重组人碱性成纤维细胞生长因子工程菌的发酵工艺研究

对大肠杆菌表达的rh-bFGF工程菌的发酵条件进行了研究,探讨了发酵条件对工程菌表达外源蛋白量及细菌收率的影响,优化了影响发酵的各种条件,如培养基配方,pH值,补料,诱导表达时机等,形成了一套工程菌发酵表达外源蛋白成熟工艺,并从工业化角度对工程菌的高密度,高表达间的关系进行了探讨。     

碱性成纤维细胞生长因子

综述了近年来碱性纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的研究进展,重点介绍了ｂＦＧＦ的两类受体及其在信号传递过程中的作用,讨论了ｂＦＧＦ的基因结构及表达调控机制,阐述了ＢＦＧＦ的生物学功能。     

DNA重组碱性成纤维细胞生长因子的研究与开发

碱性成纤维细胞生长因子(Basic Fibro-blast Growth Factor,bFGF)和其它细胞因子一样是哺乳动物和人体中一种正常的非常微量的物质,然而生理功能却非常广泛,在临床上有重要价值。     

碱性成纤维细胞生长因子研究进展

碱性成纤维细胞生长因子是一种在体内分布广泛、生理功能重要的生长因子,本文综合讨论了其家族成员、分子结构、生物学功能、作用机理和研究趋向等问题。     

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在骨组织工程学中的研究进展

碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)是近年来研究较为广泛的生长因子之一,对骨组织有着广泛的生物学效应。本文就bFGF的研究进展及其目前在骨组织工程学研究方面的应用做一综述。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子的柱复性研究

收集rhbFGF工程菌菌体,包涵体纯化后经凝胶过滤柱复性,所得复性后bFGF通过肝素亲和柱纯化并测活。各种复性方案中复性后bFGF比活最高为2．5×105U／mg,得率最高为74％。复性液中的变性剂浓度及是否含有还原剂,柱流速及柱体积都会影响复性后bFGF的得率和活性。     

碱性成纤维细胞生长因子研究进展

碱性成纤维细胞生长因子是细胞生长和分化的重要调节因子,具有促血管生成、细胞增殖、细胞趋化、细胞迁移等活性,在细胞分化和机体发育过程中发挥重要作用。碱性成纤维细胞生长因子通过与细胞膜表面的特异性配体结合,进而引发细胞内的一系列级联反应,从而产生各种生物学效应。本文对碱性成纤维细胞生长因子的生物学基础、信号转导、生物学功能以及临床应用研究进展作一综述。     

重组碱性成纤维细胞生长因子游离巯基的测定分析

建立了一种紫外-可见分光光度检测法,可以快速、简便、稳定地测定重组碱性成纤维细胞生长因子的游离巯基含量。将检测试剂、标准品及待测样品一起反应后,在412 nm波长处读取OD值,以标准品浓度为横坐标,以吸光值为纵坐标,绘制标准曲线,根据标准曲线计算待测样品中游离巯基含量;同时对该方法进行了方法学验证。结果表明:该方法专属性强,游离巯基含量测定范围为20~80 μg/ml,线性相关系数在0.999以上,回收率范围为91.7%~107.4%;而且该法精密度较好,精密度的变异系数范围为5%~8%。测得的分子表面和总游离巯基含量与理论一致,可用于蛋白质游离巯基检测,以监测分子结构的正确性与均一性。     

考马斯亮蓝法检测重组碱性成纤维细胞生长因子

目的：建立考马斯亮蓝法（CS）检测重组碱性成纤维细胞生长因子（r-bFGF)含量。方法：以牛血清白蛋白（BSA）为标准液,考马斯亮蓝（CBG－250）为染色剂,检测595nm吸光度并绘制标准曲线找出回归方程,对照r-bFGF样品计算含量。结果：此法敏感性高,可测出μg水平蛋白,标本量只需50－100μl,染料与蛋白的结合反应快,只需2min即可比色,显色稳定,可维持1h,重现性好,变异系数在5％以内。结论：此法简便有效、灵敏性高,能快速检测r-bFGF含量。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子基因工程菌的高密度培养

根据重组人碱性成纤维细胞生长因子基因工程菌的生长特点,对其高密度发酵工艺条件进行研究和改进,采用“平衡DO-State”控制策略进行分批补料培养中的葡萄糖流加,有效地控制了培养过程中代谢副产物-乙酸的产生及其对工程菌生长的抑制作用,使发酵终了时乙酸浓度由15．6g/L下降为2.6g/L,而菌体密度则由15．2gDCW/L提高到30．2gDCW/L。     

重组可溶性TRAIL的表达与生物学活性

研究重组可溶性TRAIL的抗肿瘤生物学活性。采用基因分子生物学方法构建重组可溶性TRAIL的表达载体,建立大肠杆菌表达菌株,采用柱层析等方法获得纯化的重组可溶性TRAIL;采用流式细胞术、细胞活性测定法和体内药效学实验分析重组可溶性TRAIL杀伤肿瘤细胞的生物学活性。结果表明重组可溶性TRAIL在体外可诱导人白血病细胞和肝癌细胞凋亡,凋亡率达50%以上。中枢神经系统的肿瘤细胞对重组可溶性TRAIL不敏感。重组可溶性TRAIL在体内能显著抑制人非小细胞肺癌细胞在小鼠体内生长,抑制率达70%以上。结论为研究制备的重组可溶性TRAIL能在体内外杀死多种肿瘤细胞,具有显著的临床应用前景。     

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)相关结合蛋白

有四种不同类型的细胞表面或细胞外基质中的蛋白质分子在结合碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、辅助其发挥生物功能活性方面起着重要的作用。它们是 :(1)细胞膜上的具有酪氨酸激酶活性的FGF受体家族 (FGFRs) ;(2 )细胞外基质中的硫酸乙酰肝素蛋白多糖家族 (HSPGs) ;(3)细胞内富含半胱氨酸的FGF受体 (CFR) ;(4)分泌型的FGF结合蛋白 (FGF BP)。本文试图从它们在bFGF生物功能发挥中可能起到的作用对它们进行简单综述。     

碱性成纤维细胞生长因子对培养的瘢痕成纤维细胞FN合成的调控作用

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对成纤维细胞纤维连结蛋白（FN）合成的调控作用。方法采用细胞培养、ELISA法、RT-PCR方法观察bFGF在不同剂量下对瘢痕来源的成纤维细胞FN合成的影响。结果FN的表达在低bFGF浓度组与对照组无明显差异,随着浓度的升高表现为增高趋势,以50、100、500ng／ml最显著,与对照组之间有显著性差异（P〈0．05）。FN mRNA表达在50-100ng／ml组明显升高,与对照组间有显著性差异（P〈0．05）。mRNA表达趋势与上清中蛋白的表达具有一致性。结论高浓度bFGF刺激FN合成可能是bFGF促进创面愈合的重要原因。     

碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）相关结合蛋白

有四种不同类型的细胞表面或细胞外基质中的蛋白质分子在结合碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)、辅助其发挥生物功能活性方面起着重要的作用。它们是：（1）细胞膜上的具有酪氨酸激酶活性的FGF受体家族（FGFRs);（2）细胞外基质中的硫酸乙酰肝素蛋白多糖家族（HSPGs);（3）细胞内富含半胱氨酸的FGF受体（CFR）;（4）分泌型的FGF结合蛋白（FGF-BP）。本文试图从它们在bFGF生物功能发挥中可能起到的作用对它们进行简单综述。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)融合蛋白的高效表达及鉴定

碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）参与了许多细胞生长和分化的调控过程。本文采用重组ＤＮＡ技术在大肠杆菌中高效表达了人ｂＦＧＦ。首先将编码人ｂＦＧＦ基因克隆到ｐＸＴ表达载体中与其上游的一短Ｓ导肽共一阅读框架,ｂＦＧＦ基因的表达受强的Ｔ７启动子调控。采用ＢＬ２１（ＤＥ３）大肠杆菌作为宿主菌,用ＩＰＴＧ诱导ＢＬ２１（ＤＥ３）细菌合成的Ｔ７ＲＮＡ聚合酶,后者可催化高水平的ｂＦＧＦ基因表达,其ｂＦＧＦ产量可占总菌体蛋白的４２.５％。采用肝素Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ一步亲和层析法直接从诱导后的细菌裂解产物中得到纯化的重组人ｂＦＧＦ蛋白。经Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析证明该蛋白可被人ｂＦＧＦ特异性单克隆抗体所识别。进一步研究证明该蛋白具有刺激ＮＲ６Ｒ－３Ｔ３成纤维细胞增殖的生物学活性,并且这一活性可被人ｂＦＧＦ特异性中和抗体所中和。     

碱性成纤维生长因子(bFGF)对软骨生物学的影响

bFGF的生物学作用极其广泛,特别在促进创伤愈合与组织修复、组织再生起着十分重要的作用,它作为重要的有丝分裂促进因子,可传递发育的信号促进软骨细胞分裂,同时也是软骨细胞形态发生和分化的诱导因子,参与软骨的生长发育和组织损伤修复过程,特别是在软骨细胞的增殖分化起到重要作用,在解决软骨工程中面临的问题以及治疗骨关节炎等研究中具有的参考意义。本文对bFGF对软骨的分化、增殖、凋亡等不同生物学阶段的影响作用做一个综述。     

碱性成纤维生长因子（bFGF）对软骨生物学的影响

bFGF的生物学作用极其广泛,特别在促进创伤愈合与组织修复、组织再生起着十分重要的作用,它作为重要的有丝分裂促进因子,可传递发育的信号促进软骨细胞分裂,同时也是软骨细胞形态发生和分化的诱导因子,参与软骨的生长发育和组织损伤修复过程,特别是在软骨细胞的增殖分化起到重要作用,在解决软骨工程中面临的问题以及治疗骨关节炎等研究中具有的参考意义。本文对bFGF对软骨的分化、增殖、凋亡等不同生物学阶段的影响作用做一个综述。