阿片类物质对猴免疫缺陷病毒感染的CEM×174细胞内p53合成的调节作用(英文)

已经证明阿片类物质如吗啡能够刺激猴免疫缺陷病毒 ( SIV)的复制 ,并最终加速细胞死亡 ,但是其机理却研究很少 .为探讨吗啡和甲硫氨酸脑啡肽对细胞内 p53合成的作用 ,用 SIV感染CEM× 1 74细胞 ,同时分析 SIV感染时病理过程的机理 .在 CEM× 1 74细胞感染 SIV后不同时间 ,p53含量逐渐增加 ,但 1 0 -7mol/L的吗啡仅在起始阶段对其有促进作用 .在 SIV感染组加入吗啡或甲硫氨酸脑啡肽进行时间曲线实验时 ,p53含量较低 .加入 1 0 -8～ 1 0 -6mol/L吗啡 8h,正常细胞 p53含量仅有轻微改变 .但在 SIV感染情况下 ,则呈现剂量依赖性的大量增加 .相反 ,1 0 -8- 1 0 -6mol/L甲硫氨酸脑啡肽在 8h时能增加正常细胞 p53合成达 60 % .在 SIV感染时 ,SIV本身能够促进 p53的含量 .尽管各组 p53仍然高于对照组 ,但甲硫氨酸脑啡肽对其不再起作用 .结果提示甲硫氨酸脑啡肽对正常细胞 p53含量有明显影响 ,而吗啡 8h增加 SIV感染细胞的 p53含量可能是其加速爱滋病病理过程的机理之一 .     

猴免疫缺陷病毒引起多形核嗜中性白细胞凋亡的可能机理（英文）

本实验目的是研究猴免疫缺陷病毒(SIV)引起多形核嗜中性白细胞(PMNs)凋亡的机理.实验用PCR技术扩增gag基因,用Western blot法测定p53和bcl-2基因的表达.结果显示PMNs在被SIV感染后随着保温时间的延长存活率下降,在感染后24h可以从PMNs中扩增出gag基因.PMNs中p53基因的的表达在感染后24h增加.同时bcl-2基因的表达在对照组和SIV感染组都增加,但在SIV感染组bcl-2蛋白的表达明显低于对照组.结果揭示SⅣ能够感染PMNs,p53和bcl-2基因表达的改变可能是SⅣ感染PMNs引起细胞凋亡的机理.     

猴免疫缺陷病毒引起多形核嗜中性白细胞凋亡的可能机理

本实验目的是研究猴免疫缺陷病毒（SIV）引起多形核嗜中性白细胞（PMNs）凋亡的机理。实验用PCR技术扩增gag基因,用Western blot法测定p53和bcl-2基因的表达。结果显示PMNs在被SIV感染后随着保温时间的延长存活率下降,在感染后24h可以从PMNs中扩增出gag基因。PMNs中p53基因的表达在感染后24h增加。同时bcl-2基因的表达在对照组和SIV感染组都增加,但在SIV感染组bcl-2蛋白的表达明显低于对照组。结果揭示SIV能够感染PMNs,p53和bcl-2基因表达的改变可能是SIV感染PMNs引起细胞凋亡的机理。     

猴免疫缺陷病毒引起多形核嗜中性白细胞凋亡的可能机理

本实验目的是研究猴免疫缺陷病毒(SIV)引起多形核嗜中性白细胞(PMNs)凋亡的机理.实验用PCR技术扩增gag基因,用Western blot法测定p53和bcl-2基因的表达.结果显示PMNs在被SIV感染后随着保温时间的延长存活率下降,在感染后24h可以从PMNs中扩增出gag基因.PMNs中p53基因的的表达在感染后24h增加.同时bcl-2基因的表达在对照组和SIV感染组都增加,但在SIV感染组bcl-2蛋白的表达明显低于对照组.结果揭示SⅣ能够感染PMNs,p53和bcl-2基因表达的改变可能是SⅣ感染PMNs引起细胞凋亡的机理.     

PCR技术在猴免疫缺陷病毒(SIV)感染模型中的应用

目的(1)建立RT PCR方法,定性测定SIV感染猴血浆中病毒RNA,比较其与传统血浆病毒分离方法的敏感性;(2)建立DNA PCR方法,检测SIV感染猴外周血淋巴细胞(PBMCs)中的前病毒DNA。(3)检验DNA PCR和RNA PCR方法在猴SAIDS模型应用中的实用性和可操作性。方法用SIVmac251静脉感染恒河猴,定期采血,从血浆中提取病毒RNA,以RNA为模板通过RT PCR法扩增,凝胶电泳定性;从感染猴PBMC中提取带有整合的SIV前病毒DNA的细胞基因组DNA,巢式PCR扩增,凝胶电泳定性。结果DNA PCR和RNA PCR经两轮扩增后均得到一长度为477bp的特异条带,测序鉴定确为目的片段。9只实验猴感染SIV后7d,RNA PCR结果为79阳性,DNA PCR结果为100%阳性,而血浆病毒分离只有59阳性;此后一直到感染后的42d,RNA PCR和DNA PCR的结果一直为100%阳性,而血浆病毒分离阳性率在感染后35d下降到49,到42d时下降为零。结论PCR方法比病毒分离方法的敏感性高。尤其是DNA PCR,既可检测具有活跃病毒复制的受感染细胞,又可检测那些携带病毒处于转录休眠期的细胞,所以在感染的早期和中后期———血浆病毒水平较低的情况下或病毒处于潜伏感染的阶段,它作为猴艾滋病(SAIDS)模型病毒学指标之一有其必要性和重要性。这个指标的检测方法应该是较血浆病毒RNA检测更为敏感。     

病毒对细胞凋亡的影响及作用机理

自Kerr等1972年提出细胞凋亡(apoptosis)概念以来,这一生物学现象的研究已受到广泛重 视,细胞凋亡是细胞在一定的生理或病理条件下,遵循自身程序进行自杀的过程,但它与程 序化细胞死亡(PCD)不是同一现象 [1]}.程序化细胞死亡具有严格的基因时控性 ,一定时间 内使某些细胞死亡而让另外一些细胞新生,其调控是非常精确的.细胞凋亡虽也涉及基因调 控,但它只是瞬时发生的形态学变化过程,它以细胞皱缩,胞浆致密,染色质浓缩成大小不 等的块状,DNA梯级性降解,细胞膜内陷形成多个凋亡小体等生化和形态学变化为其特征.     

人类免疫缺陷病毒1型慢性感染者B细胞表型分析及抗反转录病毒治疗的修复作用

人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）感染会造成严重的免疫功能损伤,除引起CD4＋ T细胞不断耗损和功能损伤外,体液免疫应答也受到损伤。本研究通过检测HIV-1慢性感染者和慢性感染治疗者外周血B细胞数目和亚群比例,以及活化、凋亡和共刺激分子的表达,探讨 HIV-1感染者中B细胞损伤及抗反转录病毒治疗（ART）对B细胞损伤的修复作用。结果显示,HIV-1慢性感染者外周血B细胞数目显著低于健康对照组,其中未成熟B细胞、初始B细胞、静息记忆B细胞和浆母细胞显著降低,而组织样记忆B细胞显著增加, ART可恢复初始B细胞和组织样记忆B细胞比例,但不能恢复静息记忆B细胞比例。与健康对照组相比, HIV-1感染者未成熟B细胞、初始B细胞、静息记忆B细胞和组织样记忆B细胞中CD38的表达上调;CD95的表达在所有B细胞亚群中均上调;而Bcl-2在初始B细胞、组织样记忆B细胞和浆母细胞中的表达显著降低;静息记忆B细胞和浆母细胞中PD-1的表达上调;共刺激分子CD40在所有B细胞亚群中的表达降低,而CD70的表达在未成熟B细胞以外的亚群中均显著下调。ART仅能部分修复以上分子的表达。结果表明, HIV-1感染引起B细胞及其亚群比例异常,B细胞表现为过度活化、易凋亡及与T细胞作用受损,ART不能完全修复B细胞损伤,有效的免疫干预策略亟待开发。     

抗体依赖细胞介导的细胞毒性效应在抗人类免疫缺陷病毒1型感染过程中的作用

抗体依赖细胞介导的细胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)效应是宿主抵抗病原微生物和清除病变细胞的一种重要的免疫反应机制.通过ADCC途径发挥作用的效应细胞包括:自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等.     

HIV-1初始传播病毒Vpr基因遗传变异对诱导G2期阻滞及细胞凋亡的影响

人免疫缺陷病毒(HIV-1)急性感染过程中,病毒的遗传多样性显著减少,往往只有一株或几株病毒可以建立有效感染,这种病毒被称为初始传播病毒(Transmitted/Founder virus)。病毒蛋白R(Vpr)是HIV-1的辅助蛋白之一,在病毒复制过程中起重要作用。研究初始传播病毒Vpr基因遗传变异与生物学特征对于阐明病毒建立感染的关键环节具有重要意义。文章利用流式细胞术分析了C亚型HIV-1初始传播病毒株与慢性感染株MJ4的 Vpr蛋白诱导细胞G₂期阻滞和细胞凋亡的能力。结果显示,初始传播病毒ZM246和ZM247的Vpr诱导细胞G₂期阻滞和细胞凋亡的能力显著高于慢性感染株MJ4 Vpr。氨基酸序列分析表明,初始传播病毒Vpr在第77、85和94位上存在高频突变。研究结果提示初始传播病毒可能在病毒感染早期,通过Vpr基因的遗传突变,提升病毒诱导细胞停滞G₂期和细胞凋亡的能力,进而促进病毒在宿主体内的复制和传播。     

表达猴免疫缺陷病毒Env蛋白的重组鸡痘病毒的构建和筛选

目的:构建并筛选表达猴免疫缺陷病毒(SIV)Env蛋白的重组鸡痘病毒(FPV),并对其进行鉴定。方法:设计引物,通过PCR技术扩增SIV env基因,将其连接到pMD18-T载体上,测序正确后将其克隆入本实验室自行构建的FPV穿梭载体pTKET中,获得重组质粒pTKET-SIV env,然后将其与FPV282E4株共转染原代鸡胚成纤维细胞进行同源重组,以增强型绿色荧光蛋白为筛选标记,通过噬斑筛选获得重组病毒,应用PCR、RT-PCR、Western印迹对重组病毒进行鉴定和遗传稳定性分析。结果:通过10次噬斑筛选,PCR检测表明目的基因已整合到重组FPV基因组中,RT-PCR、Western印迹结果表明SIV Env蛋白在感染细胞内表达且具有抗原性;连续传代20次,PCR、RT-PCR、Western印迹均能检测到外源基因的整合、转录和表达,且未能扩增出FPV-TK基因,表明重组病毒遗传稳定性良好,且病毒已经纯化。结论:获得表达SIV Env蛋白的重组FPV,为进一步免疫试验研究奠定了基础。     

肠道菌群对蛋氨酸脑啡肽治疗肿瘤疗效的影响

蛋氨酸脑啡肽(Methionine enkephalin,MENK)是一种内源性阿片肽,有良好的抗肿瘤作用,而肠道菌群对MENK抗肿瘤作用的影响尚不清楚.本研究建立小鼠肠道菌群紊乱模型及荷瘤小鼠模型,以16s rRNA测序法检测肠道菌群丰度、监测小鼠体重、绘制肿瘤生长曲线,以流式细胞术检测小鼠肿瘤浸润CD4+T细胞、C...     

Involvement of caspase-3 pathway in anti-apoptotic action of methionine enkephalin on CEM x 174 cells in prolonged infection with simian immunodeficiency virus in vitro

The roles of methionine enkephalin, as an immunomodulator, on immunodeficiency virus-induced apoptosis of lymphocytes during prolonged infection are still unclear. In the present study, we evaluated the effects of methionine enkephalin on the viability, the profile of cell cycle and apoptosis, as well as the expression of apoptosis-related genes in CEM x 174 cells infected with simian immunodeficiency virus for 72 h. Our data demonstrated that methionine enkephalin maintains the viability of cells during the period of prolonged infection. Following co-incubation with the virus, CEM x 174 cells were arrested at S phase, with increased mortality as a result of apoptosis. Methionine enkephalin could abolish virus-induced over-expression of caspase-3. Taken together all findings, we conclude that methionine enkephalin may maintain the viability of SIV-infected cells via suppressing the expression of caspase-3, which may have clinical implications in opioid peptide therapy for AIDS.     

乙肝病毒X蛋白诱导肝癌细胞凋亡的信号转导途径

乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)X蛋白(HBX)与肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的发生具有密切的关系.HBX不但具有拮抗细胞凋亡的作用,还具有促进细胞凋亡的作用.为了进一步探讨HBX促细胞凋亡作用的分子机制,通过脂质体转染的方法将携带X基因的真核表达载体pCMVX导入H7402肝癌细胞,使乙肝病毒x基因(HBx)瞬时过量表达.流式细胞仪检测结果显示,在瞬时转染3μgpCMVX质粒后,肝癌细胞发生凋亡.为阐明HBX诱导细胞凋亡的信号转导途径,对HBX与线粒体释放细胞色素c的关系做了初步探讨.通过罗丹明123染色,经流式细胞仪分析,显示在转染HBx基因后细胞线粒体膜电位明显下降,表明HBX可促进细胞色素c从线粒体释放增加.Western印迹检测结果显示,肝癌细胞在导入HBx基因后,细胞凋亡线粒体转导途径中细胞色素c、Apaf1、procaspase3和procaspase9等的表达水平均上调.研究结果说明,HBX可通过影响线粒体凋亡途径促进肝癌细胞凋亡.     

Morphine alleviates early stages of apoptosis in cultured CEM x174 cells infected with simian immunodeficiency virus

The reduction in apoptosis caused by short-term exposure of CEM x174 cells infected with SIVmac239 to morphine was investigated. Eeffects of morphine on the viability of normal and infected CEM x174 cells were determined by MTS assay. Apoptosis induced by SIVmac239 and the effects of morphine were analyzed by flow cytometry. cAMP levels, PKA activity, and the resulting histone H3 phosphorylation levels were measured. The results show a pronounced decrease in numbers of infected SIVmac239 cells compared to controls. Morphine elevated cell viability in the infected groups. Annexin V binding assays showed that 1 microM l(-1) morphine increased the percentage of viable cells and decreased apoptotic cells. Morphine also downregulated cAMP and PKA activity in both groups, but more markedly in the infected group. Histone H3 phosphorylation was elevated after virus infection and decreased in the presence of morphine. The results indicate that the cAMP-PKA signal transduction cascade is involved in morphine regulation of early SIVmac239-induced apoptosis.     

兔出血症病毒在体外诱导细胞凋亡

The apoptosis of RK13 cells induced by RHDV was investigated with DAPI staining,DNA ladder,Caspase 3 activity and flow cytometry,etc.The results showed that nuclear staining of infected cells with DAPI showed gradually morphological changes of the nuclei.As shown in the paper,a canonic oligonucleosome-sized DNA ladder was observed in cells harvested at 24h,48h and 72h post-infection,confirming that DNA fragmentation was induced by RHDV infection.The results of flow cytometry showed that about 63 % of cells ...