人β_2m转基因小鼠的制备及鉴定(英文)

 制备人 β2m转基因小鼠 ,研究HLA B2 70 4基因的表达 .应用显微注射将人 β2m基因注入C5 7BL 6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F1代受精卵 .出生动物及其后代经PCR筛选 ,采用斑点杂交和Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本进行进一步鉴定和测定整合拷贝数 ,利用RT PCR检测阳性鼠中人 β2m转基因的表达 .6只原代仔鼠及 7只它们的下一代鼠 (F1)带有人 β2m基因 .由微注射基因后移卵出生的 86只小鼠中 ,C5 7BL 6×昆明鼠杂交仔鼠 35只 ,其中 4只阳性 (11 4 % ) ,昆明鼠×昆明鼠杂交仔鼠 5 1只 ,其中 2只阳性 (3 9% ) ,含有人 β2m基因的原代鼠×昆明鼠杂交仔鼠 2 0只 ,其中 7只阳性 .整合的转基因均为单拷贝 .Southern杂交证实上述阳性鼠确有转基因整合 .阳性鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有人β2m转基因mRNA的表达 .在转基因动物制备中 ,C5 7BL 6×昆明鼠F1代明显优于昆明鼠×昆明鼠F1代 .与人HLA B2 70 4基因相比 ,人 β2m基因不易整合 ,其整合率与整合拷贝数均较低 .得到的人 β2m转基因小鼠能够将人 β2m基困传给下一代 ,并可与人HLA B2 70 4转基因鼠交配 ,研究它的致病性     

人β_2m转基因小鼠的制备及鉴定(英文)

制备人 β2m转基因小鼠 ,研究HLA B2 70 4基因的表达 .应用显微注射将人 β2m基因注入C5 7BL 6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F1代受精卵 .出生动物及其后代经PCR筛选 ,采用斑点杂交和Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本进行进一步鉴定和测定整合拷贝数 ,利用RT PCR检测阳性鼠中人 β2m转基因的表达 .6只原代仔鼠及 7只它们的下一代鼠 (F1)带有人 β2m基因 .由微注射基因后移卵出生的 86只小鼠中 ,C5 7BL 6×昆明鼠杂交仔鼠 35只 ,其中 4只阳性 (11 4 % ) ,昆明鼠×昆明鼠杂交仔鼠 5 1只 ,其中 2只阳性 (3 9% ) ,含有人 β2m基因的原代鼠×昆明鼠杂交仔鼠 2 0只 ,其中 7只阳性 .整合的转基因均为单拷贝 .Southern杂交证实上述阳性鼠确有转基因整合 .阳性鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有人β2m转基因mRNA的表达 .在转基因动物制备中 ,C5 7BL 6×昆明鼠F1代明显优于昆明鼠×昆明鼠F1代 .与人HLA B2 70 4基因相比 ,人 β2m基因不易整合 ,其整合率与整合拷贝数均较低 .得到的人 β2m转基因小鼠能够将人 β2m基困传给下一代 ,并可与人HLA B2 70 4转基因鼠交配 ,研究它的致病性     

微卫星DNA监控大鼠近交系的培育

采用微卫星DNA技术来监控大鼠仔代基因状况,选择性地进行交配繁殖,使基因快速纯合,缩短培育新的近交系动物周期。利用PCR扩增30个微卫星DNA位点对封闭群SD和Wistar大鼠交配繁殖的仔代鼠进行微卫星DNA多态性分析,仔代中与母代SD大鼠相似系数高的与中的进行定向交配繁殖。F2代大鼠均为杂合多态的位点,没有纯合位点;到F9代时基因纯合位点达27个,纯合基因位点率为90%。每代相似系数具有不断上升的趋势,上升率为6-20%。采用皮肤移植方法验证了F9代大鼠间无排斥。建立了一种新的快速培育近交系动物的方法。     

近交系大鼠DNA指纹分析研究

目的建立DNA指纹技术对近交系大鼠遗传监测的方法.方法采用DNA指纹图法对国内已知的7个品系9个近交系大鼠群体进行了分析,并对相同DNA进行了多次DNA指纹图重复实验.结果(1)不同品系之间DNA指纹图差异较大,其平均图带数为16.360±2.178,共有带率为0.061±0.008,相似系数为0.062±0.008,相同DNA指纹图概率为3.691×10-23.(2)同一群体不同个体之间DNA指纹图带的相似系数和共有带率(除SHR(哈)和WKY(哈)小于0.7外),其他均在大于0.9.(3)不同地区同一SHR和同一WKY品系间DNA指纹图也存在不同,其相似系数和共有带率均小于0.6.(4)相同DNA不同次制作的DNA指纹图谱基本一致(P>0.05).结论证实了该方法在近交系大鼠遗传监测中的可行性.     

野生TW近交系小鼠主要生理指标

目的建立野生来源TW（Tianjin Wild,TW）近交系小鼠的主要生理、血常规等指标。方法分别选用F28和F29代TW近交系成年雄性小鼠25只,雌性小鼠31只,检测动物的主要生理、血常规指标。结果TW小鼠体重雌雄差异无显著性,脏器指标中雌雄性比较仅肾脏重量、肾脏系数差异有显著性（P〈0.05）;血常规检测指标中,雌雄小鼠在WBC、MCV、MCH、PLT、MONO等5项指标的均值比较差异具有显著性,其他各项均无差别。与ICR、KM、NIH及BALB/c等通用实验小鼠指标比较,TW小鼠的脾脏、脾脏系数和血小板均高于或多倍高于这些通用小鼠品系。结论TW小鼠在一些主要生理指标上与通用实验小鼠品系不同,呈现自身特点。     

四系杂交大鼠用作检定用动物

<正>用控制遗传的方法可将实验动物分为近交系、突变系、封闭群和杂交群几类。通常只将封闭群和部分近交系用作检定用动物。实验动物必须具备基因组成上的均一性和稳定性,具有一定的特性,并且能够大量繁殖。对于检定用动物,则特别要求在群体遗传结构的稳定性和群体中不出现遗传变异的前提下能够大量繁殖。由于封闭群在传代过     

小鼠生长曲线与应用

在实验动物的繁殖中,我们发现同品系同龄的动物体重差异较大;在动物实验中也观察到动物的个体差异性。为此,我们就不同性别动物的体重与年龄的关系进行了实验观察。1 方法和结果选用引自中国医学科学院实验动物中心、已在我中心SPF屏障系统繁育10代之SPF级近交系CBA/J/Ola小鼠,以21日龄离乳鼠16窝48只,分雌(21只)雄(27只)两     

近交系小鼠种群的维持与饲养管理

1984年以来先后由北京、天津引进七个品系的近交系小鼠:DBA/2、BALB/C、615、C57BL/6N、C3H/HeN、TAⅠ、TAⅡ,至今已繁殖6—8代。现将繁育体会报道于后。一、种鼠的选育和配种(一)选育种:采用优选法保种。每一代选种时,根据自身的遗传特性参照系谱图和各对种鼠的生殖力系数决定选留。每代在二三胎的仔鼠内离乳时初选出合格的雌雄鼠分罐饲养。淘劣留优,配种时尽可能地多选配、淘汰不孕者和产仔率低的种鼠。(二)配种:通常采用1:1的频密交配法。尽量成批交配,以便成批地获得仔鼠,利于选种育种和管理,也为下一代种鼠的成批交配创造条件…     

利用多重荧光STR技术分析上海地区7品系常用近交系小鼠核心群的遗传特性

目的比较上海地区7品系常用近交系小鼠核心群的遗传特性。方法将筛选到的48对多态性丰富的微卫星引物组合优化,形成11组多重荧光PCR引物混合体系,对来自上海地区两大实验小鼠供应商的7品系近交系小鼠核心群的DNA样进行分型检测。利用遗传分析软件进行数据分析。结果来自两大供应商的7品系近交系小鼠在48个微卫星位点上都为纯合子。同一种群内小鼠的STR位点结果均一致;不同种群小鼠无论品系是否相同,相互间均存在STR位点差异。但相同品系不同种群近交系小鼠间的遗传距离与不同品系小鼠种群间的遗传距离相比均较近。在UPGMA聚类树中,相同品系的不同种群均首先两两聚成一类。C57BL/6小鼠与其他6品系小鼠的亲缘关系均较远。结论上海地区不同供应商的7品系近交系小鼠核心群间均存在STR位点差异。     

IRM-2近交系小鼠的生殖生长特性

目的获取IRM-2近交系小鼠的生殖生长特性的有关资料.方法ICR/JCL为母本,以615小鼠为父本杂交选育的近交系小鼠IRM-2,现已繁育至第38代.经过对其生殖、生长特性的观察和测定来取得相关资料.结果该小鼠出生后45d性成熟;繁殖能力强,平均每窝产仔数为8只以上,最高可达15只;生长发育迅速,出生后60d体重可达28g以上,各脏器重均高于亲代鼠.结论从各项指标来看,IRM-2小鼠是优良的近交品系小鼠.     

流行性乙型脑炎强毒株和弱毒疫苗株SA14-14-2对猴子和小鼠的致病性和病理学研究

为了解乙型脑炎 (乙脑 )减毒活疫苗弱毒株SA14 14 2神经毒力的减弱程度 ,本文对弱毒株及其原株SA14强毒株进行了猴体和小白鼠的致病性和病理学变化的比较试验。SA14强毒株病毒 (原始滴度 6 15× 10 8/ml) ,以10 -2 和 10 -4 ～ 10 -7不同稀释度于丘脑两侧合并脊髓注射恒河猴 ,每组除 10 -4 1只外其余均为 2只。另以 10 -4 和10 -6～ 10 -8不同稀释度脑内注射小鼠 ,每组 8只。结果猴子除 10 -4 1只外其余全部发病死亡 ,小鼠则全部死亡。SA14 14 2以 1∶5稀释病毒 (原始滴度为 8× 10 6/ml)按同样方法注射 4只猴和 30只小鼠 ,结果全部存活。另以SA1410 -2 病毒皮下注射 3只猴未死亡 ,而以 10 -1皮下注射 30只小鼠时则全部死亡。SA14 14 2以 1∶5稀释病毒皮下注射小鼠时则全部存活。病理组织学结果显示二种动物接种SA14株强毒后主要表现为弥散性脑脊髓炎 ,以神经细胞坏死为其主要特征和最突出的病变。猴子的病变以脊髓前角、丘脑和中脑黑质为重 ,小鼠的病变则以大脑皮质、海马部最重 ,脊髓的病变却比脑轻。接种弱毒株的动物则仅有轻微炎症反应、神经细胞坏死极少出现。以上结果表明以脑内接种时恒河猴和小鼠对乙脑病毒均高度敏感 ,以皮下接种时小鼠的敏感性高于猴子。乙脑SA14 14 2弱毒株的神经毒力包括致     

昆明小鼠4个可能近交系的基因分型验证

在我国,昆明小鼠作为一种实验动物广泛应用于药理和遗传学相关的研究领域。但由于昆明小鼠属于远交群,而且不同地区的种群间已经出现了严重分化,缺乏具有显著特征的近交系,这使得它在生物学上的应用受到了很大的限制。研究人员已经以昆明小鼠为背景培育出了几个可能的近交系,但由于缺乏可靠的遗传检测,至今未得到广泛的认可和应用。文章收集昆明小鼠的4个已经60代以上兄妹交配繁殖的可能近交系,并以两个标准近交系BALB/c和C57BL/6为参照,利用30个微卫星标记对每个品系的5只小鼠进行了微卫星基因分型,进而分析其遗传纯度。结果发现,品系A1和品系N4在本研究所用的30个位点均呈纯合状态;而T2和N2均在D15Mit16位点呈杂合状态。本研究第一次为我国昆明小鼠近交系的遗传学纯度提供了可靠的分子水平证据。今后应当加强昆明小鼠近交系的标准化,以扩大其在遗传学方面的应用。     

野生来源TW小鼠近交系培育及其生物学特性的研究

目的　培育中国特有TW (TianjinWild)野生小鼠来源的实验近交小鼠品系 ,筛选其重要的生物学特征 ,丰富现有实验动物基因库。方法　严格按照国际培育近交系动物标准 ,即每代繁育的雌雄小鼠严格按照同胎雌雄 (兄妹 )进行交配。结果　经过 1 2年的精心培育 ,培育TW小鼠至F2 2代 ,其他 1 5地野生小鼠品系均因故中断。结论　该项研究将为丰富国际现有实验小鼠基因库资源 ,建立抗肺肿瘤特性实验小鼠模型动物奠定坚实基础。     

615近交系小鼠造血干细胞的定量测定

615近交系小鼠是本所动物室于1961年用昆明种小白鼠(♀)和由苏联引进的C_(57)BL近交系小鼠(♂)杂交第一代按同胞兄妹交配纯化而得的一系棕色小鼠,至今已培养20余年,共繁殖了57代。通过皮肤移植,混合淋巴细胞反应免疫学分析,血红蛋白分子遗传学分析,血清蛋白电泳分析,毛色基因检测等试验,均证明615小鼠是纯合子,符合近交系要求。该小鼠生殖能力也比C_(57)BL等近交系小鼠强。其自发瘤的发生情况也有一定的规律和特点,是一株低白血病,低乳腺瘤小鼠,但肺腺瘤发生率较     

几种近交品系小鼠的毛色基因

生物医学研究的不断发展,要求提供各种基因型的近交系动物,用作试验模型。近交系动物具有遗传背景清楚,特性明确,基因纯合性较高等特点。国际上应用广泛。1975年第三版《国际实验动物索引》公布的近交系小鼠有388个品系。但尽管近交系动物的遗传性状相对稳定,在长期饲养过程中仍可能发生变异;也可能因为饲养管理的不慎而造成基因污染。所以饲养繁殖近交系动物时,必须定期进行遗传质量的监测,以确保近交系动物主要遗传特性的延续,使科学工作者能获得可靠的研究成果。     

Slit2基因过表达小鼠的生物学参数及心脏生理功能分析

目的测量评价人Slit2基因过表达小鼠(Slit2-Tg小鼠)的基本生物学参数、心脏超声形态功能及转录组测序等,为该小鼠在生物医学研究应用提供参考。方法观察比较近交系繁育的Slit2-Tg和C57BL/6 J小鼠繁育情况、运用PCR技术确定基因型、采集血液进行血常规及血生化检测、收集脏器组织进行蛋白表达和病理分析,以及对心脏进行超声评价和转录组测序分析。结果 Slit2-Tg小鼠的每窝产仔数显著高于C57BL/6 J小鼠,并可检测到Slit2基因和蛋白高表达。Slit2-Tg小鼠脾的脏器系数有显著增加,但未见组织结构异常。Slit2-Tg小鼠的红细胞、血小板、嗜酸性粒细胞、葡萄糖、球蛋白、尿素氮、甘油三酯、高密度脂蛋白、动脉粥样硬化指数具有显著改变。Slit2-Tg小鼠的心脏除舒张末期左心室前壁厚度较小外,其他指标差异无显著性,其心脏组织受检的17 513个基因中有535基因表达显著升高或降低,主要涉及15个生物进程和信号转导通路。结论完善了Slit2-Tg小鼠生物学参数,并提示了此模式动物亦适用于心血管疾病相关研究。     

大熊猫母兽育幼早期应激水平与母幼行为的关系

大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)属于晚熟性动物,育幼早期是幼仔存活和生长发育的关键时期,也是幼仔最易夭折时期。为了解大熊猫产后应激水平及其与母幼行为之间的关系,从行为适应机制的角度提高幼仔存活率,本研究利用酶联免疫吸附法监测7只处于育幼早期(产后0～75日)母兽粪便皮质醇含量,采用焦点动物取样法观测3对母幼个体的行为。结果显示：(1)育幼早期母兽皮质醇含量随幼仔日龄增长总体呈下降趋势(r=-0.950,P<0.001);(2)幼仔断奶前与断奶后相比,母兽皮质醇含量无显著差异(t=-0.935,P=0.361);(3)母兽皮质醇含量与母幼联系(r=0.918,P<0.001)、幼仔尖叫(r=0.777,P=0.001)和休息行为(r=0.731,P=0.002)均呈极显著正相关,与采食行为呈显著负相关(r=-0.608,P=0.016),而与舔幼仔行为不相关(r=0.366,P=0.179)。结果表明,大熊猫母兽育幼早期粪便皮质醇含量变化与幼仔生长发育有关,推测母兽的应激强度可能随幼仔御寒能力及自主活动能力的提升而降低;皮质醇可能参与母性行为调节,有助于...     

伯氏疟原虫红内期发育周期观察

伯氏疟原虫是目前广泛应用的实验动物疟原虫种株,因此了解其生物学特性十分重要。本文观察了该原虫红内期发育周期的同步性和规律性,并比较了在近交系BALB/C小鼠和远交系昆明小鼠体内的发育情况。一、材料与方法(一)动物:近交系BALB/C小鼠和远交系昆明小鼠各三只,15～20克,本校实验动物部提供。(二)虫种:伯氏疟原虫(Plasmodium berghei)NK株,由中国军事医学科学院提供,经本实验室血传转种和冰冻保存一年左右。(三)动物接种:按Tosta(1980)的方法用Percoll密度梯度离心分离原虫,取Percoll浓度为60%与65%交界层细胞(成熟滋养体占全部原…     

东茛菪碱抗吗啡依赖作用与海马细胞内钙的关系

目的观察东莨菪碱(scopolamin,Sco)对吗啡(morphine,Mor)致小鼠依赖性作用的影响及其机制分析.方法连续7 d腹腔内注射吗啡建立吗啡依赖小鼠模型;热板法测定痛阈;纳络酮(naloxone,Nal)催促实验计数小鼠跳跃次数和跳跃动物率;流式细胞术测量海马细胞内游离Ca2+([Ca2+]i)浓度.结果吗啡依赖小鼠的痛阈明显下降,跳跃次数和跳跃动物率明显增加,海马[Ca2+]i明显增加.给予东莨菪碱(4mg·kg-1×7 d)后,吗啡依赖小鼠海马[Ca2+]i明显减少(P＜0.05),痛阈提高(P＜0.01),跳跃次数和跳跃动物率减少(P＜0.05).结论东莨菪碱具有对抗吗啡依赖性的作用,其机制可能与降低脑细胞内游离Ca2+水平有关.     

Fmr1基因敲除小鼠脏器重量和脏器系数的比较分析

目的通过对Fmr1基因敲除小鼠雌雄两性和FVB小鼠的脏器重量和脏器系数进行比较分析,了解其脏器重量的差异,探讨Fmr1基因对动物生长发育等方面的影响。方法分别测定Fmr1基因敲除小鼠雌雄两性和FVB小鼠内脏器官的绝对重量和脏器系数,并进行统计学处理和分析。结果相同年龄的Fmr1基因敲除小鼠雄性的体重、心、肺、肝和肾的绝对重量均极显著的大于雌性（P〈0.01）。雌雄间脏器系数除肾脏（P〈0.05）和脑（P〈0.01）外,其余无显著差异。与FVB小鼠比较,Fmr1基因敲除小鼠心脏较轻（P〈0.01）,肾脏（P〈0.01）、体重和脑较重（P〈0.05）。脏器系数肾脏较大（P〈0.01）,心脏（P〈0.01）、脑和脾（P〈0.05）较小。结论Fmr1基因可影响动物的某些脏器重量和脏器系数。