以龙胆紫染硫酸酯多醣类的组织化学意义

甲、方法:1)固定于任何固定液皆可,但以酒精为最合适。石蜡切片,厚3微来。切片脱蜡,降酒精,至蒸馏水。2)以龙胆紫(gentian violet)水溶液1∶250,000或1∶1,280,000染色24小时(即0.25毫升0.1%龙胆紫贮存液加入100毫升蒸馏水内;或以0.1毫升0.1%龙胆紫液加入128毫升蒸馏水内)。3)滤纸吸干切片,然后在亚尼林二甲苯(anilinc-xylene)1∶1或1∶2液内脱色及脱水约5分钟(或稍长),直至紫色不再从切片上脱下为止。以二甲苯洗2—3次,用树胶封片。若染透明质酸(hyaluronic anid)可以甘油封片。     

小肠腺三色染色法

我们采用三色染色的方法对小肠肠腺细胞进行染色,杯状细胞、潘氏细胞、胞质和肠腺基膜呈现三种不同的颜色。细胞形态清晰,对比鲜艳,收到了理想效果。材料和方法1·材料人小肠为手术切除新鲜标本。10%甲醛固定24-48h,常规脱水,石蜡包埋。2·方法石蜡切片厚4-6μm,切片脱蜡,蒸馏水洗2m in,复合染液染3-5m in,70%乙醇分色,蒸馏水洗1m in,阿利新蓝染5m in,蒸馏水轻洗;0·2%光绿复染胞质、肠腺基膜20s;70%盐酸乙醇分色;梯度乙醇脱水;二甲苯透明;中性树胶封固。3·染液配制(1)复合染液:1%伊红(1g伊红,70%乙醇100m l)40m l,2%偶氮桃红(2g偶氮桃红甲…     

免疫组化ABC法和粘液组化AB／PAS法的套染技术

我们在前列腺癌的组化研究中,将免疫组化ABC法和常规粘液组化AB/PAS法结合起来,在同一张切片上进行套染和观察,比较特异性抗原——细胞角蛋白(cytokeratin)与中性粘液和酸性粘液的关系,取得了较为满意的结果,并说明套染切片的观察比分别在两张切片的染色观察更为准确和方便。一、材料和方法 1、组织材料取前列腺癌术后标本和正常人前列腺组织,Bouins液固定,常规脱水包埋,切成4μm厚的连续切片,多聚赖氨酸帖片。 2、抗体和主要试剂①多聚赖氨酸(Poly-L-Lysin Sigma Ccm.USA)     

怎样采集蛙卵

蛙卵是研究动物胚胎发育的好材料。教学上要观察蛙胚发育,首先要备有蛙卵。现根据青蛙和泽蛙的产卵习性,将采集方法介绍如下。     

盐生肉质草本植物海马齿叶片石蜡切片简易方法

海马齿是海边盐生肉质草本植物,由于叶片的肉质化,传统石蜡切片制作路线不能制作出结构完整,效果较好的切片.本实验以传统的石蜡切片方法为基础,在固定方法选择,脱水时间控制,包埋温度,染色等方面做了适合海马齿叶片特点的改良,固定方法采用戊二醛固定液固定24 h,并洗脱;脱水每级梯度时间为1 h,包埋温度在100℃,染色方法采用固绿染色法.结果表明:采用这种改良的方法可以制作出染色清晰,组织结构完整的海马齿叶片切片.这对其它肉质化植物的石蜡切片制作有着借鉴作用.     

石蜡包埋植物材料在去除石蜡之前的番红──快绿染色法

石蜡包埋植物材料在去除石蜡之前的番红──快绿染色法染色步骤：ＦＡＡ固定液固定植物材料,乙醇一正丁醇系列脱水,植物材料呈透明体状态被包埋,切片厚度１０微米。用蛋白或明胶粘片剂粘贴蜡带,切片放在４０～４５℃烫板上烘干。不脱蜡直接进行染色,过程如下：（１）...     

水稻籽粒胚乳的石蜡切片方法改良及其结构发育观察

以杂交水稻保持系‘岗46B’授粉后不同天数的籽粒为材料,利用PAS反应原理,通过对传统石蜡切片技术中材料固定、染色、脱水、浸蜡等环节的改进,即采用FAA和FPA相结合方式固定材料,先用热配法席夫(Schiff)试剂进行整染,再以稀释和氨水蓝化后的埃利希氏(Ehrlich)苏木精复染,中间以70%、83%、95%质量分数梯度乙醇进行脱水和复水处理,渐进式浸蜡与把握时间等实验环节,对水稻胚乳结构发育进行观察研究,结果授粉后第2~10天籽粒胚乳的石蜡切片完整,且染色分明,结构显示完整清晰。观察发现,随着授粉后天数推移,胚乳内部逐渐由游离胚乳核期向细胞化过渡,细胞层数增加并趋向充满子房,淀粉粒开始累积,胚乳细胞进一步增大。授粉后第5~10天是胚乳细胞淀粉粒从开始到大量累积的重要时期,同时胚乳细胞向无核化发展,不同部位胚乳细胞和淀粉粒的排列分布也逐渐表现出一定的差异。表明改良后的石蜡切片方法适合于授粉后第0~10天的水稻胚乳结构发育研究。     

半月板切片制作方法的改进

半月板主要由纤维软骨构成 ,具有一定的硬度 ,经二甲苯透明和高温石蜡浸蜡后更坚硬易碎 ,不易切出完整的组织切片。国内外虽有此项方法学研究的报导 ,但较复杂 ,我们就此在常规切片制作方法的基础上进行了改进研究。我们经过 4 0例试验 ,摸索出一种简易有效的半月板切片制作方法。1　材料及固定1.1　材料　选用成年大白兔的半月板。1.2　固定　组织块用 10 %中性甲醛或波氏液固定 3天以上。2　组织蜡块的制作2 .1　脱水　 70 %乙醇 6～ 2 4 h　 80 %乙醇 6～ 2 4 h　95%乙醇 1.5h　 10 0 %乙醇 1h。2 .2　氯仿透明 12～ 2 4 h。2 .3　浸蜡　…     

基于改良石蜡切片技术的飞蝗胚胎浆膜表皮发育模式及形态变化观察

【目的】通过优化飞蝗Locusta migratoria胚胎石蜡切片制备技术,研究飞蝗胚胎发育时期浆膜表皮变化规律。【方法】通过优化飞蝗胚胎固定前处理、洗涤、脱水和透明等步骤,改良胚胎期石蜡切片制备技术;制备飞蝗胚胎发育第3-10天的石蜡切片,通过HE染色观察浆膜表皮发育规律;通过制备飞蝗发育第6-8天从卵孔端至卵尾端的纵切切片,观察飞蝗胚胎转旋时期的形态变化。【结果】飞蝗胚胎期石蜡切片技术优化后的操作步骤为:固定前Na Cl O预处理和打孔、洗涤30min、脱水30 min和透明30 min。通过此方法可获得表皮结构完整且清晰的胚胎期组织切片。在30℃条件下,飞蝗胚胎浆膜表皮及几丁质沉积形成于胚胎发育的第5天,在第8天时开始降解。飞蝗胚胎的转旋发生在第6-7天,伴随着浆膜和浆膜表皮的形态变化。【结论】本研究优化了飞蝗胚胎石蜡切片制备步骤,揭示了飞蝗胚胎浆膜表皮及胚胎转旋的发育模式,为昆虫胚胎发育的研究提供了基础资料。     

生物组织石蜡切片的不脱蜡染色程序

石蜡切片法是生物学中应用最广泛的一种研究技术,沿用至今已一百余年,形成了一个基本固定的操作程序,为人们所普遍采用。常规的石蜡切片的染色,必须首先用二甲苯将石蜡溶去(即脱蜡),然后经下行的梯度酒精将切片下降至水(水化),用染料的水溶液进行染色;染色后又经上行梯度酒精逐级脱水,经二甲苯透明后用树胶封藏。此染色程序不仅手续较烦琐,而且切片在染色后脱水时容易褪色以及在此过程中组织里一些孤立分散的细胞如孢子、     

制作原肠期蛙胚切片的一点经验

一、前言制作蛙胚切片各个实验室在方法上都不甚相同,但是一般来说都不外乎两种方法:一种是借助于解剖显微镜放大的帮助来辨认蛙胚的方位进行埋蜡的工作。另一种是借助于明胶的透明修正明胶块以利辨认方位再进行石蜡包埋也就是双包埋的方法。由上述的方法看来实质上     

猪体细胞核移植重构胚的体外发育(英文)

以卵丘细胞为核供体细胞组成重构胚 ,卵裂率达到 5 6.7% ,发育至桑椹胚率达到1 1 .7% ,囊胚率为 6.7% ,显著高于成纤维细胞重构胚 (P <0 .0 5 )。本文还研究了卵母细胞的采集方法、激活程序和卵龄对卵丘细胞核移植重构胚体外发育的影响。以血清饥饿法将卵丘细胞诱导至G0 G1 期 ,抽吸法 解剖法采集卵母细胞 ,体外培养 3 3～ 44h ,将卵丘细胞放至去核卵母细胞的卵周隙中 ,重构胚以钙离子载体A2 3 81 7或电脉冲结合 6 DMAP激活处理 ,体外培养 6d。研究表明 ,卵母细胞采集方法、激活液中细胞松弛素 (CB)、激活程序并不影响重构胚的发育 (以卵龄 44h的卵母细胞为受体 ) ;而以电脉冲结合 6 DMAP激活处理能提高重构胚发育能力 (以卵龄 3 3h的卵母细胞为受体 ) (P <0 .0 5 )。本研究显示 ,以电脉冲结合 6 DMAP激活卵丘细胞重构胚 ,体外能发育至囊胚     

三种不同方法固定的石蜡切片中RNA的分析

研究在 10 %中性福尔马林、丙酮、甲醇 氯仿 冰醋酸 3种方法固定的石蜡切片中提取RNA的质量和数量 .取 2 5 0g体重的Wistar大鼠的肾脏 ,分别采用 10 %中性福尔马林、丙酮、甲醇 氯仿 冰醋酸 3种方法固定 ,石蜡包埋 ,H E染色 ;采用RNA裂解液、TRIZOL试剂 2种方法提取切片RNA ,逆转录为cDNA ,采用普通PCR和SYBRGREEN 1定量PCR分析RNA质量和数量 .结果表明 ,3种固定方法都可保持组织良好的结构和形态 ;采用 2种提取方法 ,均可经RT PCR扩增出 180bp大鼠磷酸甘油醛脱氢酶 (G3PDH)、5 6 5bpβ肌动蛋白 (β actin)、10 0bp纤溶酶系活化剂抑制物 1(PAI 1) ;但采用RNA裂解液时 ,比TRIZOL试剂可提取更多的RNA .     

硅烷化氨基树脂用作电镜标本的水溶性包埋介质

氨基树脂可以在存在水的情况下固化,从而可以避免生物样品中的脂类因接触脱水用的有机溶剂而造成的流失。掺入少量的低分子量聚乙二醇(PEG-400)可以降低甲醛—戊二醛—尿素合成的氨基树脂固化块的脆性。固化后的标本用双三甲基硅基乙酰氨(BSA)处理,可降低树脂的亲水性,提高超薄切片的质量。蛙卵经过戊二醛固定、锇酸再固定、单宁酸媒染和醋酸铀整体染色(G-O-T-U处理),氨基树脂包埋和硅烷化反应(APE-Si处理);切片后用醋酸铀和/或柠檬酸铅复染,可以见到卵黄粒脂蛋白的晶格和边缘区中的小“脂泡”结构,后者是常规的Epon 812包埋法难以清楚显示的。硅烷化氨基树脂可以作为研究脂类超微形态的一种电镜标本的水溶性包埋介质。     

激光微切割与定量PCR技术分析肾脏病理切片RNA

采用激光微切割与定量PCR技术,分析使用不同提取方法从不同固定方法固定的病理切片中提取的RNA.用70%乙醇、丙酮、甲醇、4%多聚甲醛固定肾脏冰冻切片,使用激光微切割技术切取肾小球,用硫氰酸胍方法(guanidinethiocyanatemethods,GTC)和Trizol试剂方法提取RNA,使用Taqman定量PCR方法分析比较各组RNA的量;选取丙酮固定的石蜡切片,使用激光微切割技术切取肾小球,采用RNA裂解液提取RNA,使用Taqman定量PCR方法,比较石蜡切片和冰冻切片中RNA含量.结果显示:提取沉淀性固定剂如乙醇、丙酮、甲醇固定的冰冻切片的RNA时,2种提取方法和3种固定方法对RNA含量的影响都无明显差异;但在提取4%多聚甲醛固定冰冻切片时,使用Trizol提取RNA含量明显高于使用GTC方法,且其含量与沉淀性固定剂固定的切片RNA含量无明显差异.石蜡切片中经激光微切割肾小球的RNA含量与冰冻切片经激光微切割肾小球的RNA含量无明显差异.结果提示:切片的固定方法和RNA的提取方法是影响切片RNA提取量的主要原因.     

木材制片技术的改进

木材制片是植物制片的一个分支。由于材料高度木质化,主要手段就是利用滑走切片机直接切取已经软化的木材,然后再进入漂白、染色、脱水、封片。对于质地松软的木材,有时也采用软化、石蜡或碳蜡包埋、石蜡切片的方法(在此不作介绍)。在国内出版的植物制片论著     

不同倍性香石竹杂交受精过程及胚胎发育研究

采用石蜡切片法对以四倍体香石竹品种‘紫蝴蝶’(2n=4x=60)为母本,单瓣中间材料‘NH6’(2n=2x=30)为父本杂交后受精过程及胚胎发育进行研究。结果表明:(1)授粉后17h,花粉管进入助细胞并释放内容物,精核进入极核细胞内,与二极核细胞融合形成初生胚乳核;授粉后1d,精核向卵核方向移动,贴伏于卵核核膜上;授粉后2d,形成合子及游离的胚乳核;随后,胚发育经过原胚、球形胚、心形胚、鱼雷形胚阶段。(2)杂交障碍发生在受精过程及胚胎发育的各个时期,表现为:精子与卵细胞不相融合或精子与二极核不相融合、合子未分裂或初生胚乳核未分裂及胚胎的败育。(3)胚败育虽能发生在原胚、球形胚、棒状形胚、三角形胚、心形胚、鱼雷形胚及子叶形胚阶段,但主要发生在球形胚阶段。     

18℃恒温下,石蜡切片制作过程的脱水透明最佳时间探索

目的:18℃恒温下,探索石蜡切片制作过程的脱水透明最佳时间,为组织切片技术提供可靠的理论依据,以使作出高质量的石蜡切片.方法:将固定好的肝、脾、心、肾组织按组织类型随机各分为六个实验组(n＝6),每组5块组织,制定六组脱水时间段(min):50、60、75、90、105、120,脱水采用的乙醇.每类组织自实验一至六组在浓度70％、80％、95％I、95％ II各级乙醇中的脱水时间,分别为所制定的六组脱水时间段,另外每组在100％Ⅰ和100％ Ⅱ的乙醇中脱水时间各为30 min,透明时间在二甲苯中肝、脾均为65 min;心、肾均为85 min.观察每类组织的各实验组在不同的时间段进行的脱水透明实验、将所得出的透明结果进行比对.实验制作重复五次,实验程序在18℃电热恒温箱中进行.结果:18℃恒温下,组织的最佳脱水时间在上行梯度各级浓度的乙醇中,肝、脾75 min;心、肾90 min,透明时间在二甲苯中肝、脾65 min;心、肾85 min.结论:在本实验的探索实践中体会到,好的脱水透明效果取决于组织块的大小、实验温度、脱水透明时间等,该研究得出的结果:”18℃恒温下,石蜡切片制作过程的脱水透明最佳时间”,有其有效性、可重复性、可行性,在石蜡切片技术领域可以推行应用.     

影响猪体细胞核移植重构胚体外发育的若干因素

以卵丘细胞为核供体细胞组成重构胚,卵裂率达到56.7%,发育至桑椹胚达11.7%、孵化囊胚率为6.7%,显著高于成纤维细胞组成的重构胚(p<0.05)。我们研究了卵母细胞的采集方法,激活方法和卵龄对卵丘细胞核移植重构胚体外发育的影响。以血清饥饿法将卵丘细胞诱导至GO或G1期,抽吸法/解剖法采集卵母细胞,体外培养33或44 h,将卵丘细胞置于去核卵母细胞的卵周隙中,重构胚以钙离子载体A23817或电脉冲结合6-DMAP激活处理,体外培养6天,结果表明,卵母细胞采集方法、激活液中细胞松弛素(CB)并不影响重构胚的发育(以卵龄44h的卵母细胞为受体);而以电脉冲结合6-DMAP激活处理能提高重构胚发育能力(以卵龄33 h的卵母细胞为受体)(p<0.05)。本研究显示,以电脉冲结合6-DMAP激活卵丘细胞重构胚,能在体外发育至囊胚     

蛙卵及蝌蚪的培育

当春未夏初之际,我们清晨沿着水田、池沼或水草叢生的沟渠边缘散出,常常有机会看到雌雄抱接着的青蛙。若不惊动它们,躲在远一点耐心等候,就不难获得剛受精不久的一大堆蛙卵。为了详细地观察蛙胚发育的各个阶段及其演变过程(外貌的观察或制成切片作显微镜观察),可迅速把它采集到实验室中进行人工培育。但若不得其法,往往在培育中很快就会死亡。其中最值得注意的是水質和水温以及氧的供应等问题。至于饲料只是后期所需要的;从受精卵发育一直到初(?)化的蝌蚪开日后数日间,完全依靠卵本身所(?)