拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata卵黄蛋白的分离纯化及性质

用蒸馏水沉淀法、Sephacryl S-300 High Resolution Hiprep 26/60葡聚糖凝胶层析、蛋白质电泳的方法提取和纯化了拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata的卵黄蛋白,并对其性质进行了分析。用蒸馏水沉淀法能得到卵黄蛋白粗提液,将得到的卵黄蛋白粗提液用Sephacryl S-300 High Resolution Hiprep 26/60凝胶柱过滤,可以得到纯化的卵黄蛋白。电泳结合不同的染色方法证明拟环纹豹蛛卵黄蛋白是一种糖脂复合蛋白,它由2个亚基组成,亚基的相对分子质量分别为80.1 k D和57.4 k D。     

四种杀虫剂对拟环纹豹蛛(Pardosa pseudoannulata)肠黏膜通透性的影响

采用异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-D)作为示踪物质,通过检测拟环纹豹蛛(Pardosa pseudoannulata)血液内的荧光素浓度,研究了两种生物源杀虫剂和两种化学源杀虫剂对拟环纹豹蛛肠黏膜通透性的影响.结果表明:4种杀虫剂处理后拟环纹豹蛛血液中的荧光素浓度远高于对照组,各个处理组拟环纹豹蛛血液样本中的荧光素浓度均与对照组存在极显著差异,可见4种杀虫剂均将对拟环纹豹蛛肠黏膜的屏障功能造成损伤,导致大分子物质易于通过;其中1.5%除虫菊素水乳剂三保奇花和Bt制剂强杀处理后拟环纹豹蛛中肠黏膜的通透性高于仿烟碱类化学杀虫剂吡虫啉处理组,差异达到显著水平,但与有机磷杀虫剂敌百虫处理组差异不显著.拟环纹豹蛛的肠黏膜组织亦具有一定的抗逆能力,接受单次杀虫剂处理后,存活的拟环纹豹蛛其肠黏膜的屏障功能约在6～10d内可以恢复.     

不同环境因素对拟环纹豹蛛捕食猎物效率的影响

利用农田天敌与害虫的捕食关系进行生态防治的控虫方式有利于环境保护和食品安全。蜘蛛是农业生态系统中一类主要的捕食性天敌,而环境因素直接影响蜘蛛的捕食效率。通过采用单因素分析法和三因素三水平正交设计法,从光照强度、光照颜色、环境温度3个宏观角度对影响拟环纹豹蛛捕食效率的环境因素进行了分析。研究结果显示,拟环纹豹蛛捕食在环境因素组合为光照强度15 lx、环境颜色绿色、环境温度27℃时,捕食效率最高。     

黑腹狼蛛和拟环纹豹蛛各龄期的比较

黑腹狼蛛和拟环纹豹蛛为我国农田的重要害虫天敌。两种蜘蛛成蛛外形较易区别,但其各龄幼蛛形态变化较小,容易混淆。本文将这两种蜘蛛幼蛛各龄形态特征进行了比较。     

拟环纹豹蛛的视觉距离和颜色选择

为了探明拟环纹豹蛛（Pardosa pseudoannulata）的视觉距离与环境颜色选择情况,通过采用死果蝇(Drosophila melanogaster)和拟环纹豹蛛为试验材料,自制试验设备,分别测定了拟环纹豹蛛的视觉距离（3 cm、4 cm、5 cm、6 cm、7 cm）和其对红、橙、黄、绿颜色的选择。第一组试验中,在拟环纹豹蛛饥饿的情况下,观察记录其对不同距离下果蝇的选择停留时间,以此来确定它们的视觉距离。第二组试验中,观察记录拟环纹豹蛛对不同颜色的选择停留时间,以此来确定它们的环境颜色选择情况。第一组试验结果表明,拟环纹豹蛛在视觉上可以感知距离,它们的视觉对于3cm,4cm,5cm,6cm这4个距离的果蝇都具有敏感性。拟环纹豹蛛对距离3 cm和距离4 cm的果蝇的视觉敏感性相近且最好,对距离5 cm和距离6 cm的果蝇仍具有视觉敏感性,且敏感性相近,但对距离5cm比距离4cm的果蝇的偏爱选择指数明显下降（P<0.05）,说明敏感性显著下降,对距离7 cm以上果蝇的视觉感知几乎不存在。通过拟环纹豹蛛选择停留在有果蝇处的标准曲线y=-9.6770x 118.74,R2=0.8378和选择停留在无果蝇处的标准曲线y=9.6750x-18.729,R2=0.8377,可知随着果蝇距离的增加,拟环纹豹蛛视觉的感知性逐渐减弱,甚至消失,说明果蝇的距离与拟环纹豹蛛视觉的敏感性呈负相关的关系。第二组拟环纹豹蛛对颜色选择的试验中,通过计算出拟环纹豹蛛对4种颜色的偏爱选择指数,即红色为35.40%±1.60%,绿色36.03%±1.60%,黄色18.01%±1.60%,橙色10.56%±1.60%,得出拟环纹豹蛛对黄色和橙色的敏感性显著低于对红色和绿色的敏感性（P<0.05）,它们对红色和绿色最敏感,说明拟环纹豹蛛对不同波长的光色敏感性存在差异。     

拟环纹豹蛛的生物生态学研究

运用田间观察和室内外饲养相结合的方法,对稻田蜘蛛优势种拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata的生物生态学特性进行了研究。拟环纹豹蛛在湘西北1年发生2～3代,第3代不完整,以第2代历期最短,第3代（越冬代）历期最长;以成蛛、亚成蛛或幼蛛越冬,其分布图式为聚集分布;4月下旬即由田埂向稻田内迁移,在水稻生育期有3次数量高峰; 属游猎型蜘蛛,可步行在水稻、水面、陆地等处捕食飞虱、叶蝉等多种目标害虫; 受惊时潜入水中或潜伏。雌雄蛛均可多次交配,雌蛛一生最多可产卵5次,实验种群卵囊含卵量76～337粒,平均156粒。孵化的幼蛛,先群集在雌蛛背面,3～5天后开始扩散,6～7天扩散到高峰。幼蛛期47～158天;成蛛期121～236天,雌蛛较雄蛛长21～62天。性比除第2代外的各代均为雄性多于雌性。本文详细记述了拟环纹豹蛛的求偶与交配行为,产卵与护卵习性,孵化与携幼行为,幼蛛生长、蜕皮、各龄期形态特征及耐饥、耐旱能力等。     

拟环纹豹蛛附肢体毛感受器的扫描电镜观察

通过对拟环纹豹蛛(Pardosa pseudoannulata)附肢体毛(触毛、听毛、味觉感觉毛)的扫描电子显微镜观察,发现拟环纹豹蛛的触毛与体表形成的角度为锐角,触毛粗大,毛干较挺立,周围有绒毛环绕,触毛主要分布在蜘蛛体触肢的跗节、胫节和步足的跗节、胫节、端部处,其中第一步足分布最多,其数量较听毛和化学感觉毛多。拟环纹豹蛛的听毛细而长,基本垂直于表皮,毛囊深窝有褶皱,听毛主要分布于触肢和第四步足的胫节上,其余腿节分布较少,不同部位的听毛在形态、长度上没有太大的差别。拟环纹豹蛛的味觉感觉毛基部四周有微微隆起的圆形毛囊,味觉感觉毛大于听毛又小于触毛,四周被绒毛环绕,主要分布于蜘蛛的第一步足和第二步足的跗节胫节处,在触肢和螯肢也有少量分布。     

2种杀虫剂对拟环纹豹蛛的毒力测定

采用浸渍法测定了2种杀虫剂对化学防治田（化防田）和生物防治田（生防田）中的拟环纹豹蛛Pardosa　pseudoannulata田间种群的毒力。结果表明,甲胺磷对拟环纹豹蛛杀伤较大,但锐劲特在高剂量下两地种群的死亡率也较高。甲胺磷对拟环纹豹蛛的毒力回归方程和LC50分别为：化防田y=1.387 7 x＋0.837 4, 999.09 mg/L,生防田y=1.778 4 x＋0.880 4, 207.23 mg/L;;锐劲特对拟环纹豹蛛的毒力回归方程和LC50分别为：化防田y=2．0215x＋0．0620,277．22mg／L,生防田y=2．0948x＋0．1568,205．11mg／L。锐劲特对两地稻田蜘蛛的毒力均大于甲胺磷,因此水稻生产中要合理使用农药,或与其他杀虫剂混配使用以达到最大限度的保护天敌。     

拟环纹豹蛛对白背飞虱的嗅觉反应

采用视觉屏蔽法和Y型嗅觉仪法研究了拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata.雌性成虫对水稻害虫白背飞虱Sogatella furcifera嗅觉反应.在视觉屏蔽的条件下,拟环纹豹蛛对被刺死猎物的捕食成功率为78.95%,高于没有视觉屏蔽蜘蛛的捕食成功率(68.18%),但2者间差异不显著;而在Y型嗅觉仪中,34.38%拟环纹豹蛛雌性成虫能正确选择猎物的方向,显著高于错误的选择(6.25%).因此,拟环纹豹蛛能依靠嗅觉正确判断猎物的方向而进行捕食活动.     

拟环纹豹蛛产卵前后卵巢组织学及酯酶同工酶的比较研究

利用解剖学和组织切片技术,对拟环纹豹蛛产卵前后卵细胞和卵巢发育的组织学进行了研究。根据细胞核以及核仁的形态及卵黄积累等情况,将卵细胞的发育分成4个时期：卵原细胞、卵黄合成期的卵母细胞、成熟前期和成熟期。观察发现,拟环纹豹蛛的卵巢南若干向卵巢腔内突起的卵巢小体构成,卵巢发育随着卵细胞的发育有一定的规律性。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法研究了产卵前后和未成熟不同时期的卵巢酯酶同工酶,结果发现同工酶存在一定差异。     

洱海周边2种寄生蜂对拟环纹豹蛛和星豹蛛卵孵化的影响

为探讨Hidryta sp．和Idris sp．对云南洱海周边拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata（Boes．＆Str．）和星豹蛛Pastvigera C．L．Koch卵孵化的影响,对具卵囊的拟环纹豹蛛和星豹蛛进行为期1年的野外采集和室内卵囊孵化观察,发现Hidryta sp．寄生蜘蛛卵囊后,每个卵囊内仅羽化出1只蜂,不再有幼蛛孵化出;而被Idris sp．寄生后每个卵囊羽化出一至数十只蜂,仍有幼蛛孵化出。比较未被寄生与被寄生蜘蛛卵囊的孵化量显示,拟环纹豹蛛未被寄生与被Idrissp．寄生后的孵化量间无显著差异（P〉0．05）;星豹蛛未被寄生与被Idris sp．寄生后的孵化量问存在显著差异（P〈0．01）。比较单位个体孵化量显示,Hidrytasp．对拟环纹豹蛛卵孵化的影响程度大于Idris sp．;而Hidrytasp．对星豹蛛卵孵化的影响程度小于Idris sp．。     

拟环纹豹蛛雄蛛触肢上黑白相间毛饰物的功能

狼蛛科雄蛛附肢上多样化的饰装往往与求偶行为相偶联,这些特殊的饰装通常被认为是雌性选择的结果。拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata,属狼蛛科豹蛛属,雄蛛触肢胫节密被白毛,跗舟密被黑毛,具有典型的性二型现象;同时,只有成熟的雄蛛才展现触肢黑白相间的毛饰物。推测拟环纹豹蛛雄蛛触肢这种黑白相间的毛饰物可能在物种识别中具重要作用。在室内我们拟通过涂抹操作对拟环纹豹蛛雄蛛触肢黑白相间毛饰物的功能进行分析。实验分为4组,分别是对照组(A组,雄蛛不做任何处理)、雄蛛触肢白色胫节全部涂成黑色(B组)、雄蛛触肢黑色跗舟全部涂成白色(C组)和雄蛛触肢的黑色跗舟被涂成黑色(D组),然后采用雌雄配对进行求偶交配行为测定。实验结果表明,B组雄蛛的交配成功率显著低于A、C和D组的雄蛛,而后3组雄蛛的交配成功率无显著差异。相反,B组雄蛛被雌蛛相食百分率显著高于其它3组。可见拟环纹豹蛛雄蛛触肢上黑白相间毛饰物,尤其是其胫节上的白色饰物在雌蛛种间识别中起重要作用。     

洱海周边拟环纹豹蛛和星豹蛛卵袋中寄生蜂种类及其寄主选择

结合野外调查及室内实验观察,对云南洱海周边地区的拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata(Boesenberg et Strand,1906)和星豹蛛Pardosa astrigera L.Koch,1878卵袋中寄生蜂种类及其寄主的选择性作了为期1年的调查研究.共发现了2种寄生蜂,即Idiolispa sp.和Idris sp.,两种寄生蜂均可不同程度地寄生在两种蜘蛛的卵袋里.Idiolispa sp.偏好寄生拟环纹豹蛛的卵袋,而Idris sp.则不具寄生偏好性,两种蜘蛛均是其适合的寄主.分析了Idiolispa sp.产生寄主选择偏好性的原因.     

拟环纹豹蛛不同地理种群遗传多样性的AFLP标记研究

为查明拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata不同地理种群的遗传多样性机制,应用AFLP技术对6个拟环纹豹蛛地理种群的遗传多样性进行了研究分析。8对引物组合扩增出1 038个AFLP条带,其中多态性条带占86.622%,全部个体显示了各自独特的AFLP图谱。AFLP标记的遗传多样性分析结果表明： 拟环纹豹蛛无论在物种水平(P=86.62%,H=0.2622,I=0.3101),还是在种群水平（P=73.0%,H=0.2155,I=0.2554）都表现出较高的遗传多样性。其中湖南长沙雷锋镇种群内遗传变异最大,云南高黎贡山福贡种群内遗传变异最小,华南北部（湖南、湖北、江西）地区拟环纹豹蛛遗传多样性明显高于华南南部（云南、海南）种群。据种群变异来源分析,有35.77%的遗传变异来自种群间,64.23%的变异来源于种群内（N_m=0.898）,不同地理种群显示出一定的遗传分化。分析认为海拔是影响拟环纹豹蛛遗传分化的重要因素,这为进一步明确我国稻田狼蛛优势种群在农药胁迫下的遗传适应性机制提供了实验依据。     

应用单克隆抗体评价拟环纹豹蛛对褐飞虱的控制作用

应用褐飞虱的单克隆抗体 4 B8研究了 1999年浙江大学华家池校区农场汕优 6 3单季晚稻田中拟环纹豹蛛对褐飞虱的捕食作用。采用盘拍法的调查结果表明 ,褐飞虱、拟环纹豹蛛种群数量高峰期均在水稻生长后期 (9月中旬 ) ,最大种群密度分别为12 6头 /丛和 1.83头 /丛。对每次捕获的每头拟环纹豹蛛样品的抗体夹心 EL ISA检测结果表明 ,拟环纹豹蛛对褐飞虱单克隆抗体的阳性反应率与田间褐飞虱的生物量及拟环纹豹蛛对褐飞虱的占有量显著相关。定量评估结果表明 ,在此密度条件下 ,拟环纹豹蛛对褐飞虱的最大捕食率仅为 2 .2 8%。拟环纹豹蛛对褐飞虱的平均捕食量、总捕食量和捕食率与田间褐飞虱的生物量显著相关。总捕食量、捕食率与拟环纹豹蛛种群密度极显著相关     

Cry1Ab蛋白对拟环纹豹蛛胚胎发育过程中形态和化学物质含量变化的影响

利用稻田蜘蛛优势种拟环纹豹蛛为研究对象,检测Cry1Ab蛋白在拟环纹豹蛛卵囊内的含量及Cry1Ab蛋白对拟环纹豹蛛胚胎发育过程中形态特征的变化、化学物质含量和卵粒内4种保护酶活性的影响。结果表明：在胚胎发育过程中,卵粒中Cry1Ab蛋白含量随发育时间延长而减少,通过对卵粒中的化学物质的测定,发现蛋白质含量水平对照组要显著高于实验组（P〈0.05）,糖和脂肪含量对照组和实验组之间无显著差异。卵粒内超氧化物歧化酶（SOD）、乙酰胆碱酯酶（AchE）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）4种酶活力除了GSH-Px酶活力实验组高于对照组外,其余3种酶活力均低于对照组。通过石蜡切片和液体石蜡透明观察,实验组较对照组胚胎发育历期延长。该研究证明在胚胎发育时期Cry1Ab蛋白影响了卵粒内SOD、AchE、GSH-Px和CAT酶的活力,且Cry1Ab蛋白对拟环纹豹蛛的胚胎发育产生了一定程度的影响。     

田间施药对拟环纹豹蛛羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶分布及活性的影响

利用紫外分光光度法,对化学防治田(化防田)和生物防治田(生防田)中的拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata体内乙酰胆碱酯酶(AChE)和羧酸酯酶(CarE)的分布及其活性进行了比较研究。结果表明,生防田拟环纹豹蛛身体各分部的AChE活性[包括头胸部1.251 nmol/(mg·min)、腹部0.467 nmol/(mg·min)和附肢0.760 nmol/(mg·min)]均高于化防田蜘蛛[包括头胸部0.895 nmol/(mg·min)、腹部0.445 nmol/(mg·min)和附肢0.724 nmol/(mg·min)],而生防田豹蛛的CarE活性[包括头胸部0.122 nmol/(mg·min)、腹部0.593 nmol/(mg·min)和附肢0.073 nmol/(mg·min)]均低于化防田蜘蛛[包括头胸部0.158 nmol/(mg·min)、腹部0.708 nmol/(mg·min)和附肢0.115 nmol/(mg·min)],说明化防田拟环纹豹蛛产生了一定程度的抗药性。拟环纹豹蛛体内的AChE主要集中在头胸部,CarE主要集中在腹部,这种分布特征是与其抗药性机制相适应的,并对其抗药性机制的形成做出了初步解释。这些结果也提示,拟环纹豹蛛对甲胺磷等农药的抗性不能在短期内形成,必须经历水稻→害虫→蜘蛛的较长的适应演化过程。     

CrylAb蛋白在拟环纹豹蛛体内的富集及对其体内酶活性的影响

用Cry1Ab蛋白处理的果蝇喂养拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata,在第1d、3d、5d、7d、9d、11d用酶联免疫(ELISA)检测技术测定实验组和对照组拟环纹豹蛛体内Cry1Ab蛋白含量,运用紫外分光光度法检测拟环纹豹蛛体内超氧化物歧化酶( SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性,探讨拟环纹豹蛛体内Cry1Ab蛋白的富集作用与其体内3种酶活性的关系.结果表明,从第1d至第7 d Cry1Ab蛋白在拟环纹豹蛛体内均具富集作用(p＜0 05),到第7d的时候达到最高值,达极显著差异(p＜0.01),然后逐渐降低,但仍显著高于对照(p＜0.05).SOD酶活性总体趋势是降低的,在第7d达到最低;用Cry1Ab蛋白处理拟环纹豹蛛后其体内的AChE和GSH-Px酶活性随饲养时间的延长而增加,并均高于对照组(p＜0.05).该研究证明Cry1Ab蛋白在拟环纹豹蛛体内具有富集效应,并且其体内Cry1Ab蛋白对其体内GSH-Px、AChE具有一定诱导作用,对SOD酶具有一定程度的抑制作用.     

甲胺磷对拟环纹豹蛛中肠蛋白消化酶活性影响的压电传感监测（英文）

利用压电体声波阻抗分析法实时动态监测了拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata中肠蛋白消化酶对酪蛋白的酶促水解过程及不同浓度梯度（0.008%、0.016%、0.024%和0.032%）的甲胺磷农药对酶活性的影响,并用紫外分光光度法进行了验证。结果表明,合适低剂量(0.008%)的甲胺磷农药可显著地增强拟环纹豹蛛蛋白消化酶的活性,较高剂量(0.032%)的农药却显著抑制蛋白消化酶的活性,且水解过程稳态频移值可准确地反映酶活性与农药浓度的关系。本工作为研究低剂量农药增强蜘蛛控虫力的机理及酶活性的快速检测提供了一种可行的新方法。     

低剂量农药作用下拟环纹豹蛛对褐飞虱的功能反应及搜寻行为

在室内研究了低剂量农药作用下拟环纹豹蛛对褐飞虱的功能反应及搜寻行为。结果表明,拟环纹豹蛛对褐飞虱的功能反应均符合Holling Ⅱ模型,且在最适的低剂量农药(V_药∶V_水为2∶5 000甲胺磷,12∶5 000杀虫双和1∶20烯丙菊酯)刺激下,蜘蛛捕食褐飞虱的数量是最多的,蜘蛛用于对1头褐飞虱进行制服和取食等活动所需的时间（处理猎物时间,Th）短,仅分别为未经农药处理的蜘蛛所需时间的0.45、0.32和0.35倍;而施用较高剂量8∶5 000的甲胺磷、28∶5 000的杀虫双和6∶20的烯丙菊酯的蜘蛛,处理猎物时间长得多,依次是经最适低剂量3种农药作用的蜘蛛所用时间的9.70、13.60和13.62倍。拟环纹豹蛛在稻株上的搜寻行为属非随机搜索型,在相同的低剂量农药作用下,蜘蛛的搜寻效应随飞虱密度的增加而下降;但在相同的猎物密度下,蜘蛛的搜寻效应与使用的农药浓度有密切的关系,在上述最适低剂量农药作用下,豹蛛对猎物的寻找效应最佳,其在稻株上的总滞留时间依次是未施药情形的1.56、1.49、1.48倍,总搜寻距离依次是未施药情形的1.36、1.42、1.39倍。据此,进一步证实了低剂量农药增强了稻田蜘蛛的控虫效能和对害虫的相对活力。