转基因哺乳动物细胞自合成多不饱和脂肪酸

亚油酸、亚麻酸是哺乳动物体内的必需脂肪酸,但哺乳动物由于缺乏△12和ω-3脂肪酸脱氢酶而自身不能合成．△12和ω-3脂肪酸脱氢酶存在于真菌、植物和一些低等动物中．为了实现哺乳动物细胞亚油酸的自身合成,克隆了线虫编码△12脂肪酸脱氢酶的FAT-2基因eDNA序列,通过优化密码子,构建真核表达载体,稳定转染细胞,经抗生素筛选获得稳定整合FAT-2基因的CHO细胞．PCR和RNA印迹（Northern blot）验证了基因的整合和表达．气相色谱分析细胞的脂肪酸含量表明,FAT-2基因的表达显著提高了转基因细胞中亚油酸的含量,亚油酸含量为阴性对照细胞的2．4倍．研究结果表明,低等动物△12脂肪酸脱氢酶可以重建哺乳动物多不饱和脂肪酸合成途径,并利用细胞中的油酸合成亚油酸．上述研究为进一步利用转基因技术促进农业动物合成多不饱和脂肪酸从而提高食品营养价值奠定基础．     

花生四烯酸代谢与健康和疾病——序言

正脂肪酸(fatty acid)作为重要的营养素对维持生命健康发挥不可或缺的作用。根据含碳原子的多少,脂肪酸可以分为短链(含2～4碳原子)、中链(含6～12碳原子)、长链(含14个及以上碳原子)脂肪酸;根据饱和度,脂肪酸又可分为饱和、单不饱和、多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids, PUFA);根据首个不饱和键距离碳链甲基端的位置,PUFA还可以进一步分为ω-3 PUFA (从脂肪酸的甲基端即ω端开始,第一个不饱和双键出现在第3和第4个碳原子之间)和ω-6 PUFA。     

缅甸蟒脂肪酸分析

用气相色谱法测定了缅甸蟒油20种脂肪酸,其中不饱和脂肪酸含量达67.5%,多不饱和脂肪酸含量达10.3%.含量较高的脂肪酸有油酸、棕榈酸、亚油酸、棕榈油酸,特有脂肪酸DHA、α-亚麻酸,并且明显不同于其他蟒和蛇的脂肪酸含量.缅甸蟒油具有重要的药用和保健品开发利用价值.     

多不饱和脂肪酸对人体的作用

多不饱和脂肪酸又叫多烯酸,是指分子结构中含有２个或２个以上不饱和双键的脂肪酸。双键愈多,不饱和程度愈高,营养价值也愈高［１］。随着科学的发展,某些多不饱和脂肪酸对人体的作用进一步被认识,特别是以廿二碳六烯酸、廿碳五烯酸和一般植物油中的亚油酸（常与亚麻...     

食物中多不饱和脂肪酸在家蝇幼虫体内的富集与代谢及对其生长的影响

【目的】阐明家蝇 Musca domestica 幼虫对食物中各种多不饱和脂肪酸的富集能力以及代谢转化情况,并探究各种多不饱和脂肪酸对家蝇幼虫生长的影响。【方法】在基础饲料中添加不同浓度(3%, 6%和12%)的多不饱和脂肪酸(亚油酸、α-亚麻酸、花生四烯酸和二十二碳六烯酸)饲养经过脱脂传代培养的家蝇幼虫;提取家蝇幼虫的总脂肪酸,利用气相色谱仪进行检测和分析;测定统计幼虫体重,以分析多不饱和脂肪酸对家蝇幼虫生长的影响。【结果】亚油酸、α-亚麻酸和花生四烯酸在家蝇幼虫体内均能被富集,且它们的富集程度随着食物中多不饱和脂肪酸的添加浓度的升高而增加,其中亚油酸、α-亚麻酸和花生四烯酸在幼虫体内富集的最高含量(占体内总脂肪酸的比例)分别为21.93%, 16.13%和9.68%,而二十二碳六烯酸不能在家蝇幼虫体内富集,提示家蝇幼虫食物中添加的各种多不饱和脂肪酸经过代谢后并没有在其体内产生新的脂肪酸,而食物中添加的二十二碳六烯酸在家蝇幼虫体内被分解代谢后消除。饲喂α-亚麻酸及花生四烯酸后家蝇幼虫体重增长较为明显,其中6%α-亚麻酸添加组的幼虫体重显著高于对照组(取食脱脂饲料)和3%和12%α-亚麻酸添加组,3%和6%花生四烯酸添加组的幼虫体重显著高于对照组和12%花生四烯酸添加组。【结论】家蝇幼虫体内能够从食物中富集部分多不饱和脂肪酸,多不饱和脂肪酸碳链越长其富集程度越低直至不能富集,富集的多不饱和脂肪酸对家蝇幼虫生长有不同程度的影响。     

培养条件对头孢霉脂肪酸链长和ω-3脱饱和的影响

为了获得高产量的长链ω-3多不饱和脂肪酸,用十八碳脂肪酸和十六碳脂肪酸的比值考察碳链延长,用α-亚麻酸和亚油酸的比值考察ω-3脱饱和;探讨了八种因子对脂肪酸链长和ω-3脱饱和的影响。有利于碳链延长的条件为：麦芽糖10g/L、(NH4)2SO4 3g/L、起始pH为4.0、500mL三角瓶装50mL培养基、接种20%（V/V）、20℃培养6d。有利于ω-3脂肪酸生成的条件为：蔗糖30g/L、NH4Cl 3g/L、培养基起始pH为4.0、500mL三角瓶装50mL培养基、接种20%（V/V）、10℃培养10d。     

培养条件对头孢霉脂肪酸链长和ω-3脱饱和的影响*

为了获得高产量的长链ω-3多不饱和脂肪酸,用十八碳脂肪酸和十六碳脂肪酸的比值考察碳链延长,用α-亚麻酸和亚油酸的比值考察ω-3脱饱和;探讨了八种因子对脂肪酸链长和ω-3脱饱和的影响。有利于碳链延长的条件为：麦芽糖10g/L、(NH4)2SO4 3g/L、起始pH为4.0、500mL三角瓶装50mL培养基、接种20%（V/V）、20℃培养6d。有利于ω-3脂肪酸生成的条件为：蔗糖30g/L、NH4Cl 3g/L、培养基起始pH为4.0、500mL三角瓶装50mL培养基、接种20%（V/V）、10℃培养10d。     

丝状真菌被孢霉产生油脂的研究

被孢霉的三个菌株Mortierella sp.M10,M13与M14生长在以葡萄糖为碳源、尿素为氮源的液体培养基中,所得到的菌丝体内堆积含γ-亚麻酸的油脂。油脂产率以M10菌株为高,而油脂中的γ-亚麻酸含量却以M14菌株为高。这种油脂的脂肪酸中,所含饱和脂肪酸主要有豆蔻酸(C14:0),棕榈酸(C16:0)和硬脂酸(C18:0);所含不饱和脂肪酸主要有棕榈油酸(C16:1),油酸(C18:1),亚油酸(C18:2)以及γ-亚麻酸(C18:3,n-6)。上述被孢霉菌株的培养物接种在含葡萄糖、尿素的培养基中生长大约48小时后,菌丝体顶端细胞形成鼓胀球状,此后仍继续胀大。菌体细胞形态的这种特异变化,可能与胞内油脂的累积有关。     

丝状真菌被孢霉产生油脂的研究

被孢霉的三个菌株与Ｍ１４生长在以葡萄糖为碳源、尿素为氮源的液体培养基中,所得到的菌丝体内堆积含ｒ－亚麻酸的油脂。油脂产率以Ｍ１０菌株为高,而油脂中的ｒ－亚麻酸含量却以Ｍ１４菌株为高。这种油脂的脂肪酸中,所含饱和脂肪酸主要有豆寇酸,棕榈酸,和硬脂酸;所含不饱和脂肪酸主要有棕榈油酸,油酸,亚油酸以及ｒ－亚麻酸。上述被孢霉菌株的培养物接种在含葡萄糖、尿素的培养基中生长大约４８小时后,菌丝体顶端细胞形成鼓     

培养条件对Bacillus pumilus转化油酸生产羟基脂肪酸的影响

利用一株Bacillus pumilus 突变株(简写为BP M-F641),在摇瓶条件下考察了碳源葡萄糖、底物油酸(OA)、亚油酸(LA)、种龄、溶氧和Mn2+ 离子对转化脂肪酸生成ω-1,2,3-羟基脂肪酸( 简写为ω-1,2,3-HFA) 的影响.试验了OA 添加时间对ω-1,2,3-HFA 产量和转化率的影响.结果表明,细胞生长最佳的葡萄糖浓度为8g/L ;OA 和LA 对菌株细胞生长有明显的抑制作用;培养菌龄对脂肪酸羟基化有明显的影响;溶氧变化对细胞生长有轻微的影响,但对ω-1,2,3-HHFA 的生成影响较大.在表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)或吐温-80 存在下,能增加油酸的消耗量,但ω-1,2,3-HFA 的生成并没有增加,表明阴离子和非离子表面活性剂不能改进羟基化反应的能力;Mn2+ 是细胞生长和HFA 形成的一个重要影响因素,Mn2+ 浓度为0.2g/L 时细胞生长和HFA 形成最佳.这些研究结果对进一步改进脂肪酸微生物转化生产HFA 策略的运用具有重要作用.     

乌桕梓油和桕脂的脂肪酸组成研究

运用色谱-质谱分析方法,鉴定乌桕梓油和桕脂的脂肪酸成分.分析结果,野生乌桕和栽培乌桕在脂肪酸组成上相同;梓油除了含常见的亚麻酸、亚油酸、油酸、棕榈酸和硬脂酸之外,还含有不常见的2,4-癸二烯酸和8-羟基-5,6-辛二烯酸;桕脂含棕榈酸、油酸、硬脂酸和亚油酸.两者的主要差异在于蜡质层厚度和核的大小及其油脂含量的不同.     

植物油脂的保健与药用价值

植物的油脂与人类的生活密切相关 ,其中保健与药用价值就是一个很重要的方面。在植物油脂各脂肪酸的组成中 ,不饱和脂肪酸 (如油酸、亚油酸和亚麻酸等 )为人体所必需。这类脂肪酸可防治中老年心血管硬化 ,并减少癌症的发病率。在上述不饱和脂肪酸中 ,以油酸对人体最为有利。它是细胞膜的必要成分 ,并且有降低人体内血清胆固醇和甘油三脂的功能 ,也能软化血管并防止血栓的形成。亚油酸和亚麻酸在人体内都不能合成 ,必须由食物供给 ,它们也是许多不饱和脂肪酸合成的前体 ,由前者形成的前列腺素类化合物等一系列代谢重要物质 ,对维持人体健康、…     

乌桕梓油和桕脂的脂肪酸组成研究

运用色谱-质谱分析方法,鉴定乌桕梓油和桕脂的脂肪酸成分.分析结果,野生乌桕和栽培乌桕在脂肪酸组成上相同;梓油除了含常见的亚麻酸、亚油酸、油酸、棕榈酸和硬脂酸之外,还含有不常见的2,4-癸二烯酸和8-羟基-5,6-辛二烯酸;桕脂含棕榈酸、油酸、硬脂酸和亚油酸.两者的主要差异在于蜡质层厚度和核的大小及其油脂含量的不同.     

大豆ω-3脂肪酸脱氢酶基因GmFAD3C在酿酒酵母中的表达

α亚麻酸(ALA)被称为必需脂肪酸,对人体有一系列的保健作用。ω-3脂肪酸脱氢酶(FAD)催化亚油酸(LA)生成ALA。大豆种子油中ALA含量较高,为了研究大豆ω3FAD的功能,用RTPCR方法从大豆未成熟种子中扩增出GmFAD3C的cDNA,克隆到酵母表达载体p416中,并用醋酸锂法转化酿酒酵母营养缺陷型K601,经筛选鉴定,得到阳性克隆。气相色谱分析脂肪酸成分,发现工程菌产生了新的脂肪成分ALA,含量占总脂肪酸的3.1%,LA含量与对照相比相应地下降,证明该基因编码的蛋白具有催化18碳多不饱和脂肪酸(PUFA)底物LA在Δ15位脱氢生成ALA的ω3FAD功能,首次实现大豆ω-3脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母K601p416系统中的表达,建立了一种新的高效低成本的FAD酵母表达系统。     

一株富含α-亚麻酸栅藻的异养培养条件优化

HSJ296是本实验室分离纯化的1株能够异养生长、富含α-亚麻酸的栅藻(Scenedesmus sp.)。研究比较了不同温度、氮源和葡萄糖浓度对其生长的影响, 结果显示, 其最适培养条件为30℃、4 g/L尿素和20—40 g/L葡萄糖。通过分析不同培养条件下HSJ296总脂中的脂肪酸组成, 发现主要含有十六碳脂肪酸(C16:0)、油酸(C18:1)、亚油酸(C18:2)和α-亚麻酸(α-C18:3), 并且α-亚麻酸的含量稳定在35%—45%。栅藻HSJ296发酵产品或可用作鱼类饲料添加剂以补充α-亚麻酸等营养。     

华南主要野生蔬菜的脂肪酸成分分析

本实验以华南主要野生蔬菜守宫木、土人参、一点红、白仔菜、紫背菜、鳄嘴花、藤三七、塘葛菜为材料,并以华南特产蔬菜菜心为对照,对8种野生蔬菜的脂肪酸成分进行了分析.结果表明:8种野菜共检出十四酸、软脂酸、棕榈油酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、二十二酸和二十四酸共9种脂肪酸,但不同野菜之间的脂肪酸组成与含量差异极大.8种野菜的饱和脂肪酸的总量都高于菜心,饱和脂肪酸种类最多的是藤三七,含4种.不饱和脂肪酸的变化与饱和脂肪酸相反,8种野菜都低于菜心,但其油酸、亚油酸远高过菜心.菜心富含亚麻酸,但不含亚油酸.可见8种野菜油营养价值较高.     

菘蓝种子脂肪酸的GC-MS分析

目的:分析菘蓝种子中的脂肪酸。方法:分别利用索氏提取法,运用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术,计算机检索和人工解析对菘蓝种子中的脂肪酸进行分析和鉴定。结果:鉴定了11种脂肪酸成分。结论:菘蓝种子中脂肪酸成分主要是亚麻酸(24．72%)、芥酸(23．9%)、油酸(19．11%)和亚油酸(10．76%)。     

紫苏种子脂肪酸组成及合成代谢研究进展

紫苏是一种新型油料作物,种子含油量为35%左右,紫苏籽油脂肪酸组成丰富,含有棕榈酸(16:0)、硬脂酸(18:0)、油酸(18:1)、亚油酸(18:2)和α-亚麻酸(18:3)等,其中α-亚麻酸(ALA)含量高达60%,广泛用于功能性保健食品、药物及油脂化工业.介绍紫苏种子脂肪酸组成及合成代谢基本途径,对近年来脂肪酸合成代谢基因工程研究进行概述与展望.     

哺乳动物细胞多不饱和脂肪酸合成酶系的重建将亚油酸代谢转变为二十二碳六烯酸

二十二碳六烯酸(DHA,22:6n-3)是一种长度为22个碳原子且含有6个双键的ω-3系多不饱和脂肪酸,在人体中具有重要生物学功能。人体及其他哺乳动物体内只能合成少量的DHA,更多的需求必须从食物中获取。然而,DHA的天然资源(主要是深海鱼类等海洋产品)日趋枯竭,开发新型资源以满足不断扩大的市场需求势在必行。本研究利用转基因技术,在哺乳动物细胞中使Δ6和Δ5脂肪酸去饱和酶以及Δ6和Δ5脂肪酸延长酶超表达,同时表达来源于秀丽隐杆线虫Caenorhabditis elegans的Δ15去饱和酶和小眼虫Euglena gracilis的Δ4去饱和酶,结果表明,这6种酶的表达或超表达能将ω-6系的亚油酸(LA,18:2n-6)有效地转化为DHA(22:6n-3),后者的含量从对照组的16.74%提高到实验组的25.3%。本研究的策略及技术路线为将来利用遗传改造的哺乳动物生产珍稀的DHA(22:6n-3)等长链多不饱和脂肪酸产品提供了重要的启示。     

不同溶剂对海边月见草种子油脂肪酸萃取的比较

分别用乙醚、石油醚及氯仿一甲醇等三种溶剂萃取海边月见草种子油,经KOH-Me0H室温酯化法或BF₃-Me0H酯化法将其脂肪酸转化成甲酯,而后采用毛细管气相色谱外标法进行定量测定,结果表明:三种溶剂萃取所获得的种子油脂肪酸中亚油酸、γ-亚麻酸的含量无显著差异。但若考虑到溶剂的残留,选择石油醚为溶剂更合适。此外,采用上述两种酯化法,γ-亚麻酸均能与其它脂肪酸,尤其是亚油酸较好分离。