小麦抗白粉病侵染初期的表达序列标签分析

以抗白粉病品系“百农 32 17×Mardler”　BC5F4为材料 ,构建了一个白粉病菌接种初期的抑制消减杂交cDNA文库 ,测序获得 76 0条ESTs。与GenBank序列进行BLASTx分析 ,获功能已知ESTs 2 71条。通过分析抗病相关基因 ,推测G蛋白介导的信号传导途径、SA信号传递系统、MAP相关信号传递系统等参与了小麦抗白粉病过程。SAR基因在抗病相关ESTs中的种类与数量最多。数据显示苯丙烷代谢途径、细胞壁结构修饰作用、细胞保卫机制参与了抗病过程。未知功能ESTs与GenBank序列进行BLASTn分析 ,其中许多与病原菌、非病原菌诱导cDNA文库来源的ESTs同源 ;新ESTs占全部ESTs的 16 6 %。     

铝胁迫下柱花草SSH文库构建及表达序列标签分析

柱花草栽培种热研2号（Stylosanthes guianensis‘Reyan2’）对铝毒有较强的耐受性。为了鉴定其在铝胁迫下的诱导基因,利用抑制消减杂交（SSH）技术构建在300μmol·L-1铝胁迫下正向cDNA文库。挑选插入片段大于300bp的600个克隆进行测序,共获得504条表达序列标签（EST）。序列重复性分析表明,其中12.1%的EST只有1次重复,61.4%的EST有2-16次重复,重复出现次数较高的EST是细胞色素P450（53次,占10.5%）、病原诱导型胰蛋白酶抑制剂（44次,占8.7%）和衰老相关蛋白（37次,占7.3%）。BLASTX分析显示,504条EST中有97种非冗余基因,其中包括46条功能已知基因和51条功能未知序列。46条功能已知EST中有30个为已报道铝胁迫相关基因,16个是新发现的铝胁迫相关基因。SSHcDNA文库提供的信息为阐明柱花草耐铝毒的分子机制提供了重要线索。     

铝胁迫下柱花草SSH文库构建及表达序列标签分析

柱花草栽培种热研2号(Stylosanthes guianensis ‘Reyan 2’)对铝毒有较强的耐受性。为了鉴定其在铝胁迫下的诱导 基因, 利用抑制消减杂交(SSH)技术构建在300 μmol·L^–1铝胁迫下正向cDNA文库。挑选插入片段大于300 bp的600个克隆进行测序, 共获得504条表达序列标签(EST)。序列重复性分析表明, 其中12.1%的EST只有1次重复, 61.4%的EST有2–16次重复, 重复出现次数较高的EST是细胞色素P450(53次, 占10.5%)、病原诱导型胰蛋白酶抑制剂(44次, 占8.7%)和衰老相关蛋白(37次, 占7.3%)。BLASTX分析显示, 504条EST中有97种非冗余基因, 其中包括46条功能已知基因和51条功能未知序列。46条功能已知EST中有30个为已报道铝胁迫相关基因, 16个是新发现的铝胁迫相关基因。SSH cDNA文库提供的信息为阐明柱花草耐铝毒的分子机制提供了重要线索。     

狭果葶苈高温响应表达序列标签的分离与初步分析

目的:分离与分析白马雪山流石滩地区植物狭果葶苈高温响应基因,研究高山植物高温耐受机制。方法:应用磁珠介导的抑制消减杂交分离差异表达序列标签(EST),通过测序与Blastx比对,用Blast2go程序进行功能注释和代谢路径分析。结果:大部分EST功能与物质能量代谢、生物合成、蛋白和脂肪结合、转移酶活性相关,还有一些胁迫响应的基因。结论:狭果葶苈高温胁迫应答机制是非常复杂的,需要众多基因的参与。     

宽果苁菔适应昼夜变化ESTs的分离与分析

以流石滩地区植物广布种宽果苁菔为实验材料,应用磁珠介导的抑制消减杂交方法,分离昼夜差异基因。随机挑选了136个差异ESTs克隆并进行测序,测序结果使用Blast2go程序进行功能注释和分析。结果表明绝大部分ESTs功能与稳定细胞状态和抗性响应相关,其次与物质能量代谢和信号传导相关,宽果苁菔适应昼夜变化过程的机制非常复杂,本研究为进一步研究高山植物适应流石滩恶劣环境的机制奠定了基础。     

拟耧斗菜昼夜差异表达ESTs的分离与分析

应用磁珠介导的抑制消减杂交方法,以青藏高原白马雪山流石滩地区植物拟耧斗菜为实验材料,分别在白天与夜晚采样,以白天样品为目标,晚上样品为驱动样品,分离昼夜差异表达的基因。随机挑选了96个差异ESTs克隆并进行测序,测序结果进行blastx网上数据库比对、Blast2go功能注释和KEGG代谢路径分析。结果表明：绝大部分ESTs功能与物质能量代谢、生物合成、蛋白和核酸结合、转移酶活性相关,还有少数与逆境胁迫相关等。这为进一步研究高山植物逆境适应的分子机制奠定了基础。     

小麦温敏雄性不育系YM3314育性转换相关基因分析

采用抑制消减杂交技术,构建了小麦温敏不育系YM3314在陕西杨陵秋播(不育环境)和春播(可育环境)幼穗单核期正反交cDNA文库,对获得的136条高质量EST序列采用BLASTx序列比对进行同源性分析,并利用AmiGo和QuickGo浏览器根据GO(gene ontology)数据库对基因表达产物进行功能分类,比较两种育性条件下幼穗cDNA文库的表达谱,以探讨YM3314的育性转换机理.结果显示:不育文库(B库)中初级代谢(13.51%)、转运(13.51%)、抗病与防御(8.11%)以及功能未分类(18.92%)的EST序列所占比例均高于可育文库(K库)中对应的EST序列比例,且分别是K库的2.30倍、1.53倍、2.76倍、1.29倍;K库中与信号传递(14.71%)相关的EST序列所占比例明显高于B库,是B库的2.72倍;两个库中与能量代谢、蛋白质合成、蛋白质修饰/加工/储藏相关的EST序列所占比例相差不大.分析表明,两个文库中与初级代谢、信号传递等有关的基因表达差异可能是导致其育性转换的重要基础.     

一个新的人类锌指蛋白基因ZNF474的cDNA克隆和表达分析

数据库消减杂交就是利用NCBI中的Unigene数据库中大量的数据资源,收集各种细胞或组织的基因表达谱进行两两比较或多重比较,获得两组文库间有统计学意义的差异表达基因。运用NCBI中的数据库消减杂交分析方法,从人睾丸组织中分离了一个含有C2H2结构的新型锌指蛋白基因-ZNF474(GenBank登录号：AY461732)．通过推导和进一步的RT—PCR实验证实：该基因含2个外显子,gDNA在染色体上跨度30065bp,定位于人染色体5q23．1-q23。2．cDNA编码一个含364个氨基酸的新蛋白,分子质量是40．3kDa,等电点为9．59。Northem杂交结果显示：该基因含有2．37kb大小的唯一转录本,主要在睾丸中很强表达,卵巢中有弱表达,而其他组织中该基因无表达．结果提示：ZNF474基因对精子发生和卵母细胞的发育可能起重要作用、     

小鼠睾丸和卵巢特异表达基因Zfp474的克隆与特征分析

运用NCBI中的数据库消减杂交(Digital Differential Display,DDD)分析方法,从小鼠睾丸组织中分离了一个含有C2HC／C3H结构的新型锌指蛋白基因——ZIM74(GenBank登录号：AY350709)。通过推导和进一步的RT-PCR实验证实：该基因含4个外显子,gDNA在染色体上跨度29869bp,定位于小鼠染色体18D1。cDNA编码一个含347个氨基酸的新蛋白,带有C2HC／C3H结构域。Northern杂交结果显示：该基因含有2．37kb大小的唯一转录本,主要在睾丸中强表达,卵巢中有表达,而在其他组织中该基因无表达。结果提示：Zfp474基因对精于发生和卵母细胞的发育可能起重要作用。     

溶藻弧菌诱导凡纳滨对虾消减文库的构建及其表达序列标签分析

利用抑制消减杂交技术构建了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)诱导的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)血淋巴细胞cDNA文库。用DNAMAN5.2.2软件对560条高质量的ESTs进行聚类,共获得239个Unigenes。与GenBank进行BLASTx和BLASTn同源比较,其中66.9%为已知功能基因,33.1%为未知功能基因,GO分类将其分为7类,包括能量和基础代谢类相关的基因为第一大类占36%,免疫相关基因占15%,其他基因占8%,信号转导类占3%,抗氧化酶和凋亡相关蛋白均为2%,核蛋白类占1%。实验结果表明凡纳滨对虾在溶藻弧菌诱导下可产生一系列特异基因的表达,通过对文库的分析显示,基于PCR方法建立的SSH文库为取得大量免疫相关基因的ESTs序列提供了可能。       

Isolation and Analysis of Differential Expressed ESTs from Stem Trichomes of Lycopersicon esculentum (Solanaceae)

Glandular trichomes are special organs involved in plant defense response and synthesis of volatile secondary metabolites, analyzing trichome specific expressed sequence tags will help us further understand the specific function of plant trichomes. In this paper, suppression subtractive hybridization（SSH） based on magnetic beads technology was used to isolate differential expressed genes of the glandular trichomes in Lycopersicon esculentum. The differential expressing cDNA library was constructed using the glandular trichomes cDNA as tester and the cDNA from the stem without glandular trichomes as driver. After randomly sequencing 108 differential ESTs, Blast2go program was used to do blastx, functional annotation and metabolism analysis. The results show that most ESTs are related to substance metabolism, response to stress, biotic or abiotic stimulus, and have binding and catalytic function. These differential genes lay the foundation for further research on defense mechanism of the tomato trichomes.     

Isolation and characterization of nitrate reductase-deficient mutants in tomato (Lycopersicon esculentum Mill.).

Summary Five nitrate reductase-deficient mutants of tomato were isolated from an M2 population after ethyl-methanesulphonate (EMS) seed treatment by means of selection for chlorate resistance. All mutations were monogenic and recessive and complementation analysis revealed that they were non-allelic. Biochemical and molecular characterization of these mutants showed that four of them are cofactor mutants while one is an apoenzyme mutant.     

Plant Regeneration from Cotyledon Protoplasts of Tomato (Lycopersicon esculentum L.)

otyledon protoplasts of tomato (Lycopersicon esculentum L.) isolated from 2–3 week grown seedlings were cultured in MS liquid medium (2,4-D 1, 6-BA 0.1 mg/l) and fresh medium added subsequently. After 6 weeks culture, the cell clusters were transferred to semisolid medium (the additive same as in liquid medium, agar 0.3%). When the calli grew to 0.5 cm in diameter, transfer them to MS medium (6-BA 2, IAA 0.2 mg/l) for differentiation. The regenerated plants were obtained. After comparing different culture methods, tomato protoplasts grew better in double layers than in agar plate and hanging drops.     

Hygienic quality of traditional processing and stability of tomato (Lycopersicon esculentum) puree in Togo

Microbiological and physicochemical qualities of a tomato (Lycopersicon esculentum) puree production line (ripe tomato, washing, cutting, pounding, bleaching, straining, bottling and pasteurization) and its preservation in Togo, West Africa, were studied using the HACCP method. Samples generated during the steps described previously were analyzed by determining sensory, chemical and microbiological characteristics. Samples were analyzed using MPN for coliform populations and plate count methodology for other bacteria. The microorganisms involved in spoilage of the opened products were moulds of genera Penicillium, Aspergillus, Fusarium, Geotrichum, Mucor and gram-positive Bacillus bacteria. The preserved tomato puree exhibited a pH value of 4.3, 90% water content, 0.98 water activity (aw) and an average ascorbic acid level of 27.3mg/100g. Results showed that the critical control point (CCP) of this tomato puree processing line is the pasteurization stage. The analysis of selected microbiological and physicochemical parameters during the preservation of bottled tomato puree indicated that this product was stable over 22 months at 29 degrees C. But the stability of the opened product stored at 29 degrees C did not exceed two months.     

昼间亚高温对花后番茄叶和果实中光合产物代谢的影响

于日光温室中栽培的番茄第一花序第一花开花和开花10d时分别作昼间35℃亚高温处理(以25℃为对照),检测不同生育期的番茄叶与果实中同化产物积累与代谢变化的结果表明:番茄开花后叶中果糖、葡萄糖和蔗糖含量均下降,花后亚高温处理时期越早,叶中糖含量越低;果实发育过程中的果糖、葡萄糖和蔗糖含量比25℃下的高,但成熟时趋于一致。叶和果实中蔗糖代谢相关酶的活性变化基本一致,酸性转化酶(AI)与中性转化酶(NI)活性下降,蔗糖合成酶(SS)和蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性升高。     

无核荔枝果实形成差异表达基因cDNA的克隆

采用抑制差减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)分离与海南无核荔枝果实形成相关的差异表达基因的cDNA片段,为克隆相关基因提供研究基础。分别以无核荔枝的有核幼果为driver;无核幼果为tester,建立差减cDNA文库。经Reverse Northern Dot-Blot筛选该文库,共获得61个阳性克隆,随机选取17个克隆进行测序,共获得10条非重复序列,对其中较长的7个序列进行同源分析,结果表明:有6个序列在荔枝中为首次报道。     

1-甲基环丙烯采后处理对樱桃番茄果实成熟过程的影响

研究了不同浓度(0、0.035、0.07和0.11μL/L)的乙烯受体竞争性抑制剂1-甲基环丙烯(1-MCP)采后处理对绿熟期樱桃番茄的乙烯合成、果实软化、果实色素(叶绿素、茄红素、β-胡萝卜素)含量消长的影响.0.07 μL/L及其以上浓度的1-MCP降低了前期乙烯合成,同时推迟了乙烯释放高峰,但0.035 μL/L浓度的1-MCP处理并不能抑制内源乙烯合成.1-MCP显著延迟了果实软化和叶绿素降解,但并不影响这两个过程的启动.茄红素合成的启动和积累均受到了1-MCP抑制,而1-MCP并不推迟β-胡萝卜素合成的启动,只抑制其积累.这些结果提示了乙烯调节成熟生理过程的不同机制.对于绿熟期的樱桃番茄,0.07～0.11μL/L的1-MCP是实用的有效处理浓度.1-MCP有效浓度可能用于了解果实的乙烯受体水平和乙烯敏感性.     

Ca2+对离体培养的番茄花柄脱落的影响以及脱落过程中离区内钙形态的变化

在自然条件下,Ca~(2 )对离体培养的番茄花柄脱落有抑制作用,而对经乙烯处理的则有显著的促进。无论是在自然还是乙烯条件下,未经任何处理的番茄花柄脱落过程中总钙与果胶酸钙含量下降,而水溶性钙含量升高,Ca~(2 )在不同程度上提高脱落过程中离区总钙、果胶酸钙和水溶性钙含量,尤其是在乙烯下的效果更显著,而经EGTA处理的则相反。