血清火箭免疫电泳Ig定量技术 Ⅰ.人血清蛋白质醛化条件及IgG定量的初步探讨

本文确定了醛化人血衍的最适条件是:0.3毫升稀释的血清加0.2毫升2.2M 甲醛,37℃保温5分钟。已醛化的血清在含1.4%兔抗人IgG 抗血清的琼脂糖凝胶中电泳150分钟,出现单一的正极峰,染色后可用厘米直尺测量峰高。同一血清样品同时使用Mancini 免疫单扩散法进行测定。两法结果相比较,误差无显著性意义。认为本文醛化条件用于血清IgG 定量测定具有快速、敏感和重复性良好等优点。     

鼠源戊型肝炎病毒IgG抗体定量检测方法的建立

目的制备鼠源戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)抗体定量参考品,建立小鼠HEV IgG抗体定量检测方法,并对其进行验证及初步应用。方法制备鼠源抗-HEV IgG参考血清MS1,以世界卫生组织人源抗-HEV Ig标准品(NIBSC code:95/584)对其进行标定并检测其稳定性;以标定的参考品为标准,建立小鼠HEV IgG抗体定量检测方法,对线性、范围、重复性、准确度等进行验证,并对戊肝疫苗免疫后小鼠血清进行HEV IgG抗体定量检测。结果制备的MS1血清含量为30.9U/m L(95%CI:±1.1),CV为4.8%;加速稳定性试验和冻融稳定性试验中,MS1含量CV均15%。建立的小鼠抗-HEV IgG抗体定量检测方法在0.01~0.15 U/m L范围内具有良好的线性(r0.99);灵敏度为0.007 U/m L;对高、中、低3份不同含量抗-HEV阳性小鼠血清重复检测3次,CV均10%;加样回收率为83.8%~107.7%。戊肝疫苗免疫1 w,3 w,5 w时,小鼠血清HEV IgG抗体均值分别为0.3 U/m L、39.4 U/m L、345.4 U/m L。戊肝疫苗初次免疫小鼠1 w后抗体阳转率为100%,但抗体均处于较低水平;血清抗体水平随着免疫针次的增加而升高(P0.05)。结论制备的鼠源HEV IgG抗体定量参考稳定性良好的,建立的小鼠HEV IgG抗体定量检测方法,具有良好的灵敏度、重复性及准确度,可用于小鼠实验中戊肝疫苗免疫原性的评价。     

立克次体病的检疫和诊断(续三)

<正> a.按上表,用微量滴管吸取1％正常兔血清盐水滴在V型血清盘1-8或1-12孔内,每孔0.025ml,然后用定量吸管吸取待检血清0.025ml于第一孔内,(或用0.025ml的定量稀释棒直接蘸取血清)从第一孔倍比稀释。 b.有定量吸管吸取1％抗原致敏的红血球,每孔0.025ml。 并按上法同时作已知阳性血清、阴性血清、盐水和醛化血球对照。 c.在微型振荡器上振荡3分钟,放置37℃水浴箱内静置2小时后判读结果。 3)间接血凝抑制试验 用抗原致敏血球测知抗原(病原体)效价。     

纸层析法测定庆丰霉素

我们通过试验,找到了一种测定庆丰霉素的纸层析法,此法简易、快速、较准确。现介绍如下。一、试剂层析溶剂:正丁醇:冰乙酸:蒸馏水=2.8:1:1。显色剂:0.3克茚三酮,5毫升吡啶用95%的乙醇定容为100毫升配成。春雷霉素溶液(作定量标准用):贮备液为2毫克/毫升,用时以蒸馏水稀释为500微克/毫升。贮备液可在冰箱中保存三个月。     

静注人免疫球蛋白IgG含量测定中的影响因素

为了进一步分析静注人免疫球蛋白(IVIG)IgG含量测定中的影响因素,分别以不同的稀释缓冲液、不同的稀释度、不同的稳定剂对IVIG的IgG含量进行测定。结果表明以不同的稀释缓冲液、不同的稳定剂测定的同批IgG含量无显著性差异;而用不同的稀释度测定的同批IgG含量有差异。因此可见,IVIG制品中采用的不同稳定剂对IgG含量测定影响不大;可以用不同的稀释度测定的均值作为该批IVIG制品的IgG含量。     

应用双抗体夹心ELISA法定量检测人源破伤风毒素单克隆抗体中的IgG含量

采用山羊抗人IgG作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG作为标记抗体,建立一种双抗体夹心法用于定量检测人源破伤风毒素单克隆抗体的IgG含量。以纯化的IgG作标准,用平行线法测得亲和层析纯化的人源破伤风毒素单克隆抗体G2的含量为0．512μg／ml,与分光光度法测得的结果基本一致。因而样品检测采用纯化G2作参考标准,制作标准曲线,测定了已知样品和未知样品的抗体含量。结果表明本法重复性好,特异性强,可定量测定培养及纯化样品中人源单克隆抗体的含量。     

基于IgG检测为模型的玻璃介质定量蛋白质芯片的研制及评价

为研制高通量定量检测的蛋白质芯片,以人血清IgG为研究模型,选择戊二醛基修饰的玻片为载体,蛋白质样品溶解于20%甘油的PBS,由机械手将浓度为0.5g/L人IgG单克隆抗体点样在玻片上,人血清白蛋白为阴性对照,以1%的BSA为封闭液对蛋白质芯片进行封闭,并经相应处理,构建用于定量检测人血清IgG蛋白质芯片.先以不同浓度IgG标准品为待测样品,建立蛋白质芯片方法和ELISA方法的标准曲线,两条标准曲线的R2值分别为0.996和0.994(P<0.01).两种方法的检测人IgG结果有很好的相关性(R2=0.9937,P<0.01),其敏感性均在15.625μg/L.用两种方法分别检测10例人血清IgG,结果显示两种方法的检测的IgG浓度有很好的一致性,以玻片为载体的蛋白质芯片可用于微量生物样品的定量检测.     

人血清中肺炎链球菌荚膜多糖IgG抗体定量ELISA的初步验证

目的对肺炎链球菌荚膜多糖Ig G抗体定量ELISA,用于人血清中12F、19A、22F及33F型Ig G抗体的检测进行初步验证。方法以不同生产企业相同型别的12F、19A、22F及33F型荚膜多糖为包被抗原,用肺炎链球菌荚膜多糖Ig G抗体定量ELISA,对人血清中12F、19A、22F及33F型Ig G抗体进行定量检测,并对该方法的线性、检测限、检测范围、准确度、精密度、特异性进行初步验证。结果该方法检测13份质控血清的12F、19A、22F及33F型Ig G抗体的范围分别是0.02~4.38 ng/m L、0.14~34.68 ng/m L、0.10~25.20 ng/m L和0.12~29.78 ng/m L,r2均0.99,最低检测限分别为0.35 ng/m L、0.37 ng/m L、0.44 ng/m L和0.88 ng/m L。准确度为71.15%;试验间CV值均20%;特异性均85%。结论肺炎链球菌荚膜多糖Ig G抗体定量ELISA,用于人血清中12F、19A、22F及33F型Ig G抗体的检测,需对准确度、精密度和特异性进一步验证。     

长爪沙鼠IgG的纯化及抗血清的制备

目的 纯化长爪沙鼠血清IgG,制备兔抗长爪沙鼠IgG抗血清。方法 采用Hitrap Protein G亲和层析预装柱来纯化长爪沙鼠血清IgG;通过SDS-PAGE电泳和Western-Blotting免疫印迹法对长爪沙鼠血清IgG进行纯度鉴定,免疫兔子制备抗血清。结果 7 mL长爪沙鼠血清纯化得到11 mg IgG;电泳和免疫印迹测定,IgG纯度大于95%;用纯化的IgG作抗原制备了兔抗血清,免疫双扩散测定效价达1∶32。结论 建立了长爪沙鼠血清IgG的纯化方法,制备了长爪沙鼠IgG抗血清,证实长爪沙鼠血清IgG和Protein G具有较高的亲和性。     

免疫球蛋白的结构与功能

免疫球蛋白(简称Ig),在人体上已发现有五类:IgG、IgA、IgM、IgD及IgE。根据结构和功能的差异,有的又细分为若干亚类,如IgG分为IgG1,IgG2,IgG3,IgG4等。五类Ig中,IgG含量最多,功能了解得最详尽,结构也研究得最清楚。60年代,基于化学法和酶解法的研究,提出Ig分子的四链化     

放射对流免疫电泳自显影术测定血清甲种胎儿蛋白

本文介绍放射对流免疫电泳自显影术测定甲种胎儿蛋白(简称AFP)。此方法具有快速、敏感、简易等特点,是一种比较适合农村的放射免疫测定方法。它的检测范围在25毫微克-25微克/毫升之间, ~(131)I-AFP的有效使用期限较长。用此方法进行普查得到了较为满意的结果。对偶尔发生的非特异性反应,可用放射免疫双向扩散自显影术鉴别。近年来,放射免疫测定血清甲种胎儿蛋白已在临床上广泛应用。饱和分析和放射对流免疫电泳定量法,虽可精确定量10毫微克/毫升左右,但操作过程较长,需要计数仪。为了更好地落实毛主席“把医疗卫生工作的重点放到农村去”的伟大号召,简化放射免疫测定是必要的。标记抗原参人火箭电泳自显影法(简称放射火箭自显影)的建立和应用,为普及放射免疫测定AFP开创了新的途径,但建立多种敏感度高、特异性强、并适合于普查用的放射免疫测定法,仍是临床和研究的需要。本文介绍的放射对流免疫电泳自显影术(简称放射对流自显影),可能成为简单、易行,便于普及的放射免疫测定方法之一。     

貉血清IgG纯化及抗血清的制备

目的 制备高纯度貉血清IgG和兔抗貉IgG抗血清,作为建立多种动物抗体检测技术的储备。方法 采用Hitrap Protein A亲和层析及盐析再沉淀法纯化貉血清IgG,通过PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法对IgG作纯度及免疫活性检测;常规免疫法制备兔抗貉IgG血清。结果 貉血清IgG与Protein G虽有较强的结合力,但同时也结合血清中其他杂蛋白;用二步纯化法可从5 mL貉血清中纯化IgG约7 mg,电泳和免疫印迹测定显示,IgG纯度大于95%,常规免疫法制备抗血清免疫双扩散效价达1∶32。结论 建立了可行的貉血清IgG的纯化方法和高效价的兔抗貉血清IgG抗血清,为貉血清IgG二级抗体酶联物的制备储备了资源。     

重组抗CD52人源化单克隆抗体ELISA检测方法的建立

目的:建立一种灵敏、特异、快速的ELISA方法,用于检测食蟹猴血清中重组抗CD52单克隆抗体的含量。方法:采用双抗夹心ELISA法对重组抗CD52单克隆抗体进行定量。以猴血清吸附的羊抗人Ig G作为包被抗体,稀释的猴血清吸附的羊抗人Ig G-HRP(二抗)作为检测抗体,加入底物显色剂后在酶标仪上读取D450nm值。结果:建立并确证了检测重组抗CD52单克隆抗体的ELISA方法,方法的线性范围为7.81~500 ng/m L,定量下限为7.81 ng/m L,板内及板间精密度和准确度均在±15%以内,室温、冻融、稀释效应稳定性良好。结论:方法学验证表明ELISA法测定食蟹猴血清中重组抗CD52单克隆抗体浓度的特异性、精密度和准确度均满足新生物制药临床前药代动力学研究指导原则要求,可用于重组抗CD52单克隆抗体的检测。     

用氚化胸腺嘧啶核苷测定淋巴细胞转化——Ⅱ.影响全血培养和同位素参入的一些基本因素

我们应用氚化胸腺嘧啶核苷研究了人的全血培养时影响淋巴细胞转化和同位素参入的一些基本因素。在2毫升培养液含20万淋巴细胞,培养70小时,于收获前4或16小时加氚化胸腺嘧啶核苷以每毫克分子含5居里的比活性,每管2微居里为较好条件;在不同的培养液中,淋巴细胞对植物血凝素反应的程度不一样,以RPMI1640液效果最好;植物血凝素的浓度能明显的影响淋巴细胞转化,且个体之间反应浓度不尽相同,多数人以我们实验室粗制每毫升含40微克的PHA为宜。有条件最好做剂量反应曲线;全血培养可省略小牛血清和5%CO_2-空气的调节,此时培养液配制时以pH7.6为宜。用国产49型玻璃纤维滤片过滤和测量的方法是研究全血培养淋巴细胞转化的一个较理想的方法。     

静注人免疫球蛋白中IgG含量检测方法的探讨

为了更好地进行生产质量控制,快速、准确的测定静注人免疫球蛋白中的IgG含量。实验中对2001~2008年的静注人免疫球蛋白中的IgG含量检测结果进行了抽样统计分析。分析结果表明:样品40倍稀释后测得的吸光值与标准曲线第三点的吸光值无显著性差异;样品40倍稀释后测得的IgG含量与样品进行20、30、40倍三个稀释度测得的IgG含量的平均值无显著性差异。从而证明,样品40倍稀释后测得的IgG含量可以代表该批样品的IgG含量,无需进行20、30倍的稀释。检测方法会更省时、省力、省材料。     

萤光抗体技术非特异染色因素去除方法的研究

近年来萤光抗体技术有了很多改进,但萤光血清的非特异染色问题,仍未获得满意的效果。本文报告消除异硫氰酸萤光黄标记抗体的非特异性萤光染色的试验结果。一、萤光血清的制备及染色法 1.免疫血清直接染色法免疫血清甲型流感病毒PR8株,用豚鼠血球吸附游离法提纯病毒,心脏注射免疫豚鼠（400-500克）,每只1毫升,2周后取血测效价为1:640-1:2560.（血球凝集抑制试验） 间接染色法免疫血清取正常豚鼠血清,用10%甲明矾沉淀,沉淀物用生理盐水洗两次,然后溶解在适量的生理盐水中,肌肉注射家免,每周1次,共两次,第二次注射后两周取血测效价为I:16000。（沉淀试验） 2.提取球蛋白用半饱和硫酸铵法提取球蛋白。一般总蛋白量为3.5%-5%。     

蝙蝠血清IgG的纯化及兔抗蝙蝠IgG酶标抗体的制备

目的纯化蝙蝠血清IgG,制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体。方法采用亲和层析纯化法纯化蝙蝠血清IgG,SDS-PAGE电泳鉴定蝙蝠IgG纯度。免疫大白兔制备兔抗蝙蝠IgG抗血清,免疫双扩散法测定抗血清效价,亲和层析纯化法纯化抗血清IgG。用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,直接ELISA和Western blot法对兔抗蝙蝠IgG酶标抗体进行工作浓度测定。结果纯化的蝙蝠血清IgG,其SDS-PAGE测定纯度大于95%;免疫大白兔所制备的抗血清免疫双扩散效价为1∶64;用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,其直接ELISA和Western blot工作浓度分别为1∶12800和大于1∶2000。结论制备了蝙蝠血清IgG的抗血清和酶标抗体,为蝙蝠的血清学检测体系提供了技术和资源储备。     

辐射状免疫扩散法测定破伤风免疫球蛋白的效价

<正> 用体内法测定特异性免疫球蛋白的破伤风抗体效价,花费大,时间长。在生产的各个阶段和分装成安瓶后其效价都有很大变化。为测定其效价需要制定一种简单可靠而又廉价的方法,辐射状免疫扩散法就能达到此目的。我们把它和其他方法作了比较。 材料和方法 1.小鼠测定效价 毒素 对照用的毒素是巴斯德研究所Turpin教授浓缩的,保存在4-8℃。毒素稀释用pH7.2的蛋白胨水。 血清标准 按国际单位滴定效价,保存在-25℃。用时,用氯化钠等渗溶液稀释。 小鼠 由同一饲养场按需要供应,每次检定用同批供应的 CE1母鼠。每只重 16克±1,每个笼子装6只,笼底垫软。运送时,温度保持在19-21℃。     

植物维管束透明法

1.选幼嫩蚕豆一株连根拔出,用清水洗净根、茎表面污物备用。 2.将根部浸入碱性洋红溶液(配制:取0.5克碱性洋红溶解于2毫升95%酒精中后,用自来水稀释至150毫升)中染色12小时左右,待细小叶脉染为红色后,取出,用清水漂洗数分钟。