斯坦福大学发现祖血细胞;Immunex公司克隆IL-7和重组体IL-1受体

血液中每一种免疫系统细胞的神秘祖先干细胞-1已经在斯坦福大学被发现了。该祖干细胞的子代细胞的刺激剂白细胞介素-7(IL-7)已经由西雅图Immunex公司的科学家鉴定、克隆和表达了。现在二个实验室准备就他们的发现进行交流。斯坦福研究小组成员Shelly Heimfeld说:我们将利用一些IL-7,并在干细胞中测定IL-7,然后观察干细胞是否生长。相反,Immunex公司主管研究开发的董事Steven Gillis告诉本刊:他们将马上试验IL     

扩大干扰素应用范围的动向——γ用于风湿性关节炎,α用于白血病

Biogen公司发表:该公司研制的γ干扰素(γIFN)在西德获得了作为风湿性关节炎治疗药使用的专利权。另外,Schering Plough公司(新泽西州,麦迪逊)发表:加拿大的专家认为该公司销售的Biogen公司研制的α干扰素(αIFN)“Intron A”对至今不能治愈的hairy细胞白血病有治疗效果。还有,M.D.Anderson医院癌症研究所(得克萨斯州,休斯敦)报告。给慢性髓细胞性白血病(CML)患者17人投与重组αIFN时,发现13人“从血液学的角度看也是有完全的抑制效果”。在M.D.Anderson医院指导白血病治疗的Jordan U.Gutterman建议两种IFN同时投与。为了增加治疗效果,他对慢性髓细胞性白血病患者投与了αIFN和重组γIFN。关于已使α和γ     

不同泌乳期奶山羊乳腺OPN基因表达及其对MCF-7细胞生长的影响

为了研究骨桥蛋白基因(OPN)在奶山羊(Capra hircus)乳腺组织不同泌乳期的变化规律及其功能, 采用SYBR Green染料建立该基因的实时荧光定量PCR(QPCR)分析方法, 以b-actin基因为内参, 对该基因在乳腺组织泌乳28 d、60 d、100 d、190 d、270 d和330 d的mRNA表达水平进行检测; 同时将该基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1, 构建重组质粒pcDNA3.1-OPN, 所获重组质粒经过酶切和测序鉴定后, 转染MCF-7细胞, 采用MTT(四唑盐, 3-(4, 5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3, 5-di-phenytetrazoliumromid)法检测OPN对MCF-7细胞的增殖差异, 结果表明: OPN基因在泌乳初期(28 d)和泌乳后期(190 d)表达水平较高, 干奶期最低, 其表达水平总体呈现高-低-高-低的变化模式。MTT实验表明转染OPN基因的MCF-7细胞较未转染基因组细胞的生长具有显著差异(P<0.05), 说明OPN的表达具有促进MCF-7细胞生长的作用。     

美、英生物技术公司简介

1985年5—7月我国曾派出三个生物技术出国考察团,现将他们考察的7个公司的概况简介如下: 一、Hybritech公司(美国,圣地亚哥) 该公司建于1978年,为生产单克隆抗体(以下简称McAb)诊断盒的主要厂家。该     

Cytel计划试验乙型肝炎疫苗

由 Cytel Corp.(Sun Diego,CA)和 Scripps Research Institute(La Jolla,CA)合资经营的 Sequel Therapeutics 已经向美国 FDA 提出申请(CY1899号),拟将其研制的新药(IND)(一种慢性乙型肝炎疫苗)用于人体试验,如果 FDA 完全同意的话,该公司将于近期开始进行临床试验。通过引入的肝炎疫苗片段刺激细胞毒素 T 细胞对巨噬细胞上的主要组织相容性复合物(MHC)超反应,从而设计了上述疫苗,该疫苗可激发细胞毒素 T 细胞的应答。细胞毒素 T 细胞是免疫系统中能够     

S24795上调星形胶质细胞内源性Cryab抑制Aβ聚集的研究

该文探讨了S24795激活星形胶质细胞α7胆碱能受体(α7 nicotinic receptors,α7 n ACh Rs)上调内源性αB-晶状体蛋白(αB-crystallin,Cryab)并抑制β淀粉样蛋白(amyloidβ,Aβ)集聚的现象及其形成机制。分离24 h内新生乳鼠大脑皮质培养原代星形胶质细胞并鉴定;体外制备Aβ1-42寡聚体;将细胞分组处理。用Western blot检测细胞内Cryab、Phospho-Akt、Aβ寡聚体的水平。结果显示,S24795可以显著上调星形胶质细胞内源性Cryab蛋白质,该上调效应能被(methyllycaconitine,MLA)或LY294002抑制;S24795能够显著上调磷酸化Akt水平上调,该上调效应能被MLA或LY294002抑制;在细胞裂解液及培养基中,S24795显著增强星形胶质细胞对Aβ聚集的抑制作用,该效应被LY294002抑制。该研究结果提示,磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)信号通路可能参与S24795激活星形胶质细胞α7 n ACh Rs上调内源性Cryab的表达,从而进一步抑制Aβ集聚。这为进一步研究S24795抑制Aβ集聚的可能机制提供了实验基础。     

DNA探针改善子宫颈癌病毒的检测

由 Life Technologies 公司(马里兰州 Gaithersburg)和 Enzo Biochem 公司正在开发的 DNA 探针试验将比通常应用的检测人类乳头状瘤病毒(HPV)的巴氏涂片试验可靠得多。在过去的十年里,在美国,感染 HPV 病毒的人增加了十一倍。一些 HPV 病毒同子宫颈癌有关。去年,美国有52 000名妇女患此病,其中有7 000人已死于此病。在男子中,这一病毒也引起泌尿生殖器癌。该病毒的其它类型还可以引起生殖疣。传统的巴氏试验是不可靠的,因为它是利用显微镜检查受试细胞是否异常。这种试验的20%的结果查不出实际存在的病毒。Enzo Biochem 公司的新的试验是应用该公司专有的非放射性标记的系统。这个探针在     

SV40载体在COS7细胞中的复制及外源基因的表达

为评价SV4 0载体 COS7稳定表达系统的可能应用价值 ,将含人组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)编码区的SV4 0载体pctPA转染COS7细胞 ,并以G4 18选择培养 2 8d ,得到稳定的抗性细胞库 .Southern印迹和溶圈法分别分析该细胞库在随后的细胞传代中细胞内附加体拷贝数及t PA表达水平的变化 .在经选择培养 2 8d的COS7细胞库中 ,质粒pctPA以染色体外附加体的形式存在 (30 0拷贝 细胞 ) ,t PA的表达水平为 1 1μg d(10 6细胞 ) .在随后 3个月的动态观察中 ,随着细胞传代 ,该COS7细胞库tPA的表达水平虽逐渐递减 ,但在第 1个月内可保持在 1μg d(10 6细胞 )以上 .基于SV4 0载体 COS7稳定表达系统无需筛选克隆 ,在稳定的抗性细胞库形成后的 1个月内可能保持目的基因的高水平表达 ,因而较适合于需同时制备多种重组蛋白的实验 .     

高表达CXCR4/CXCR7对小鼠胚胎肝干细胞增殖、迁移和抗氧化应激损伤的影响

该研究探讨了基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)/趋化性细胞因子受体4(chemotaxis cytokine receptor 4,CXCR4)和SDF-1/趋化性细胞因子受体7(CXCR7)对小鼠胚胎肝干细胞14-19(HP14-19)增殖、迁移和抗氧化应激损伤的影响。重组腺病毒Ad-CXCR4和Ad-CXCR7感染HP14-19细胞,流式细胞术和Western blot检测细胞膜上CXCR4/CXCR7受体的表达;MTT法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移;过氧化氢(H2O2)处理细胞,建立氧化应激损伤模型,MTT法检测细胞活力;酶学法检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。结果显示,感染腺病毒Ad-CXCR4/CXCR7后,HP14-19细胞膜CXCR4/CXCR7受体水平显著上调;高表达CXCR7可增强细胞增殖活性,而高表达CXCR4对细胞增殖活性无显著效果;高表达CXCR4或CXCR7可显著增强SDF-1诱导的HP14-19细胞的迁移和氧化应激状态下的细胞存活率,其中,CXCR7对迁移效应较强;与对照组比较,高表达CXCR4或CXCR7可降低H2O2造成的细胞LDH活性,增强SOD活性。因此,CXCR4参与了SDF-1诱导的HP14-19细胞增殖作用,且CXCR4/CXCR7介导SDF-1诱导HP14-19细胞的迁移和抗氧化应激损伤作用。     

shRNA介导DEPDC7基因沉默对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭及迁移能力影响的研究

功能未知基因DEPDC7(DEP domain containing 7)是从基因芯片数据挖掘得到的,基因表达谱提示只在肝组织中选择性高表达,但是关于DEPDC7在肝癌细胞内参与的生命活动及其分子机制的相关研究报道较少。该研究应用RNAi技术构建DEPDC7慢病毒载体并感染人肝癌细胞株HepG2,利用RT-q PCR和Western blot方法检测DEPDC7干扰效果。运用噻唑蓝(MTT)比色法和克隆形成方法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Transwell小室检测细胞侵袭迁移能力。结果显示,成功构建的DEPDC7慢病毒载体可以有效干扰DEPDC7 m RNA和蛋白的表达(P0.05)。此外,DEPDC7被沉默后,可以有效促进细胞周期从G1期向S期转变,细胞增殖和侵袭迁移能力均显著提高(P0.05)。该研究提示,肝癌细胞HepG2中DEPDC7低表达能有效提高细胞增殖、克隆形成和侵袭迁移能力,为后续研究DEPDC7转录调控机制等指明了方向。     

稳定表达T7 RNA聚合酶IBRS-2细胞系的建立以及利用该细胞系对SVDV的体内拯救

利用PCR从λ溶原性细菌DE3中扩增出T7 RNA聚合酶基因,定向克隆进逆转录病毒载体pBABEpuro,得到阳性重组质粒pTTBABEpuro.把该重组质粒与pVSV-G共感染GP2-293包装细胞系,形成假型病毒.通过polybrene介导假型病毒感染IBRS-2细胞,利用嘌呤霉素进行传代筛选,形成细胞系IBRST7.对不同代次的IBRST7细胞基因组进行PCR和RT-PCR鉴定,结果表明,T7 RNA聚合酶基因在细胞传代过程中能稳定存在,并能表达目的蛋白的mRNA.为了鉴定T7 RNA聚合酶在IBRST7细胞内是否具有转录活性,扩增口蹄疫病毒(FMDV)的内部核糖体进入位点(IRES)片段和EGFP基因,定向克隆于原核表达载体pET-43.Ia-c( )中,构建了T7启动子控制下转录的具有非帽依赖性表达的重组质粒pIERS-EGFP-ET,把该质粒转染IBRST7细胞,能够在紫外显微镜下观察到绿色荧光,说明EGFP得到了表达,表明IBRST7细胞系内的T7 RNA聚合酶具有转录活性.然后,利用该细胞系成功拯救出具有感染性的猪水泡病病毒(SVDV),并对其生物学功能进行了鉴定.该细胞系的建立为利用T7 RNA聚合酶转录系统体内高效拯救病毒提供了基础.该拯救病毒的策略使RNA拯救简化为一步快速的拯救方法,为进一步探索SVDV病毒致病的分子机制及研制新型SVD疫苗奠定了良好的基础.     

重组杂交油菜的商业化在加拿大获得认可

比利时PGS International公司95年5月9日宣布加拿大粮农部批准该公司商业栽培重组杂交油菜(F_1油菜)。该部认为,这种重组F_1油菜可作动物饲料使用。栽培重组F_1油菜,对环境也无不利影响。该公司已得到加拿大卫生部许可作为食品销售重组F_1油莱。 该公司领先世界开发了生产F_1种子用的亲株制作技术“Seedlink”(通过结合使用向花粉细胞特异的     

H7N9流感病毒感染A549细胞蛋白质组学的初步研究

通过建立H7N9和H1N1流感病毒(H1N1pdm09)感染人肺癌上皮细胞(A549)模型,研究病毒感染细胞后细胞蛋白质组学差异变化,探讨H7N9流感病毒感染人类致病机制。将感染复数(MOI)为0.001的H7N9、H1N1pdm09流感病毒感染A549细胞24h、48h、72h后提取细胞总蛋白进行荧光双向差异凝胶电泳(2D-DIGE)和基质辅助激光解析串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析鉴定差异蛋白。质谱共鉴定出H7N9和H1N1pdm09流感病毒感染A549细胞24h、48h、72h上调或下调的差异蛋白分别为11、12、33个。对差异蛋白进行功能分析发现与H1N1pdm09感染组相比,(纤)丝状肌动蛋白成帽蛋白α1(F-actin-capping protein subunit alpha-1,CapZ-α1)、鸟氨酸氨基转移酶(Ornithine aminotransferase,OAT)、Poly(rC)-binding protein 1(PCBP1)、真核翻译起始因子5A-1(Eukaryotic translation initiation factor 5A-1,eIF5A)在H7N9感染A549细胞后表达量的下调加速了致细胞病变效应。血小板活化因子乙酰水解酶Ⅰb亚基β(Platelet-activating factor acetylhydrolaseIb subunit beta,PAFAH1B2)在H7N9感染A549细胞后期表达量显著降低可能与该病毒感染患者的临床症状相关。     

BRD7的亚细胞定位及其假定核输出信号序列的分离与鉴

BRD7被鉴定为一个鼻咽癌密切相关新基因和潜在的核转录调节因子．通过绿色荧光蛋白(GFP)介导的亚细胞定位方法,系统研究BRD7在非洲绿猴肾COS7细胞、人宫颈癌HeLa细胞以及人鼻咽癌HNE1细胞中的亚细胞定位,发现BRD7主要定位在细胞核,呈细点状或条梭状分布,3株细胞中没有明显的细胞类型差异．通过对BRD7编码蛋白氨基酸序列进行比对分析,发现了1个具有亮氨酸富集特征的假定核输出信号序列pNES,该区域具有类似核输出信号特征序列“ L-x(2,3)-［LIVFM］-x(2,3)-L-x-［LI］ "（X代表任意氨基酸）的结构;通过功能分析,发现它不具有介导异源蛋白GFP胞浆定位的功能,且其亚细胞定位或胞浆/胞核分布比例不受细霉素B(leptomycin B)干预的影响,说明这个pNES不具核输出信号结构域的功能,不是BRD7的核输出信号．     

荷兰一公司在欧洲首次推出商业化的自体皮肤移植产品

ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＮＥＷＳ 2 0 0 1年 2 1卷 2 8期第 1页报道 :上星期 ,组织工程公司ＩｓｏｔｉｓＮＶ(Ｂｉｌｔｈｏｖｅｎ荷兰 )在研发细胞活性皮肤方面取得了可喜进展 ,细胞活性皮肤是该公司定制的治疗严重烧伤 (例如 ,烧伤面积超过体表 6 0 %～ 70 % )的自体组织替代产品 ,公司将其市场局限于西欧 ,估计每年将有 15 0个病人受益 ,此产品已由Ｇｅｎｚｙｍｅ组织修复公司 (剑桥 ,摩洛哥 )资助在美国上市。Ｉｓｏｔｉｓ目前正处于发展阶段 ,尽管如此 ,公司发言人Ｈｅｒｋｌｏｔ指出 :目前细胞活性皮肤产品在医院和烧伤中心的成功…     

Galectin-7对食管鳞癌细胞株Eca-109迁移、侵袭的影响及其机制

为了探讨半乳糖凝集素-7(Galectin-7)在食管癌Eca-109细胞发生发展中的细胞外功能及其机制,该实验采用免疫印迹法检测浓缩细胞上清液中Galectin-7的表达,并利用不同浓度的重组Galectin-7培养食管癌Eca-109细胞。使用免疫印迹、实时荧光定量PCR、细胞划痕实验、MTT实验检测在培养后细胞中基质金属酶-9(MMP-9)、p38、pp38表达水平的变化以及Eca-109细胞迁移和增殖能力的改变。结果显示,Galectin-7存在于Eca-109细胞细胞上清液中,加入重组Galectin-7培养细胞后,MMP-9、pp38的表达水平明显上升,并且细胞的迁移能力也得到了提高,增殖能力无明显变化。由此说明,在食管癌Eca-109细胞中,Galectin-7可以被细胞分泌至细胞外,可能通过结合细胞外膜上特异性糖基配体激活p38 MAPK通路诱导MMP-9的表达,从而在Eca-109细胞侵袭、迁移过程中发挥重要的作用。     

两株耐紫杉醇人乳腺癌细胞MCF-7的比较

建立稳定的肿瘤多药耐药(MDR)细胞株是肿瘤MDR机制研究的基础,以MCF-7细胞林为亲本细胞株,采用低浓度加量持续诱导和高浓度短期作用分别建立MCF-7/Taxola和MCF-7/Taxolb细胞模型,并对其耐药谱、动力学周期变化、表形变化、细胞侧群分布、药物蓄积等生物学特性比较评价.结果表明,MCF-7/Taxola和MCF-7/Taxolb细胞的紫杉醇(paclitaxel/Taxol)半数抑制浓度(IC50)分别是亲代MCF-7细胞的525倍和330倍,并且都对多种化疗药物交叉耐药;MCF-7/Taxola细胞S期细胞显著增加,G,期细胞减少;MCF-7/Taxolb细胞各个期变化不大;MCF-7/Taxola细胞P-糖蛋白(P-gP)、肺耐药相关蛋白(LRP)和还原型谷胱甘肽-S转移酶(GSTπ)的表达水平较亲代有显著增加,而MCF-7/Taxolb细胞GSTπ的表达水平较亲代也有显著增加,另外,拓扑异构酶Ⅱ(ToPoⅡ)在两株耐药细胞中表达都明显下降,而两株细胞雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)阳性都表达丢失;光镜下耐药细胞MCF-7/Taxola明显变大并且形态不规则而MCF-7/Taxolb变化不大;电镜下MCF-7/Taxolb表面纤绒毛成小球状隆起和絮状,而MCF-7/Taxolb表面成絮状:MCF-7/Taxola撤药10天后细胞中有紫杉醇蓄积,而MCF-7/Taxolb中没有紫杉醇蓄积.两个模型都具有MDR的基本生物学特性,可用于肿瘤MDR机制的研究,通过两种耐药细胞的比较,推测MCF-7/Taxolb细胞是MCF-7/Taxola细胞的一个亚群.     

TRPM7调控PI3K/AKT通路对人脑血管外膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响

人脑血管外膜成纤维细胞(HBVAFs)的异常增殖参与了血管增殖性疾病的发生发展。该研究探讨TRPM7(transient receptor potential melastatin 7)能否通过调控PI3K/AKT信号通路影响HBVAFs增殖和凋亡。体外培养HBVAFs细胞,分为如下几组:parental(正常培养HBVAFs细胞)、si-NC、si-TRPM7、si-NC+IGF-1(PI3K/AKT信号通路激活剂)、si-TRPM7+IGF-1。通过qRT-PCR法检测TRPM7 mRNA表达;CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况;Western blot法检测目的蛋白水平。结果显示,si-TRPM7转染可显著降低HBVAFs细胞中TRPM7 mRNA和蛋白表达水平(P0.001);与si-NC组比较,si-TRPM7组细胞增殖活力下降(P0.001),细胞G_0～G_1期细胞比率上升(P0.001),S期细胞比率下降(P0.001),周期调控蛋白CCND1、CDK2、CDK4水平均明显下降(P0.001),凋亡百分比增加(P0.001),Bcl-2、p-PI3K及p-AKT蛋白表达下降(P0.001),Bax、cleaved caspase-3及Cytochrome c蛋白表达增加(P0.001);而PI3K/AKT信号通路激活剂IGF-1处理可有效逆转si-TRPM7介导的上述改变(P0.001)。这些结果提示,干扰TRPM7表达可通过抑制PI3K/AKT信号通路激活发挥抑制HBVAFs细胞增殖并诱导凋亡的作用,为TRPM7作为血管增殖性疾病的治疗靶点提供理论依据。     

新型双核铂(Ⅱ)配合物通过p53-Bak途径诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

新型双核铂(Ⅱ)配合物{［cis-Pt(NH3)2Cl］2L}(NO3)2（L=4,4′-methylenedianiline)对多种肿瘤细胞有一定的抑制作用,但作用机制不明。本研究以顺铂为对照,探讨了该双核铂(Ⅱ)配合物对MCF-7细胞增殖抑制、细胞周期、细胞凋亡及凋亡相关因子p53、P-p53(ser15)、p21、Bcl-2、Bak、Cleaved- caspase-3、cPARP（cleavage of poly(ADP-ribose)polymerase）的影响。MTT法检测配合物或顺铂在不同浓度或不同作用时间后对MCF-7增殖的影响,其中作用48 h后配合物对MCF-7的IC50为1.59 μmol/L,顺铂为7.95 μmol/L。原位移植瘤实验显示,配合物组肿瘤抑制率为54.1%,高于顺铂组（36.2%）。同等条件下,配合物处理的MCF-7细胞,经Hoechst33342染色后出现明显细胞体积缩小和染色质固缩现象。流式细胞检测技术分析显示,经该配合物处理后,大部分MCF-7细胞停滞在S期,并出现了细胞膜外表面的磷脂酰丝氨酸外翻与线粒体内膜急剧下降等典型的细胞凋亡现象。Western 印迹结果显示,随着配合物浓度增加,Cleaved-caspase-3、p53、P-p53(ser15)、cPARP、Bak蛋白表达增强,而p21、Bcl-2表达水平下调。上述结果表明,该配合物可能通过p53-Bak途径诱导DNA损伤,进而导致MCF-7细胞发生凋亡。     

Phillips公司采用酵母生产具有高产量的rDNA链球菌激酶

Phillips Petroleum公司(巴特尔斯维尔,俄克拉何马州)的科研人员采用重组体DNA技术,通过一种甲基营养酵母巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)生产了大量的链球菌激酶。在意大利的科莫举行的欧洲生物技术联合会议上,Phillips公司的科学家说,他们采用自己公司研究出的方法,培育生产链球菌激酶的酵母细胞在发酵罐中的密度每升高达50克干重细胞,链球菌激酶的生产量高达250毫克/升。据说,该产品与由似马链球菌(S.equisimilis)细菌产生的链球菌激酶在分子大小和活性方面是相同的。此外,这种酵母不会使任何类型的酶降解。 Phillips公司只提到对链球菌激酶感兴趣,但据与该公司关系密切的消息灵通人士说,这很可能是“冰山的顶峰”,意指phillips公司对这种药的商品化很感兴趣。