枣树离体叶片不定芽再生体系建立的研究

建立了木枣无菌试管苗快繁体系,以无菌苗叶片为外植体,对影响离体叶片不定芽直接再生的因素进行了研究.试验结果表明,TDZ比BA能更有效地诱导叶片不定芽的再生;褐化是抑制不定芽再生频率提高的关键因子,培养基中添加PVP、V c及改变生长素的种类和浓度均不能促进不定芽再生;添加A gNO3能够减轻褐化并可以大幅度提高再生频率,同时培养初期经过3周避光培养更有利于提高再生效率.因此,以附加2.0 m g/L TDZ和0.2 m g/L IBA的M S培养基,并添加5.0 m g/L A gNO3,可以高效诱导木枣离体叶片不定芽再生,再生频率最高达98.3%.不定芽在附加0.2 m g/L IBA和0.5 m g/L GA3的M S培养基上进行继代伸长培养,当不定芽长至3 cm时,转接至附加0.4 m g/L IBA的1/2 M S培养基上可以良好地诱导生根.     

TDZ对苹果叶片离体再生不定芽的效应

以苹果叶片再生不定芽效率为评价指标,ＴＤＺ的细胞分裂素活性比ＢＡ高一个数量级。在０．４－６．０ｍｇ．Ｌ＾－１范围内ＴＤＺ浓度对新乔纳金苹果叶片再生芽效率没有显著影响。ＴＤＺ和ＢＡ交替使用可提高苹果吉片再生不定芽效率。     

苹果矮化砧木‘JM7’的组织培养及其离体叶片不定梢再生

以苹果优良矮化砧木‘JM7’ （Malus prunifolia×M. pumila ‘Malling 9’）为试材, 研究了基本培养基对试管苗增殖生长的影响、蔗糖浓度对试管苗生根的影响及基本培养基、细胞分裂素种类和浓度对离体叶片不定梢再生的影响。结果表明： 基本培养基MS比QL显著提高增殖梢数, 但QL比MS更有利于获得健壮生长的绿苗。3%蔗糖浓度比2%的不定根发生速度快。叶片不定梢再生最适宜的基本培养基是QL。在QL培养基上, 6-BA和TDZ对离体叶片不定梢再生率的影响无显著差异, 但6-BA诱导产生的不定芽在不定梢诱导培养基上可直接伸长生长形成不定梢, 而TDZ诱导产生的不定芽需转移到不加TDZ而加低浓度6-BA的培养基上形成伸长生长的不定梢。     

泰山酸枣离体叶片再生体系的建立

以泰山酸枣叶片为外植体,以WPM为基本培养基,研究了植物生长调节剂种类、浓度及培养方法等因素对离体叶片不定芽再生的影响,结果表明:不定芽启动的最佳培养基激素组合为1.0 mg·L-1 TDZ+0.5 mg·L-1 IAA;不定芽诱导伸长最佳培养基的激素组合为0.1 mg·L-1 IAA+0.5 mg·L-1 GA3.暗培养是不定芽再生的必需条件,在最适宜的不定芽再生培养基上,叶片连续光培养,不定芽不能再生;叶片先进行暗培养3周后转入光下培养,叶片不定芽再生效果最好,再生率最高可达100%.     

草莓高效离体叶片再生体系的建立

以草莓'明宝(Meiho)'和'红颊(Benihope)'的叶片为外植体,研究了不同基本培养基、暗培养时间、植物生长调节剂、叶龄、不同放置方式对其不定芽再生的影响.结果表明:各品种叶片不定芽离体再生的最佳条件不同.'明宝'叶片的最佳不定芽再生培养基为MS+2.5 mg/L TDZ+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L 2,4-D,叶片再生的最佳叶龄为30～40 d,再生率可达82.8%;'红颊'叶片的最佳不定芽再生培养基为MS+2.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L 2,4-D,叶片再生的最佳叶龄在10～20 d,再生率可达79.8%.2个品种叶片暗培养14 d可以提高不定芽再生率;叶片正放比反放再生效果好;添加8 mg/L AgNO3和1 000 mg/L活性炭可有效提高再生率.     

TDZ高效诱导蝴蝶兰叶片不定芽及植株再生

以蝴蝶兰（Phalaenopsis）无菌幼苗叶片为材料,研究添加TDZ（噻重氮苯基脲）条件下不同基因型、激素组合、叶片大小、暗培养时间对不定芽发生和再生植株的影响。结果表明：在相同培养条件下,不同基因型外植体芽诱导率差异显著,‘红天使’最高,达81.5%,‘汕农姑娘’等2个品种为0,‘满天红’等4个品种为9.2%～34.9%;添加TDZ芽诱导率显著高于6-BA;单独添加TDZ或6-BA芽诱导率显著高于NAA与TDZ或6-BA的组合。叶片越小不定芽诱导率越高;短时间暗处理有利于不定芽的发生。以1～2 cm长叶片为材料、15 d暗处理、在1/2 MS添加3 mg/L TDZ培养基中,‘红天使’的叶片外植体芽诱导率和平均不定芽数分别可达100.0%和18.2个。研究发现,在继代培养中TDZ对芽的伸长有抑制作用。     

细胞分裂素种类及添加量对蓝浆果叶片离体再生的影响

以南方高丛蓝浆果(Vaccinium corymbosum hybrids)品种‘南月’(‘Southmoon’)优选系A18和兔眼蓝浆果(V.ashei Reade)品种‘灿烂’(‘Brightwell’)离体叶片为外植体,研究了培养基中添加不同浓度TDZ(0.5、1.0和2.0mg·L-1)、CPPU(2.0、4.0和8.0 mg·L-1)、ZT(2.0、4.0和8.0 mg·L-1)和2iP(4.0、8.0和16.0 mg·L-1)对叶片不定芽再生的影响.结果表明:在培养基中添加TDZ和CPPU对叶片不定芽的诱导效果优于ZT和2iP,再生率有显著差异(P＜0.05).TDZ诱导不定芽出现所需的时间最短且再生率最高,不定芽密集并呈深绿色;其中,在添加0.5 ～2.0 mg·L-1TDZ的培养基上,A18叶片再生率均为100.00％,‘灿烂’叶片再生率最高达79.17％.CPPU也有较强的诱导能力但不定芽出现所需的时间推迟3～5d,且不定芽的密集程度也有所降低;其中,在添加2.0～8.0 mg·L-1CPPU的培养基上,A18叶片再生率为100.00％～93.75％;而‘灿烂’叶片再生率随CPPU质量浓度提高呈下降趋势(72.91％ ～47.91％).ZT和2iP诱导能力差,在添加不同质量浓度ZT和2iP的培养基上A18和‘灿烂’叶片再生率均为0.00％.此外,A18和‘灿烂’的再生能力有差异,在相同条件下A18叶片的再生能力优于‘灿烂’叶片.研究结果显示:基因型以及培养基中细胞分裂素的种类和添加量是影响不同品种蓝浆果叶片不定芽再生的主要因素.     

彩色大白菜子叶的不定芽再生

以彩色大白菜子叶为外植体,研究不同激素配比和AgNO3对不定芽再生的影响。结果表明:单独附加细胞分裂素(6-BA或TDZ)的MS培养基,不能诱导子叶不定芽分化;而同时附加生长素(NAA)和细胞分裂素(6-BA或TDZ),不定芽的再生频率提高,最高为15%;AgNO3与细胞分裂素及生长素配合使用,能大幅度提高子叶不定芽的再生频率,提高率最高达42.5%。与6-BA相比,TDZ对不定芽再生的效果更好。当TDZ浓度为0.05mg/L、NAA为0.3mg/L、AgNO3为8mg/L时,产生丛状芽数目最多,再生率最高,达50%。     

酸枣叶片不定梢形成及玻璃化的影响因素

以酸枣无菌苗叶片为外植体,研究了培养条件对不定梢再生及不定梢玻璃化的影响.结果表明,叶片在加有细胞分裂素TDZ的诱导培养基(培养基Ⅰ)上连续培养,可诱导不定芽形成,但不能进一步发育成不定梢;而在诱导培养基Ⅰ上培养2周后转移到不加TDZ的培养基Ⅱ上,可获得不定芽伸长的不定梢.培养基Ⅱ的基本培养基组成影响不定芽(梢)的玻璃化症状:MS培养基产生玻璃化的不定芽(梢),而WPM培养基产生正常不定芽梢;光培养条件的变化对玻璃化症状的发生没有影响.不定芽(梢)玻璃化的发生可能与培养基中铵或硝酸铵的浓度有关,在不定芽伸长发育阶段,培养基中高浓度的铵导致了玻璃化苗的发生.     

香石竹叶片离体再生体系的建立

以香石竹(Dianthus caryophyllus Linn.)无菌苗叶片为外植体,从不同细胞分裂素及其他激素配合使用等方面进行筛选,建立香石竹叶片离体再生体系.结果表明,不同的细胞分裂素影响叶片不定芽分化频率,其中较低浓度的6-BA(0.5 mg·L-1)和TDZ(0.001 mg·L-1)配合使用能有效诱导香石竹叶片不定芽分化;添加一定浓度的PP333(4 mg·L-1)可提高叶片不定芽分化频率和平均芽数.香石竹叶片不定芽分化的适宜培养基为:MS 0.002mg·L-1TDZ 0.5 mg·L-16-BA 0.2 mg·L-1IAA 4 mg·L-1PP333;壮苗培养基为:MS 0.2 mg·L-1 6-BA 0.2 mg·L-1IAA;生根培养基为:1/2 MS.不定芽诱导频率达到42.61%,平均芽数为4.53个.     

两种细胞分裂素对大白菜子叶再生的影响

以华阳三号(HY)和鲁白六号(LB)大白菜具柄子叶为外植体,建立了高频率不定芽再生体系,并比较了所使用的2种细胞分裂素作用的异同。MS 0．25mg／L TDZ O．5mg／L NAA 5mg／L AgN03组合中,HY的再生频率达到98．8％,在MS 2mg／L BA 0．5mg／L NAA 5mg／L AgN03组合中,HY和LB的再生频率分别为92．8％和82．4％。TDZ具有比BA高的细胞分裂活性,含有TDZ的培养基中,子叶再生频率高、出芽迅速、芽点多。子叶再生过程中,硝酸银的作用必不可少。     

大白菜下胚轴离体不定芽高效再生体系的研究

以大白菜的下胚轴为外植体,比较了不同浓度TDZ和6-BA两种细胞分裂素与不同浓度NAA相配合的培养基上不定芽再生的差异,并利用筛选出的高效再生培养基研究外植体苗龄、切段来源、接种方式以及品种对不定芽再生的影响。结果表明:与6-BA相比,TDZ对诱导下胚轴不定芽再生更有效,在M S+TDZ 0.3 m g.L-1+NAA0.5 m g.L-1+A gNO35 m g.L-1的培养基上,下胚轴不定芽再生频率高达87.8%,平均每下胚轴再生不定芽数也达到15.1个;3~5 d苗龄之间的下胚轴不定芽再生能力无显著差异,再生频率均达到80%以上,此后随着苗龄的增加,不定芽分化频率快速下降,苗龄为7 d时再生频率只有51.1%;下胚轴不同切段不定芽再生能力由强到弱表现为:上部切段>中部切段>下部切段;以正插(形态学下端插入培养基)方式接种的外植体不定芽再生能力显著大于反插(形态学上端插入培养基)和平放的;不同品种大白菜下胚轴的不定芽再生能力有一定差异。     

酿酒葡萄"梅尔诺"再生系统建立的研究

以酿酒葡萄“梅尔诺”离体胚珠、叶柄为材料．通过控制激素水平、光照和温度等,对建立再生体系的器官发生途径和体胚发生途径进行了研究。结果表明,体胚的诱导和不定芽的再生与基本培养基、叶柄的着生部位、生长调节物质种类和浓度等因素有关。由“梅尔诺”的胚珠愈伤组织再生出体细胞胚的最佳培养基配方为CPSE培养基(CP287 BA 0．2mg／L NOA 1．0mg／L),体细胞胚再生率可达47．50％。“梅尔诺”体细胞胚在CPSE培养基上100％萌发为芽状,将其切断置于培养基MS TDZ 4．0mg／L上可直接诱导出绿色不定芽,再生率为52．25％;同时在培养基MS TDZ2．0mg／L上获得了“梅尔诺”离体叶柄再生不定芽．再生率为62．42％．二者再生的不定芽的最他增殖培养基为MS BA0．5mg／L。“梅尔诺”体细胞胚的萌发芽在WPM培养基中能很好的生根及成苗,并建立了单芽茎段微繁体系。     

生长素与乙烯在沙田柚上胚轴不定芽再生中的作用

结果表明,6 BA只能诱导较低频率的不定芽再生,IBA的加入可以促进不定芽的再生。从再生率与单位外植体再生芽数综合考虑,以高浓度IBA(1.5mg·L 1)与低浓度6 BA(0.5mg·L 1)配合的效果最佳,加入生长素极性运输的调节剂TIBA与Flavone可进一步提高不定芽的再生频率。乙烯抑制上胚轴不定芽的再生,而乙烯生理作用的拮抗剂Ag+与生物合成抑制剂AOA、Co+可以显著提高不定芽再生频率。水杨酸(SA)也抑制不定芽的再生。     

大车前体外再生体系的建立和优化

大车前不仅有很高的药用价值,在生态学研究方面也是重要模式植物。关于大车前的组培,目前报道很少。我们通过不定芽直接再生和愈伤组织诱导两种途径,建立了大车前（Plantago major L. ‘Giant Turkish.’）的快速高效组培再生系统。完整的成熟种子培养在添加IAA和TDZ的MS培养基中,不经过愈伤的分化阶段,从子叶节的部位产生不定芽,直接不定芽的诱导频率达到100%。在0.2mg/L IAA和1.0mg/L TDZ作用下,培养4～5周后平均每个外植体产生再生芽的数目达到14.6个。对同一个外植体诱导得到的9株再生植株进行的RAPD检测表明,部分植株在DNA水平上发生了变异。以叶片作为外植体,在添加1.0mg/L NAA的MS固体培养基中培养3周后,伤口处形成愈伤组织,产生愈伤的频率平均为98%。愈伤组织在添加4.0mg/L 6BA的MS固体培养基中分化得到再生芽,分化频率为25%,平均每块愈伤产生再生芽2.8个。两种途径得到的再生芽转到1/2 MS培养基上均可生根、长成完整植株,小苗移栽到温室90%能够存活。     

白及假鳞茎薄片诱导不定芽及快繁体系的构建

以白及(Bletilla striata)假鳞茎为外植体,根据上、中、下部位切取薄片,探索假鳞茎不同部位BA、NAA和TDZ对假鳞茎薄片诱导不定芽的影响,比较假鳞茎薄片不同厚度对褐化率和出芽数的影响,采用正交试验,研究了BA和NAA对不定芽增殖的效果,并对组培苗进行壮苗、生根和移栽。结果表明:假鳞茎的部位对诱导不定芽作用极显著,下部的出芽率显著高于上部和中部,BA和TDZ对诱导不定芽作用显著,NAA对诱导不定芽作用不显著。最佳诱导不定芽的方式为假鳞茎下部薄片在基本培养基+2.0 mg·L^-1BA+1.0 mg·L^-1TDZ的培养基上培养4周,出芽率为93.3%,出芽数为15个,厚度为1.6~2.0 mm的假鳞茎薄片其褐化率最低。最佳的增殖培养基为基本培养基+1.5 mg·L^-1BA+0.3 mg·L^-1NAA,增殖系数达4.3,平均苗高为7.8 cm。本研究成功建立了白及假鳞茎薄片诱导芽为关键技术的快繁技术体系,为白及种质资源创新奠定了基础。     

李砧木Marianna离体叶片再生体系优化研究

以李砧木‘Marianna’试管苗新梢顶端第1片叶为外植体,研究激素组合、基本培养基种类及外植体类型等对不定芽再生的影响。结果表明:1/2 MS基本培养基和WPM培养基再生率显著高于MS和SH培养基;叶片附带叶柄的外植体再生率和再生不定芽数显著高于叶柄和切除叶柄的叶片外植体;最佳再生培养基为1/2MS+2.0mg/L TDZ+0.1 mg/L IBA+0.25%琼脂+3.0%蔗糖,最高再生率和再生不定芽数分别为81.7%和7.46±1.38个;最佳生根培养基为1/2MS+0.5~1.0 mg/L IBA,能获得96.7%生根率、较高的生根数和根长。     

梨叶柄再生不定芽的研究

研究获得了梨品种八月红和水晶的叶柄再生不定芽,不定芽由愈伤组织分化形成。诱导叶柄再生不定芽的适宜培养基为NN69＋IBA0.5mg/L（八月红）或IAA0.5mg/L(水晶）＋TDZ1.0mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂6.0g.。AgNO3浓度在0.1-1.5mg/L范围对八月红梨叶柄再生有促进作用,培养基中附加AgNO30.5mg/L八月红梨叶柄再生效率最高。     

诱导二倍体和同源四倍体白菜细胞质雄性不育系不定芽培养基的筛选

以二倍体和四倍体白菜细胞质雄性不育系的子叶为外植体,采用正交设计研究TDZ(0.1、0.5、1.0 mg·L-1)、NAA(0.1、0.5、0.8 mg·L-1)和AgNO3(0、5、10mg·L-1)三因素三水平诱导不定芽的结果表明:二倍体的不定芽再生优化培养基为MS 1.0 mg·L-1TDZ 0.8mg·L-1NAA 5 mg·L-1AgNO3(其再生率为80.7%),三因素影响的顺序为:NAA＞AgNO3＞TDZ;四倍体的不定芽再生优化培养基为MS 0.5 mg·L-1 TDZ 0.5 mg·L-1 NAA 10 mg·L-1 AgNO3(再生率为83.3%),三因素影响的顺序为:AgNO3＞NAA＞TDZ.后者所需TDZ/IAA的比值低于前者.     

不同培养条件对南烛离体叶片不定芽再生的影响

以南烛( Vaccinium bracteatum Thunb.)组培苗离体叶片为实验材料,研究了不同培养条件对其不定芽再生状况的影响并筛选出最适培养条件。结果表明：基本培养基类型、生长调节剂种类及质量浓度、琼脂和蔗糖质量浓度、外植体类型、外植体接种方式和暗培养时间均对南烛离体叶片不定芽的出芽时间和再生率、外植体干枯率以及不定芽的生长状况有明显影响。南烛离体叶片不定芽再生的最佳培养条件为：以中脉横切2次的叶片为外植体,以近轴面面向培养基的方式接种;以1/2MS-1/2WPM为基本培养基,添加7.5 g·L-1琼脂、25.0 g·L-1蔗糖、0.5 mg·L-1 TDZ、5.0 mg·L-12ip或4.0 mg·L-1 ZT,暗培养21 d后转至光照度2000 lx、光照时间16 h·d-1的条件下培养。