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为建立鸭乙型肝炎病毒LJ-76的转染细胞系,将LJ-76病毒DNA插入到pUC19的EcoRⅠ位点上,分离得到含有双拷贝LJ-76DNA的重组质粒.通过磷酸钙沉淀方法,将经CsCl等密度离心纯化的LJ-76DNA双体导入到人肝癌细胞BEL7402中.收集转染细胞的培养液进行蔗糖密度梯度离心,所得沉淀经检测发现含有LJ-76DNA并具有特异性DHBV内源性DNA多聚酶活性;对上述样品通过DotEIA检测DHBV核心抗原及表面抗原结果为阳性.Southernblot分析表明转染细胞内存在病毒DNA复制中间体cccDNA、ssDNA和rcDNA,而cccDNA被认为是复制活动较为活跃的标志.电镜观察转染细胞的上清发现有病毒颗粒的存在. 相似文献
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为建立鸭乙型肝炎病毒LJ-76的转染细胞系,将LJ-76病毒DNA插入到pUC19的EcoR1位点上,分离得到含双拷贝LJ-76DNA的重组质粒。通过磷酸钙沉淀方法,将经CsCl等密度离心纯化的LJ-76DNA双体导入到人肝癌细胞BEL7402中。收集转染细胞的培养液进行蔗糖密度离心,所得沉淀经检测发现含有LJ-76DNA并具有特异性DHBV内源性DNA多聚酶活性. 相似文献
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荧光素标记JH12.6探针进行的人DNA指纹图分析 总被引:7,自引:1,他引:7
采用荧光素标记和鲁米诺化学发光技术,建立了DNA指纹图的分析方法。用该方法标记JH12.6探针获得了清晰易读、分辨率高的人DNA指纹图。经对云南省78名无关个体进行DNA指纹图分析,计算出无关个体的相关机率为7.4×10(-11),平均等位基因频率为0.09。比较同位素(32)P标记方法表明,用荧光素标记JH12.6探针进行人DNA指纹图分析,具有简便、快速、安全、经济的特点,可在法医学鉴定及其它领域里推广应用。 相似文献
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《基因调节:反义RNA和DNA生物学》《基因调节:反义RNA和DNA生物学,(Generesulation:biologyofantisenseRNAandDNA)由RobertP.Erickson和JonathanG.Izant编著,1992年雷文... 相似文献
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RNA研究的展望 总被引:2,自引:1,他引:1
朱圣庚 《Acta biochimica et biophysica Sinica》1998,30(6):540-543
无论是理论上的启示或是方法学上的借鉴,RNA的研究常常得益于DNA的研究。每当DNA研究取得重大突破之后,总会给RNA研究带来一个新的大发展。1953年J.D.Watson和F.H.C.Crick提出DNA双螺旋结构学说,为分子生物学发展奠定了基础,... 相似文献
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用抗原捕获/多聚酶链反应(AC/PCR)对戊型肝炎病毒(HEV)细胞分离株MJ90和R25基因组的部分核苷酸序列进行扩增,获得了与HEV缅甸株ET1·1相同的cDNA扩增带。该cDNA扩增带纯化后用双脱氧核苷酸DNA链末端终止法测序,CJ90、R25株的核苷酸和氨基酸序列与ET1·1克隆的同源性分别为99.6%、100%和99%、99%,从而证明MJ90和R25毒株为HEV. 相似文献
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我们已往的工作已经确定在重组质粒pIJM9中,生米卡链霉菌来源的4.16kb插入DNA片段带有丙酰化酶基因,为了进一步确定该基因在4.16kb插入片段中的位置,我们以BamHI对pIJM9进行酶切,在此基础上进行缺失重组亚克隆,在所获得的转化子中,No.5转化子含重组质粒pIJM95,分子量为5.0kb,插入DNA片段为0.53kb,以No.5转化子对螺旋霉素进行生物转化实验,其转化产物经薄层层析 相似文献
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拟南芥AtJ3基因的克隆和分析 总被引:2,自引:0,他引:2
克隆并分析了拟南芥(Arabidopsisthaliana(L.)Heynh.)AtJ3的cDNA核苷酸序列,并证明其翻译产物与E.coli的DnaJ蛋白高度同源。AtJ3蛋白分子中具有全部这类蛋白的典型特征包括J结构域(domain)、G或GF结构域、富含半胱氨酸的锌指结构域,C末端的CAQQ是一个蛋白法尼基化信号。用AtJ3的cDNA序列末端非翻译区作探针,从拟南芥基因组文库中分离获得AtJ3基因。基因序列分析表明该基因是由被5个内含子分隔的6个外显子组成。根据Southern杂交分析,AtJ3基因为单拷贝基因。Northern分析结果表明,AtJ3在子叶、叶、根、花及长角果中都表达。35℃的热激能增加叶中AtJ3的mRNA表达 相似文献
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用荧光原位杂交技术构建高分辨率的DNA物理图谱 总被引:14,自引:1,他引:13
钟筱波 Paul F. Fransz J.Hans de Jong Pim ZabelZHONG Xiao-Bo Paul F. Fransz J.Hans de Jong Pim Zabel 《遗传》1997,19(3):44-48
用荧光原位杂交技术构建高分辨率的DNA物理图谱钟筱波PaulF.FranszJ.HansdeJongPimZabel(荷兰瓦赫宁根农业大学分子生物学系)HighResolutionPhysicalMappingbyFluorescenceinsitu... 相似文献
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《DNA损伤与修复,(第2卷):高级真核生物的DNA修复》(DNADamageandRepair,VolumeII:DNARepairinHigherEukaryotes)由JacA.Nickoloff和MerlF.Hoekstra编著,1998年HumanaPress出版,639页。DNA损伤与修复提供了在广泛多样化生物体范围内DNA修复主要方面的重要和简洁评论。第2卷:高级真核生物的DNA修复集中于哺乳动物系统、人体遗传学疾病和癌症,强调最近5年发展的重要过程。主要题目:紫外线和X线的修复,… 相似文献
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探讨rDNA ITS区作为果蝇Drosophila nasuta分子系统发育研究的价值 总被引:3,自引:0,他引:3
测定了果蝇nasuta亚群7个分类元和外群D.immigrans的核糖体基因转录间隔区(ITS,interanscribed spacer),包括5.8SrDNA和2SrDNA长约1.1kb的DNA片段序列。结果表明:D.pallidifrons、Taxon I、Taxon J享有共同的序列;D.albomicans则与D.s.neonasuta共享1个序列。序列之间存在少量的插入缺失和碱基替代。 相似文献
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RAPD分析氮离子注入甜菊种子后的幼苗基因组DNA变异 总被引:17,自引:2,他引:17
应用RAPD 技术检测经低能氮离子注入甜菊纯系种子引起的幼苗基因组DNA 变异。筛选出OPJ系列中的15 种引物对实验及对照基因组DNA 进行了PCR 扩增,共获扩增片段103 条,分子量在0.3 - 3kb 之间,其中5 种引物OPJ- 1 ,7 ,9,11 ,12 扩增出差异片段12 条。结果表明,低能氮离子注入甜菊种子可引起体内基因组DNA 发生突变;RAPD 技术是检测基因组DNA 发生诱变的一种简便、有效方法。本文同时探讨了离子强度和Tag DNA 聚合酶用量对甜菊RAPD 分析结果的影响,以及氮离子注入诱变效应的可能机制。 相似文献
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应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从HCV感染者血清中扩增编码HCV病毒蛋白酶的NS2-NS3cDNA片段,在其5′和3′端分别引入EcoRⅠ和XbaⅠ限制性内切酶位点,定向克隆至真核表达载体pcDNA3,构建重组载体pcDNA-NS23,重组表达载体经限制性内切酶消化鉴定.用SP6和T7通用引物对目的基因片断进行序列分析.序列同源性分析结果表明,与HCV-J、HC-C2有高度的同源性,与HCV-1、HCV-J6、HCV-J8同源性差,提示所克隆的基因属HCVⅡ型.该区内重要的功能位点如Zn2+依赖性金属蛋白酶催化中心、丝氨酸蛋白酶催化中心等均高度保守 相似文献
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具有真细菌基因启动子活性的盐生盐杆菌质粒DNA片段 总被引:4,自引:1,他引:4
利用大肠杆菌启动子探测质粒pKK232-8为载体、用两组限制性内切酶BamHI-SalI和HindⅢ-SalI分别消化盐生盐杆菌J7(Halobacteriumhalobium)的质粒pHH205,在体外进行重组,转化E.coliHB101感受态细胞,在含氨苄青霉素和氯霉素的选择平板上筛选转化子,并从随机挑选的20株转化子中,获得抗氯霉素水平达到110μg/ml的转化子T1和T2,所含重组质粒分别被命名为pJH和pJB。经限制性酶切分析及杂交分析表明,pJH质粒上插入了一段来源于pHH205质粒的DNA片段,其大小为800bp左右。通过重新转化实验进一步表明,该DNA片段在大肠杆菌中具有启动子功能,从而证明,在古细菌(盐生盐杆菌)的质粒DNA中存在具有真细菌(大肠杆菌)基因启动子活性的DNA片段。 相似文献
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杂合质粒pIJ8310是链霉菌低拷贝质粒pIJ9221携带了10.8kb来自变铅青链霉菌JT46菌株,编码对噬菌体ΦHAU3抗性的DNA片段。已知Tn4560插到该克隆中3kb的EcoRI或3.3kb的BamHI片段(这两个片段之间有2.5kb的重叠区)上,中断了ΦHAU3抗性基因的表达。已将3.0kb的BcoAI片段分别以两种不同的取向克隆到pBluescriptSK(+)上。核苷酸序列分析揭示出一个1.3kb的ORF的存在,其所编码的478个氨基酸组成的蛋白与λ噬菌体的ea59基因所编码的氨基酸序列显示了高度的同源性,其氨基酸序列的同一性高达37%,相似性达58%,而λ噬菌体的ea59基因是编码赖ATP和单键DNA的核酸内切酶I的,该区域与λ的复制无关。此外,这段具有高度同源性的DNA区域的G+C%只有60%,低于变铅青霉菌DNAG+C%的平均值(74%)。 相似文献
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以质粒pIJ486为载体,将来源于质粒pHT1的肿瘤坏死坏因子(TNF-a)cDNA克隆至变铅青链霉菌,以新霉素(30μg/ml)为选择标记,获得了数百转化子,实验表明No.7转化子s.lividans TK54-HT所含重组质粒pIJT7已克隆有TNFcDNA。L929细胞毒实验结果表明该转化子TNF表达量可达10^8活性单位/升以上,中和实验确证其表达产物为人TNF-a,SDS-PAGE表明克 相似文献
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双探针原位杂交揭示稻属BB,CC和EE基因组之间的分化 总被引:1,自引:0,他引:1
利用双探针原位要交技术,揭示了稻属Oryza officinalis复合体中BB、CC和EE基因组之间的分化。以标记的BB基因组(来自二倍体的O.punctataKotechy ex Steud.)的总DNA为探针,同BBCC基因组(O.minutaJ.S.Presl.et.C.B.Presel)的中期染色体杂交,结果表明,BB基因组的DNA探针同与四倍体O.minuta中的BB基因组的染色体之间 相似文献
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两种DNA断裂损伤检测方法敏感性的比较 总被引:4,自引:0,他引:4
两种DNA断裂损伤检测方法敏感性的比较马爱国韩秀霞刘四朝①(山东省青岛医学院营养学系,青岛266021)AndrewR.ColinsSusanJ.Duthie(英国Rowet研究所)ComparisonofTwoMethodsfortheAnalys... 相似文献
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1 Source ThiscDNAinsertisfromasinglecloneofpollencDNAlibraryofJapanesePear(Pyruspyri folia) .2 Nameanddescription ThecDNA ( pdn1 )isco 相似文献