Differential recognition of MHC class I molecules of xeno-/allo-endothelial cells by human NK cells

Using human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and porcine aortic endothelial cells (PAEC) as target cells, human peripheral blood NK cells (PBNK) and NK92 cells as effector cells, the differential cytotoxicities of NK cells to allo- and xeno-endothelial cells were studied. The influence of MHC class I molecules on the cytotoxicity of human NK cells was assayed using acid treatment, and blockades of MHC class I antigens, CD94 and KIR (NKB1). The results indicated that the killing of PAEC by the two kinds of NK cells is higher than that of HUVEC. After acid-treatment, the cytotoxicity of the two kinds of NK cells to PAEC and HUVEC is significantly enhanced, but the magnitude of the enhancement is different. The enhancement of NK killing to acid treated HUVEC is much greater than that to PAEC. Blockade of CD94 mAb did not alter the NK cytotoxicity, while blockade of NKB1 mAb enhanced the cytotoxicity of PBNK to HUVEC and PAEC by 95% and 29% respectively. The results above suggested that the different     

人NK细胞对猪/人血管内皮细胞的差异粘附

采用^51Cr标记法和^3H-TdR摄入法研究了人外周血NK细胞（PBNK）和人NK细胞系－－NK92对猪主动脉内皮细胞（PAEC）和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的粘附作用。结果表明,NK92和PBNK对PAEC的粘附率显著高于对HUVEC的粘附率;rhTNF－α预刺激PAEC／HUVEC后,PBNK的粘附率呈现TNF－α剂量依赖性的增高;rhIFN－γ预刺激NK92／PBNK后,两者对PAEC粘附率的增幅均高于对HUVEC的增幅;CD11a（LFA－1）单抗可以以不同程度地抑制PBNK对静息和TNF－α激活的PAEC的粘附作用。这些结果显示,NK细胞在细胞介导的异种移植排斥反应中起重要作用。     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体及其配体与疾病关系的研究

杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)主要表达在NK细胞和部分T细胞膜表面,通过识别细胞表达的MHC-Ⅰ类分子来调节NK细胞的活性,在病原体感染、自身免疫性疾病、妊娠、移植排斥、肿瘤等疾患中起重要作用,本文就近年来KIR及其配体HLA与相关疾病关系的研究作一综述。     

CD1d/NKT在抗HBV和HCV中的作用

CD1d是人类白细胞表面的抗原分子,它可以将脂质抗原递呈给天然杀伤T细胞（NKT）,使其激活.而NKT是近年来发现的一类特殊的T细胞,它既可以表达T细胞表面标志,又可以表达天然杀伤细胞（NK）表面标志,能识别由CD1d递呈的抗原,广泛参与自身免疫调节.近年来,许多研究发现,CD1d/NKT可以有效抑制肝炎病毒的复制.     

NKT细胞亚群

经典的NKT细胞是一类表面既具有T细胞又具有NK细胞标志的T细胞亚群。与普通T细胞相比,1.NKT细胞不受经典MHC I类分子限制,而受非经典MHC I类分子、CD1d分子限制,不识别蛋白质抗原,而是识别脂类抗原;2.NKT细胞的TCR     

滋养层细胞表面主要组织相容性复合体

胎盘滋养层是直接与母体接触的与母体基因型不同的胎儿组织,滋养层细胞是否表达主要组织相容性复 合体(MHC)抗原以及表达何种MHC抗原对于妊娠成功与否至关重要.非经典MHCⅠ类抗原发现较晚,其中 HLA-G在滋养层细胞表达,可以保护带有父方同种异体抗原的胎儿免受母体免疫系统的杀伤.经典MHCⅠ类抗 原有多种亚型,不同亚型在滋养层细胞的表达有所不同.MHC Ⅱ类抗原在妊娠维持过程中表达极弱,新近的研 究资料表明,滋养层细胞CⅡTA在MHCⅡ类基因表达调控中起主要作用.     

抗人CD8单链抗体基因的构建

CD8分子分布于部分T淋巴细胞和胸腺细胞。是MHC Ⅰ类抗原的配体,它与MHC Ⅰ类分子结合可以稳定CTL与带有MHC Ⅰ类分子与抗原复合物的靶细胞的结合。近年来已有不少抗CD8的单抗被用于预防及治疗骨髓移植时的移植物抗宿主反应及心、肾移植时的免疫排斥反应,但这些鼠源性单抗应用于人体时,其异源性会引起免疫排斥反应,限制了它的临床应用,因而有必要对鼠源性抗体进行人源化     

生物肽SP对NK细胞活化性受体NCRs表达的影响

研究SP对NK92-MI细胞杀伤活性以及活化性受体NCRs(NKp46、NKp44和NKp30分子)的表达的影响,揭示SP对NK细胞杀伤功能的调节作用及其内在作用机制.MTT法测定NK92-MI细胞对K562细胞的杀伤活性;Real-Time PCR检测NCRs的mRNA表达;流式细胞术检测NCRs的膜表达.在10-14～10-8 mol/L浓度范围的SP作用24h,对NK92-MI细胞的杀伤活性有明显增强作用;10-14～10-8 mol/L的SP,均可增加NK92-MI细胞活化性受体NKp44、NKp46及NKp30的mRNA表达;该浓度范围的SP均可增加NKp46的膜表达水平,仅较低浓度( 10-14moL/L)的SP对NKp44的膜表达水平有增加作用,各浓度的SP对NKp30的膜表达水平均无明显影响.SP可通过上调活化性受体NCRs的表达水平来调节NK细胞的活性.     

人CD137抗体促进NK细胞对乳腺癌细胞特异性杀伤作用的体外研究

目的探讨人自然杀伤(NK)细胞在CD137抗体作用下通过抗体依赖性细胞毒性作用(ADCC)介导对乳腺癌细胞的杀伤作用。方法NK细胞表型和细胞因子检测实验分组:阴性对照组(未用人CD137抗体处理的NK细胞)、CD137抗体处理组(10μg/mL人CD137抗体处理4 h的NK细胞);NK细胞毒性检测实验分组:根据体系中是否添加NK细胞、人CD137抗体和西妥昔单抗分为8组。流式细胞术检测两组NK细胞表面CD16分子的表达情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测两组NK细胞培养上清液中干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α的浓度,乳酸脱氢酶(LDH)法检测8组反应体系中表皮生长因子受体(EGFR)高表达乳腺癌细胞系MDA-MB-231和EGFR低表达乳腺癌细胞系MDA-MB-453的杀伤比例,并采用t检验或析因分析进行统计学分析。结果与阴性对照组比较,CD137抗体处理组CD16+NK细胞比例(79.57﹪±0.92﹪比90.43﹪±0.67﹪)、细胞因子IFN-γ浓度[(388.90±7.02)pg/mL比(523.90±1.90)pg/mL]和TNF-α浓度[(20.59±4.09)pg/mL比(47.22±2.14)pg/mL]均升高,差异有统计学意义(P<0.05);MDA-MB-231细胞杀伤的三因素析因分析结果显示:NK细胞、人CD137抗体和西妥昔单抗3个因素分别对MDA-MB-231细胞的杀伤都有作用(F=5227.276、201.473、1792.242,P均<0.001),3个因素两两之间的交互作用对MDA-MB-231细胞的杀伤也都有作用(F=183.903、1517.187、33.483,P均<0.001),3个因素的二级交互作用差异有统计学意义(F=41.505,P<0.001)。结论人CD137抗体可增强NK细胞分泌细胞毒性因子IFN-γ和TNF-α的能力,同时可上调NK细胞表面CD16分子的表达,从而使得NK细胞可能通过西妥昔单抗介导的ADCC作用增强对表皮生长因子受体(EGFR)高表达乳腺癌细胞的杀伤作用。     

双歧杆菌脂磷壁酸对化疗荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的探讨双歧杆菌脂磷壁酸对5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗肝癌H22荷瘤小鼠免疫的影响及其作用机制。方法双歧杆菌脂磷壁酸处理5-Fu化疗的H纶荷瘤Balb／c小鼠,MTT法检测NK细胞和CTL细胞杀伤活性;采用流式细胞仪检测荷瘤小鼠脾细胞中T亚群比例;用RT-PCR和Western Not方法分别检测荷瘤小鼠肿瘤组织Foxp3和TIM-3mRNA及蛋白的表达变化。结果荷瘤小鼠脾细胞中CD4^＋ CD25^＋Tmg比例高,并存在Foxp3和TIM-3 mRNA及蛋白的高表达,经双歧杆菌LTA和5．Fu处理后CD4^＋CD25^＋Tmg比例下降,Foxp3和TIM-3mRNA及蛋白表达水平也均呈下调趋势,但5-FU单独处理后的荷瘤小鼠脾细胞中CD4^＋细胞比例也减少,NK细胞和CTL杀伤率均降低,而双歧杆菌LTA处理后CD4^＋细胞比例,NK细胞和CTL杀伤率却明显增加。二者联合处理也能增加CD^＋细胞比例及NK细胞和CTL杀伤率。结论双歧杆菌脂磷壁酸联合5-FU可通过增强NK细胞和CTL杀伤能力,同时抑制TIM-3／TIM-3L途径,降低CD4^＋CD25^＋Tmg的免疫抑制活性,增强机体细胞免疫来提高化疗抗肿瘤效果,减轻化疗副作用,增强宿主对化疗的耐受性,从而提高抗肿瘤作用。     

紫杉醇对NK-92MI细胞杀伤功能及凋亡的影响

探讨紫杉醇对人自然杀伤细胞系NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响。用不同浓度的紫杉醇处理NK.92MI细胞后,测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;同时检测NK·92MI细胞凋亡率及凋亡相关基因Bcl-2、Ba】【的表达。结果表明,紫杉醇可以抑制NK-92MI细胞增殖并且降低其杀伤活性,机制可能是通过诱导NK.92MI细胞的凋亡,而后者与Bcll2/Ba】【基因表达增高有关。     

新型双特异性单链抗体BiTEs及其在肿瘤治疗中的应用前景

BiTEs(bispecificTcellengagers)是一种以T细胞作为效应细胞的双特异性单链抗体 ,它具有两个抗原结合臂 ,可以同时和T细胞及靶细胞结合 ,并激活细胞毒性T细胞杀伤病变细胞。和其它双特异性抗体相比 ,BiTEs的分子柔韧性更好 ,能更好地促进CD3复合体和肿瘤靶标的连接 ,并且它不受T细胞受体和靶细胞上MHCⅠ类分子的约束 ,不需要共刺激分子的参与 ,是一种极具应用潜力的抗体形式。就BiTEs的结构、作用机理及其在肿瘤临床上的应用前景几个方面做一综述。     

人白细胞抗原-G1对NK92效靶识别过程的影响

人白细胞抗原G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)属非经典的主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)Ⅰ类分子,为自然杀伤细胞（natural killer,NK）抑制性受体的识别配体,可以向NK细胞传递抑制性信号,从而抑制NK细胞的细胞毒作用.为了研究HLA-G对NK与靶细胞识别作用的影响机制,采用激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞术对全长HLA-G1的表达和功能进行了探讨,并对效靶识别过程中靶细胞［Ca²⁺］_i（胞内自由钙离子浓度）进行了实时检测.结果发现,全长的HLA-G1表达于K562、JAR和CHO细胞的胞浆和胞膜上,它能够部分地抑制NK92的细胞毒作用. NK92与CHO和GFP-CHO细胞作用后,靶细胞［Ca²⁺］_i出现了明显的升高,HLA-G1的表达则抑制了靶细胞［Ca²⁺］_i的升高.结果提示：靶细胞［Ca²⁺］_i的升高是有效的细胞杀伤作用的必要条件,HLA-G的免疫抑制功能可能与靶细胞胞内钙离子浓度升高的抑制作用有密切关系.     

血管内皮细胞MICA基因mRNA和蛋白质表达

MICA系MHC-I类相关多态性基因A,其表达细胞膜蛋白质分子与器官移植免疫排斥有关.新生儿脐带静脉血管内皮细胞(HUVEC)被分离和培养至4～6代.11例新分离培养的HUVEC和7种人细胞株的MICAmRNA转录水平用RT-PCR检测,应用细胞流式检测细胞膜表面的MICA分子的表达情况,同时应用免疫印迹的方法对整个细胞MICA蛋白质的表达水平进行检测和分析.结果显示MICAmRNA在所有检测细胞中有表达,HUVEC细胞膜或胞浆中MICA蛋白质表达量很高,而在人体淋巴细胞膜表面和胞内未检出MICA分子的表达.提示HUVEC和淋巴细胞在MICA表达的差异性可能与不同细胞的内部调节机制有关.而供体器官血管内皮细胞表达多态性MICA分子有可能成为移植抗原发生免疫排斥反应.     

白假丝酵母激活的巨噬细胞自噬 促进MHCⅡ抗原提呈

目的探究白假丝酵母(Candida albicans)激活的Raw264.7细胞自噬在主要组织相容性复合体Ⅱ类分子(MHCⅡ)抗原提呈以及协同刺激分子表达中的作用。方法 C.albicans刺激Dectin-1单克隆抗体封闭或白皮杉醇阻断的Raw264.7细胞,Western blot法检测LC3Ⅱ表达量,RT-PCR检测CD80与CD86的表达。免疫荧光实验观察有无3-MA预处理的GFP-LC3-Raw264.7细胞与C.albicans共孵育后MHCⅡ与LC3在胞浆的分布,ELISA法检测有无封闭Dectin-1或3-MA预处理的Raw264.7细胞与C.albicans共孵育不同时间段后IL-6的分泌。结果阻断Dectin-1或Sky后C.albicans诱导的LC3Ⅱ表达降低。LC3、MHCⅡ与胞内C.albicans存在显著的共定位关系,阻断自噬后C.albicans与MHCⅡ的共定位明显减弱。C.albicans引发Raw264.7细胞表达CD80与CD86mRNA,封闭Dectin-1或阻断自噬后二者转录水平降低。C.albicans通过Dectin-1引发Raw264.7细胞分泌IL-6,阻断自噬对IL-6分泌无显著影响。结论 C.albicans通过Dectin-1/Sky通路激活巨噬细胞自噬,自噬体的构建促进MHCⅡ招募至胞内C.albicans,并促进协同刺激分子的表达。     

5-氟尿嘧啶增强HeLa细胞对自然杀伤细胞敏感性研究

目的用5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）处理HeLa细胞,检测其NKG2D配体MICA的表达及其对NK92细胞杀伤敏感性的变化。方法不同浓度的5-Fu处理HeLa细胞,在不同时间点用半定量PCR及流式细胞术检测HeLa细胞表面的NKG2D配体MICA在RNA及蛋白水平的表达变化情况,用MTT法检测NKG2D抗体封闭NK92细胞的NKG2D受体前后,NK92细胞对HeLa细胞的杀伤作用。结果不同浓度的5．Fu作用于HeLa细胞后,半定量RT—PCR结果显示MICA表达随5-Fu作用浓度增加逐渐增高。而且40μg／ml5．Fu作用于HeLa细胞后随着作用时间的延长（0、8、16、24h）MICA表达增加,流式细胞术检测结果表明,MICA表达的增加主要依赖于未凋亡细胞的MICA表达。在40μg／ml5-FU作用24h,效靶比为2．5：1,5：1,10：1,20：1时都检测到NK92细胞对HeLa细胞的杀伤增强,杀伤作用可部分被NKG2D抗体抑制。结论5-FU能够上调HeLa细胞表面NKG2D配体MICA的表达,增强HeLa细胞对NK92细胞的敏感性,提示化疗联合NK细胞免疫治疗宫颈癌可产生协同作用,提高治疗效果。     

自然杀伤T细胞的研究进展

自然杀伤T细胞(NKT)是一类具有NK受体和T细胞受体且显示NK细胞和T细胞两方面性质的淋巴细胞.因其表型和功能与T细胞,B细胞和NK细胞等免疫细胞有所不同,近年来颇受关注.NKT细胞具有高度保守的TCR表型(TCRVα24/β11-人),同时共表达NK细胞特有标志CD161.NKT细胞识别由CD1d分子提呈的特异糖脂分子,并能够分泌大量细胞因子,参与机体的先天性免疫和获得性免疫反应.研究发现,NKT细胞在抗感染,抗肿瘤,以及抑制自身免疫性疾病(如:肥胖型糖尿病,再生障碍性贫血等)的发生中发挥着重要作用.本文将对有关NKT细胞特征和功能的研究现状,以及存在的问题作一综述.     

白细胞免疫球蛋白样受体（LIRs）研究进展

LIRs是新近发现的另一类MHC I类分子受体,它不仅存在于NK细胞和T细胞表面,还在单核细胞、树突状细胞,B细胞等细胞表面表达,不同种类的LIRs通过传导抑制性或刺激性信号发挥广泛的免疫调节作用,在抑制杀伤性免疫细胞的杀伤活性,调节树突状细胞与T细胞之间的信号交流,调节B细胞的激活阈,参与树突状细胞的抗原俘落以及防止母亲NK细胞对胎儿组织的攻击等方面均具有重要的生物学意义。     

改良内皮抑素对人脐静脉内皮细胞抑制作用的实验研究

目的:探讨改良内皮抑素(RGDRGD-ES)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的抑制作用,摸索RGDRGD-ES对HUVEC细胞抑制作用的相对最佳作用浓度和时间。方法:通过快速定点诱变PCR方法获得含有RGDRGD膜序的改良人内皮抑素基因,并构建其原核表达载体。表达、纯化改良内皮抑素(RGDRGD-ES),运用MTT法和流式细胞仪检测RGDRGD-ES对人脐静脉内皮细胞的抑制作用。结果:1.诱变了ES基因,获得了改良的RGDRGD-ES基因,并成功构建其原核表达载体。2.获得了RGDRGD-ES蛋白。3.改良的RGDRGD-ES能够有效抑制人脐静脉内皮细胞的生长(P<0.01);抑制率随着药物浓度(10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml)的增加和作用时间(24 h、48 h、72 h)的延长而逐渐增加,具有浓度和时间依赖性(P<0.01);而30μg/ml与40μg/ml、50μg/ml组间、72 h与96 h组间无明显差异(P>0.05)。4.细胞凋亡率(作用24 h)具有药物浓度(10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml)依赖性(P<0.01),30μg/ml与40μg/ml、50μg/ml组间凋亡率无明显差异(P>0.05)。结论:成功构建了改良RGDRGD-ES基因的原核表达载体,RGDRGD-ES蛋白在30μg/ml浓度作用72小时条件下能够有效抑制人脐静脉内皮细胞的生长,改良内皮抑素(RGDRGD-ES)对HUVEC的抑制作用较ES明显提高。     

细胞因子诱导杀伤细胞过继免疫治疗恶性血液肿瘤的临床应用进展

细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK cells)是将脐血、外周血和骨髓等不同来源的单个核细胞经适当浓度的IFN-γ、IL-2和CD3单抗等联合诱导后获得的异质细胞群。CIK细胞具有增殖能力强、溶瘤谱广、对耐药细胞株也有杀伤作用,且兼有T细胞强大的杀伤活性和NK细胞(nature killer cells)非主要组织相容性复合体(non-major histocompatibility complex,non-MHC)限制性的特点,使其在肿瘤治疗中具有广阔的临床应用前景。恶性血液肿瘤患者接受CIK细胞过继免疫治疗的生存时间延长,不良反应少,但仍面临许多问题。