肺炎球菌疫苗进展

人们对肺炎球菌的认识始于19世纪80年代初期,1911年开始用肺炎球菌疫苗来预防肺炎球菌性疾病。迄今已发现90余个不同的肺炎球菌的功型,但仅有少数是引起疾病的。本文对肺炎球菌疫苗的研究进展作一简要综述,主要包括全菌体疫苗,荚膜多糖疫苗,以及荚膜多糖－蛋白结合疫苗的研究进展概况。     

呼吸道合胞病毒G蛋白基因片段的克隆及高效表达

呼吸道合胞病毒(RSV)感染遍布全球,并可导致严重的疾病,但目前尚无成功的疫苗问世。为寻求可能用于RSV疫苗研制的重组蛋白抗原,我们在克隆RSV-A全长G蛋白基因的基础上,构建了多种共表达载体蛋白和G蛋白片段的表达载体,并从中筛选出能以可溶形式高效表达抗原蛋白的原核表达体系。通过亲和层析纯化了重组蛋白抗原DsbA-G101,将其免疫Balb／c小鼠后获得了相应的抗血清。经ELISA检测表明DsbA-G101具有良好的免疫原性。基于本研究所构建的系列表达载体,可以比较不同的G蛋白片段免疫原性的强弱及载体蛋白的优劣,从中发现最佳的RSV抗原蛋白。     

人精子膜蛋白片段在沙门氏菌中的表达——一种制备抗生育疫苗的途径

合成编码一种人精子膜蛋白ＹＷＫ－Ⅱ胞外区的一段多肽片段的双链寡核苷酸链,ＨＳＤ－２ａ。用平端连接的方法将其插入到沙门氏菌鞭毛基因ｆｌｉＣ（ｄ）的抗原表位ＩＶ高变区ＥｃｏＲＶ位点,构建了重组质粒ｐＬＳ４０８－Ｈ１。重组基因在鞭毛负性ａｒｏＡ基因缺失的无致病性沙门氏菌Ｓ．ｄｕｂｌｉｎ ＳＬ５９２８疫苗菌株中表达。经ＥＬＩＳＡ、电镜免疫胶体金法检测,表明ＨＳＤ－２ａ编码的多肽片段成功地在沙门氏菌鞭毛表面     

幽门螺杆菌表面抗原免疫保护作用的体外与活体研究

目的：调查幽门螺杆菌（Hp)几种表面蛋白体外对T细胞增殖的影响和在小鼠体内的免疫保护作用。方法：评价Hp全菌抗原、尿原酶（Urease)、黏附素（hpaA)、外膜蛋白25（Hop25)和38（Hop38)对人外周血T细胞及小鼠CD4^ T细胞增殖的影响;与佐剂合用,评价上述重组蛋白对小鼠Hp感染的免疫预防作用。结果：Urease和Hop25可刺激人及鼠T细胞增殖,hapA只能刺激Hp^ PBL增殖,而Hop38则有毒性作用;Hop25和Hop38均可产生60％的完全保护,hpaA可产生100％的部分保护即降低细菌定植密度,而Urease只能产生40％的部分保护。结论：外膜蛋白可能是一组高效的Hp疫苗免疫原;其长期免疫效果及对T细胞功能的活体调节作用尚需进一步评价。国际上尚未见相关报道。     

葡萄球菌菌体蛋白疫苗的研究进展

在化脓感染中,葡萄球菌感染始终居重要的地位。并且由于抗菌素类药物的大量使用,使金葡耐药株不断增加。为防治葡萄球菌感染,除继续使用抗菌药物外,国内外医务工作者正在使用葡萄球菌类毒素来治疗金葡感染,这一制剂免疫原性较好,但效果不太稳定。AKATOB的工作证明,用精制吸附的葡萄球菌类毒素免疫动     

核酸疫苗初免-蛋白疫苗加强的免疫策略提高日本血吸虫核酸疫苗免疫效果

为研制抗血吸虫疫苗提供实验依据,探讨了抗血吸虫SjGST-32核酸疫苗与蛋白疫苗联合免疫的免疫增强效应及免疫应答特征。将日本血吸虫DNA疫苗VR1012-SjGST-32与重组蛋白疫苗rSjGST-32分别在第0、2和4周免疫小鼠,在第6周攻击感染日本血吸虫尾蚴,攻击感染45 d后剖杀小鼠,计算减虫率、检卵率以及检测肝脏病理变化,观察免疫保护效果;检测小鼠血清中特异性IgG抗体滴度,T细胞增殖反应和抗原特异性CD4+IFN-γ+、CD4+IL-4+和CD4+IL-10+的数量,探讨免疫应答特征。结果显示,DNA初免-蛋白加强的联合免疫组的保护作用优于单独免疫组,显著提高了减虫率(42.3%)和减卵率(59.6%),并且能够显著减轻血吸虫虫卵对肝脏的病理损害;进一步发现,DNA疫苗和蛋白疫苗联合应用增强了机体T淋巴细胞增殖反应、抗体IgG滴度以及抗原特异性CD4+IFN-γ+的产生。这些研究为新型血吸虫疫苗的优化设计和合理应用提供了依据。     

通用蛋白作为替代性细菌性疫苗的策略

在过去20年间生物科学领域的发现促使疫苗研究迅速扩展。对感染性免疫应答调控机理的深入了解以及分子生物学、基因组学、蛋白质组学、生物信息学等为疫苗设计提供了革命性的手段。疫苗学已确立了自身的可信性,它已不再仅仅作为微生物学和免疫学学科的一个分支进行分类,疫苗也不再仅仅是灭活或弱毒微生物的粗制品或复杂制剂,     

SARS冠状病毒M蛋白的原核表达及其DNA疫苗构建

为探讨SARS-CoV的M蛋白的免疫学特性以及M蛋白作为SARS-CoV病毒疫苗组分的可行性和必要性.分别用pET-15b和pET-22b在大肠杆菌中表达SARS-CoV的M蛋白,亲和层析纯化后作为抗原应用.同时,将M蛋白的编码基因克隆进分泌型真核表达载体pSecTagB中得到重组质粒pSecM作为DNA疫苗,免疫BALB/c小白鼠、制备SARS-CoV M蛋白的抗血清.并用纯化后的M蛋白建立的SARS-CoV M抗体ELISA检测技术研究所构建的M-DNA疫苗的免疫效果.结果表明:两种重组M蛋白在大肠杆菌中均以可溶性形式得到高效表达,经与华大产的用灭活SARS全病毒制备的SARS-CoV抗体ELISA检测试剂盒比较实验,证明该原核表达的重组M蛋白能与SARS确诊病人血清以及M-DNA免疫鼠血清发生特异性抗原抗体反应.这两种重组M蛋白有可能作为抗原组分用于临床SARS-CoV检测中;所构建的SARS-CoV的M基因核酸疫苗能在小鼠体内产生特异性抗体,提示M蛋白在SARS-CoV疫苗尤其是组分疫苗的研制中应加以考虑,为DNA疫苗的开发提供了依据.     

转基因植物生产药用蛋白研究进展

转基因植物作为生物反应器能生产医学上有生物活性的药用蛋白,该文对转基因植物生产医药蛋白的种类、途径及优缺点、改进措施进行了阐述。     

肾综合征出血热纯化疫苗的SDS-PAGE分析

为了证明蛑综合征出血热纯化疫苗的主要成分坦病毒蛋白,采用出血热纯化疫苗经浓缩后进行SDS－PAGE和Western-blotting分析。结果 经SDS－PAGE显示,肾综合征出血热纯化疫苗有三条蛋白带,分子量分别约为70kD、55kD和50kD,与汉坦病毒三种结构蛋白（糖蛋白G1、G2和核蛋白NP）的分子量相符;经Western-blotting显示,分子量50kD的蛋白带反应阳性,分子量70kD和55kD的蛋白带无反应,认定出血热纯化疫苗的主要成分为汉坦病毒蛋白,主要由G1、G2和NP三种结构蛋白构成。     

利用转基因胡萝卜表达肺结核疫苗

利用转基因植物生产研制疫苗,不但可以改变传统的疫苗生产方式和接种手段,而且会大大降低疫苗的生产成本,以胡萝卜（Daucus carota L.var.sativa)无菌幼苗的子叶和下胚轴为外植体,通过携带有３５Ｓ启动子驱动的结核杆菌（Myobacterium tuberculosis(Zopf)Lehmann et Neumann)分泌蛋白ＭＰＹ６４基因的根癌土壤杆菌（Agrobacterium tumefacins (Smith et TOwnsend)(Conn)LBA4404的介导进行转化,在筛选培养基上诱导形成抗性愈伤组织,经胚状体发生途径分化得到抗性苗,植株移栽后生长情况政党。经ＰＣＲ和Ｓouthern等方法鉴定,确认结核杆菌分泌蛋白ＭＰＴ６４基因已整合到胡萝卜的染色体中。Ｗestern检测结果表明,在转基因胡萝卜的蛋白质中含有ＭＰＴ６４分泌蛋白,为进一步研究利用转基因植物研制研制疫苗和防治结核的新型疫苗提供了材料。     

转基因植物疫苗的研究进展

近些年,随着遗传技术和植物基因工程的发展进步,疫苗（亚单位疫苗、活载体疫苗和核酸疫苗等）的研究迅速发展起来。尤其是利用转基因植物技术生产植物疫苗的研究受到了广泛的关注,在转基因植物（蔬菜、水果、农作物）的可食用部位表达抗原生产人或动物治疗用重组蛋白和疫苗的技术为可食性疫苗的研制开辟了新途径,展现了诱人的开发前景。植物来源的疫苗具有很多优势,如生产成本低、易于保存、免疫接种方便、甚至不需提取纯化等处理而直接食用。目前已有很多转基因植物疫苗产品投入开发和生产。文章综述了近几年转基因植物疫苗在表达系统、生产、生物安全／管理、公众健康等方面的研究进展,对转基因植物疫苗存在的问题进行了分析,并对其研究前景提出了展望。     

11价肺炎链球菌多糖-蛋白D结合疫苗在婴儿中的免疫原性和安全性[英]Narkka A…／／Pediatr Infect Dis J．

在过去的10年中，对于一系列以不同蛋白和多糖作为载体的多糖．蛋白复合物型抗肺炎链球菌疫苗的研究表明，在众多的疫苗中，只有1种带有CRM197载体蛋白的7价疫苗(PncCRM)能够有效地阻止致病性肺炎链球菌的感染。在欧美地区，这种疫苗广泛应用于高危人群，但其血清型是4、6B、9V、14、18C、19F和23F，缺少了亚洲等众多发展中国家普遍存在的血清型1和5。为了有效地抑制更多型别的肺炎链球菌，     

一种应对新冠变异株疫苗研制的免疫策略研究

利用序贯免疫具有较高中和效价以及较低副反应效果的特性,探讨一种具有Wuhan株序列的小剂量S1蛋白编码mRNA疫苗和具有变异株突变特征的蛋白疫苗的序贯免疫策略。制备自主设计序列的mRNA和蛋白疫苗,经测序,转录表达及抗原鉴定后免疫小鼠,分别检测不同免疫策略诱导的中和抗体、抗S蛋白IgG抗体以及特异性T细胞增殖情况。实验用mRNA疫苗能够在293细胞中有效翻译且呈现明显的量效关系;具有多种变异株突变位点的蛋白疫苗能够为患者恢复期血清和抗S蛋白抗体所识别。两种疫苗组合经皮内和肌肉序贯免疫小鼠能够诱导较单剂免疫或同源加强策略更高的,包括中和抗体的抗体反应,其可以维持至加强免疫后的140d。另外,其诱导的血清能够识别不同变异株的S1蛋白。序贯免疫诱导的特异分泌IFN-γ T细胞增殖反应亦显示了类似的结果。mRNA/蛋白抗原组合疫苗进行序贯免疫的策略具有能够产生较高中和抗体、维持时间较长和易于针对不同变异株设计快速反应的优点,可以作为应对新冠变异株的候选疫苗策略。     

离子色谱在多糖疫苗及多糖蛋白结合疫苗质量控制中的应用

离子色谱具有方便、快速、灵敏度高、选择性好、重现性好、准确度高、可同时分析多种离子化合物等优点,其中的高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)可直接分析糖类物质,可应用于多糖疫苗及多糖蛋白结合疫苗中多糖的分析。近年来,离子色谱应用在多糖及多糖蛋白结合疫苗的质量控制中,如测定疫苗中的多糖、游离糖、杂质多糖、对人有免疫原性的功能基团等的研究有许多报道,对有关内容进行了综述。     

戊型肝炎疫苗的研究进展

戊型肝炎(Hepatitis E,HE)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)引起的一种非甲非乙型病毒性肝炎。HE主要在亚非拉等发展中国家流行,但在欧美等发达国家也有散发病例。HEV是一种非包膜单股正链RNA病毒,具有四种基因型,仅有一种血清型,所以有望能够研究出对HEV所有基因型均有保护性的疫苗。因HEV尚无合适的细胞培养系,目前,戊肝疫苗研究开发主要集中于基因工程疫苗。戊肝病毒开放阅读框2(ORF2)含有重要的中和抗原表位,目前已有ORF2许多片段在不同表达系统中成功地进行了表达,如原核、昆虫、酵母、植物细胞等表达系统,且表达产物均具有一定的免疫原性。虽然戊肝疫苗的研究已开展多年并取得了很大进展,迄今全球仍无戊肝疫苗被批准上市。但有两种戊肝候选疫苗现已进入Ⅲ期临床试验阶段,有望成为预防戊肝的有效手段。     

HIV-1 gagpol病毒样颗粒疫苗免疫小鼠的实验研究

目的:为构建含中国流行株HIV*1核心蛋白(gag、pol)基因的病毒样颗粒疫苗(VIP疫苗),并评价其诱导的体液和细胞免疫反应效果.方法:将重组质粒pcDNA3.1/gagpol稳定转染HEK293细胞,上清液经蔗糖垫层超速离心纯化后,用收获的VLP疫苗免疫小鼠,通过ELLSA检测免疫小鼠的特异性抗体和IFN-γ,通过乳酸脱氢酶(LDH)实验检测小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应.结果:VLP疫苗免疫组小鼠血清的抗HIV-1 gp160抗体滴度和IFN-γ均升高(P<0.01).其特异性CTL活性均高于PBS对照组(P<0.01).结论:构建的VLP疫苗免疫小鼠可以诱导特异性体液和细胞免疫应答,为进一步研制HIV治疗性疫苗奠定基础.