小片断DNA电泳分离、转移和分子杂交的一个简单有效的方法

Southern DNA转移技术已广泛地应用于分子生物学研究。主要实验步骤如下:藉琼脂糖电泳将不同分子量的DNA片断分开,再将这些DNA片断从琼脂糖胶上原位转移到硝基纤维素滤膜上。在DNA混合物中,特定的     

二羟丙氧甲基鸟苷(DHPG)体外抑制单纯疱疹病毒增殖的研究

二羟丙氧甲基鸟苷[9-(1,3-dihydroxy-2-Propoxymethyl)guanine,简称DHPG]是近几年合成的一种结构与无环鸟苷(ACV)类似的抗病毒化合物(图1)。已证明,它对单纯疱疹病毒1、2型(HSV-1、2),巨细胞病毒(CMV)、水痘带状疱疹病毒(VZV)具有较强的选择性抑制作用,尤以对CMV的作用,被认为是最有希望的抗CMV药物之     

植物的体细胞杂交和基因转移研究进展(II)

四、种群间的体细胞杂种对于育种家来说,最期望的是通过原生质体融合,把优良性状转移到那些不亲和性的物种中去.在十字花科植物中,我们已经选择了山芥(Barbarea vulgaris)和穿叶遏蓝菜(Thlaspi perfoliatum)作为融合油菜的亲本.因为山芥属植物具有抗寒性,遏蓝菜属植物含有一种可以用作润滑剂的神经酸.它们与拟南芥芸苔杂种不同,其分离杂种的原生质体愈伤组织容易再生成苗,而在发根和幼苗移栽方面较困难.     

大鼠3′-甲基-4,4′-二甲基氨基偶氮苯(3′-MeDAB)诱癌过程甲胎蛋白的动态变化和免疫酶标记定位观察

本工作采用放射火箭电泳自显术和免疫酶标记定位技术,对大鼠3'-MeDAB诱癌过程血清和肝组织甲胎蛋白(AFP)的动态变化和定位情况进行了观察。发现(1)肝硬化假小叶内的少数肝细胞、嗜碱性间变再生结节细胞、少数“幸存肝细胞”及少数“过渡性细胞”,具有合成AFP的能力。未见肝内其他类型细胞合成AFP。合成AFP的细胞大多具有胞浆嗜碱性、生长活跃和形态上去分化的特点。(2)未见胆管癌细胞合成AFP。肝细胞癌分化好的癌细胞绝大多数也未见合成AFP,分化差的癌细胞合成AFP的能力,基本上与其生长活跃程度呈正相关,与分化程度呈负相关,而与癌细胞是否处于核分裂阶段关系不大。(3)肝癌组织AFP酶标的强度和范围与血清AFP水平之间基本上有平行关系。此外,本文还就什么细胞合成AFP、血清AFP“马鞍型”变化的成因及病理组织学基础等进行了讨论,并根据实验结果,对大鼠3'-MeDAB肝癌的组织发生提出了初步的设想。     

非天然β-氨基酸L-7-(N-苄氧羰基)氨基-3-(N-叔丁氧羰基)氨基-正庚酸的合成

以 Nε-苄氧羰基保护的 L -赖氨酸 ( L - Lys( Z) - O H)为原料 ,经过混合酸酐活化 ,与重氮甲烷反应合成重氮酮 ,再经 W olff重排 ,合成了具有光学活性的 L- 7- ( N -苄氧羰基 )氨基 - 3- ( N-叔丁氧羰基 )氨基 -正庚酸     

火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶基因克隆、表达纯化和酶学性质研究

【目的】在大肠杆菌中表达火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶,纯化得到重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶,在此基础上系统研究火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶的酶学特征。【方法】构建8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶重组表达质粒,将重组质粒转化Escherichia coli Rosetta(DE3),利用IPTG诱导表达重组蛋白,通过Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白;最后利用含8-氧鸟嘌呤损伤的寡核苷酸作为底物,测定8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶的酶学性质。【结果】在大肠杆菌中成功诱导表达了重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶,经Ni2+亲和纯化后蛋白纯度大于95%。在体外鉴定了重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶的酶学性质。结果表明重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶可以切除DNA中的8-氧鸟嘌呤(8-Oxo-G,GO)损伤碱基,并且具有AP裂解酶活性。重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶催化反应的最适pH值和温度分别是pH 8.5和55°C。除Zn2+对火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶的酶促反应有明显的抑制作用外,实验中测定的其它二价离子(Mn2+,Mg2+,Ca2+,Ni2+,Co2+,Cu2+)对其没有明显的影响。离子强度在50-100 mmol/L范围内对其酶促反应影响不大,超过100 mmol/L时有明显的抑制作用。与8-氧鸟嘌呤互补的碱基差异对火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶切除8-氧鸟嘌呤损伤的效率影响不大;但与单链DNA相比,双链DNA是优选底物,切割效率如下:GO/C≈GO/G≈GO/T≈GO/AGO/-。【结论】在大肠杆菌中成功表达,并Ni2+亲和纯化了火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶,生化研究表明制备的重组蛋白具有8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶活性,可能负责切除火球菌基因组DNA中的8-氧鸟嘌呤损伤。     

耐热蛋白质延长因子(EF-Tu)的分子和功能的性质(英文)

本文用亲和层析法从Calderobacteriumhydrogenophilum(极端耐热细菌)中分离得到纯的耐热蛋白质延长因子。测得其相对的分子量为51000。该蛋白质对热极其稳定,从膜过滤分析法测定EF-Tu 的活性可知,在80℃加热5 min后,原活性仅仅失去50%。Ouchterlony双向免疫扩散的结果表明,该蛋白延长因子与E.coli 延长因子有着抗原的相似性。而且该因子只含一个半胱氨酸残基,其位置在半胱氨酸81,即肽段T_(13)。Southern 杂交试验的结果显示出C.hydrogenophilum 的染色体DNA 中可能有两个基因编码同一蛋白。     

磺胺甲噁唑(SMZ)和甲氧苄啶(TMP)在彭泽鲫组织中的残留消除研究

采用高效液相色谱技术研究了磺胺甲噁唑(Sulfamethoxazole, SMZ)及其增效剂甲氧苄啶(Trimethoprim, TMP)在彭泽鲫体(Carassius auratus var. pengze)内的残留消除规律。在(18±1)℃水温条件下, 将实验鱼随机分为2组, 分别用于多剂量混饲和口灌给药, 剂量为150 mg·kg^-1SMZ 和30 mg·kg^-1 TMP, 每天1 次, 连给10 d。用高效液相色谱法检测残留量, 此法检测限为0.05 μg·mL^-1。结果表明: 在两种给药方式下, 停药后第1 天SMZ 和TMP 都在彭泽鲫各组织中达到峰值, SMZ 在肌肉中最高, 肾脏中最低, 而TMP 在肾脏中最高, 血液中最低。混饲给药彭泽鲫各组织SMZ 和TMP 残留量都分别低于口灌给药各相应组织中的残留量, 两种给药方式下SMZ 残留的消除速度不同, 混饲给药比口灌给药慢, 前者需要24-25 d 各组织中才检测不到SMZ 残留, 而后者仅需要22 d; 与此相反, TMP 残留的消除速度在两种给药方式中相似, 即至各组织中检测不出TMP 残留都需21 d。根据这些结果综合确定对彭泽鲫多次用SMZ+TMP 后, 休药期至少22 d。     

植物DNA和mRNA中N6-甲基腺嘌呤的比较研究

DNA、RNA的甲基化作为重要的表观遗传标记,在真核生物多个细胞过程中发挥作用.DNA中的 N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenine in DNA,6mA)和 RNA 中的 N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenine inRNA,m6A)均为来自腺嘌呤第6位的甲基化修饰,在合成和功能上有相似性也有区别...     

3,5-二甲基吡唑磷酸盐(DMPZP)对土壤硝化作用的影响

采用好气培养法,以双氰胺（DCD）为参比对象研究了新型吡唑类硝化抑制剂3,5-二甲基吡唑磷酸盐（DMPZP）对土壤硝化作用的影响.结果表明,DMPZP对土壤中的铵氧化作用有较强的抑制效果,在施用量为1.0%（纯N含量）时能显著提高土壤中的NH₄⁺-N浓度,降低NO₃^--N浓度.DMPZP的硝化抑制效应随用量的增加而增强,相同质量的DMPZP的硝化抑制效果不及DCD,而DCD又不及2倍质量的DMPZP,但等摩尔数（物质量）的DMPZP硝化抑制效果明显优于DCD. DMPZP在施用后的第7天至第14天的硝化抑制作用最强,与不添加抑制剂的处理相比,DMPZP添加量为1.0%和2.0%（纯N含量）时的表观硝化率在第7天和第14天分别降低了29.3%、41.7%和18.6%、34.3%;在此期间,添加DMPZP处理的硝化抑制率均高于30%.DMPZP的施用还可减缓土壤pH的降低速率,但施用DMPZP和DCD对土壤pH的影响差异不显著.     

~(60)Co-γ辐照对中国仓鼠卵巢成纤维细胞DNA和组蛋白合成的影响

本文介绍了~(60)Co-γ辐照对同步的和非同步的CHO细胞的DNA合成和组蛋白合成关系的影响的研究,用~3H-胸腺嘧啶核苷和~(14)C-丙氨酸双标记,未经辐照的和经4Gy～60Gy ~(60)Co-γ辐照的CHO细胞,通过~3H和~(14)C的参入来估价DNA和组蛋白的合成,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定辐照前后组蛋白各组分的变化情况,实验表明: 1)、在4～60Gy剂量范内,无论是同步的还是非同步的CHO细胞其DNA合成和组蛋白合成都受到不同程度的抑制。2)、在辐照后1—3小时,DNA合成和组蛋白合成都受到不同程度的抑制,但辐照后4小时,DNA合成被进一步抑制而组蛋白的合成却逐渐恢复正常,到辐照后48小时组蛋白的合成几乎接近对照水平。3)、16Gy ~(60)Co-γ辐照后8小时,非同步的CHO细胞的DNA合成被抑制的情况比G_1期CHO细胞更为严重。4)、16Gy ~(60)Co-γ辐照S期细胞,在辐照后1—24小时中DNA合成被明显抑制的同时,组蛋白的合成也受到相应的抑制。5)、从未经辐照的和经6、16和60Gy~(60)Co-γ辐照的CHO细胞分别提取全组蛋白,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,从电泳图谱的变化清楚地看到组蛋白H_1和H_3受辐照影响大于组蛋白H_4和H_(2B)+H_(2A),因此我们推测DNA合成和组蛋白H_1和H_3的关系较之组蛋白H_4和H_(2A)+H_(2B)更为密切。     

H_(18)细胞中Epstein-Barr病毒DNA复制的抑制和恢复

采用~(32)P标记的EBV DNA BamH Ⅰ-W片段为探针,通过细胞点杂交测出每个H_(18)细胞中EBV基因组拷贝数约207个。在PAA存在下,这些病毒基因组数快速下降。每毫升细胞培液中加75γPAA后第11天,每个细胞中EBV基因组平均拷贝数降到17个,只占未处理细胞的8%,而后既使继续处理也稳定地维持在该水平。然而EBV-VCA的合成被完全地抑制了,只是EBV-EA的合成不受影响。如去除PAA,第3天时细胞中EBV基因组数可恢复到对照组的29%,而第40天则可恢复到90%。但是在去除PAA处理的同时加n-BA处理则明显地抑制这种恢复。一般认为EBV附加体DNA的复制由宿主细胞DNA多聚酶催化,病毒线状DNA由病毒诱导的PAA敏感的DNA多聚酶复制。由于n-BA能有效地阻碍宿主的DNA复制功能,因而我们的实验结果提示,宿主细胞和病毒诱导的DNA多聚酶??可能都参与了去除PAA处理后的H_(18)细胞中EBV DNA的恢复。     

中国赫坎按蚊类群的六种按蚊的杂交和染色体的观察

本文报告了赫坎按蚊类群中的中华按蚊(ASS)、长浮按蚊(ACF)、嗜人按蚊(AAP)、大窄按蚊(ADZ)、小宽按蚊(AXK)以及四川的八代按蚊(AYS)与辽宁的AYL品系的杂交和唾腺染色体的观察。结果表明,中华按蚊和长浮按蚊,嗜人按蚊和大窄按蚊之间不存在生殖隔离。因此,长浮按蚊和大窄按蚊可能不是独立的物种:小宽按蚊和四川的八代按蚊不存在生殖隔离;小宽按蚊和辽宁的AYL品系以及AYL品系和四川的八代按蚊却存在生殖隔离。因此,AYL品系可能为新种,而小宽按蚊新种能否成立,有待进一步研究。     

杂交在进化中的作用及杂种的识别和分类处理

所谓杂交和杂种,可以有不同的概念。从最广义的角度来理解,凡基因型不同的个体之间的交配都叫杂交。基因杂合状态是自然界正常的现象。互交繁育的生物体,在正常情况下,在许多位点上都是不同等位基因的杂合体,也就是杂种,它们在自交和杂合时都产生有变异和分离的子代。但杂交最常用的含义是指已有生殖隔离的异种个体或甚至异     

荧光能量转移和偏振研究小牛胸腺DNA与组蛋白在高低离子盐溶液中的离合

本文研究小牛胸腺DNA和组蛋白在体外低、高离子强度盐溶液中的动态缔合与解离。 实验结果是低离子溶液中荧光给体DANsyl-Cl-组蛋白在发射峰位上荧光强度降低,荧光受体吖啶橙-DNA在发射峰位上的荧光强度增高。此两峰位上荧光受体的荧光增量比值是2.7/1(大于1),有能量转移发生,DNA和组蛋白缔合。高离子溶液中两峰位上受体的荧光增量比值降到1.6/1,能量转移减少,DNA和组蛋白解离。 低离子溶液中所得的吖啶橙-DNA的荧光偏振度P值小而高离子溶液中的P值大。说明解离的DNA硷基排列比缔合的DNA硷基排列有序程度强,进一步证明低离子溶液中DNA和组蛋白是缔合的,而高离子溶液中它们是解离的。     

大白鼠颌下腺促性腺激素释放激素受体(GnRHR)mRNA的RT-PCR和原位杂交的研究

本实验采用RT－PCR法探讨大白鼠颌下腺是否存在GnRH受体mRNA,并用原位杂交法对其细胞定位进行了研究。结果显示RT－PCR可扩增出大白鼠颌下腺GnRH受体mRNA的特异性片段,其碱基数与设计的一致,原位杂交发现颌下腺浆液性腺泡上皮细胞、颗粒曲管、排泄管及分泌管上皮细胞内有GnRH受体mRNA的杂交信号,信号物质分布于胸质内,胞核阴性。上述结果表明大白鼠颌下腺能合成GnRH受体,颌下腺产生的GnRH可作用于颌上腺的靶细胞,参与颌下腺生理功能的调节。     

浙江产蝮蛇Agkistrodon halys(Pallas)蛇毒磷酸二酯酶的酶学性质及其对大分子核酸的作用

1.以双对硝基苯磷酸钠为底物,测得蝮蛇毒磷酸二酯酶的最适pH在10左右,最适温度在60℃左右;酶在37℃和60℃的Km分别为5.65×10~(-4)M和7.97×10~(-4)M。 2.酶在pH5—10.5范围和50℃以下稳定。 3.钙离子和镁离子对酶活力有激活作用,但钡离子、镁离子、锌离子、二价铅离子、钴离子、二价和三价铁离子、锰离子、镍离子等都有不同程度地抑制作用。 4.除乙酸根离子外,碳酸根,硫酸根,乙二胺四乙酸根、磷酸根,钼酸根,酒石酸根,柠檬酸根,亚硝酸根,巴比妥酸根和硫代硫酸根等阴离子都有不同程度地抑制作用。 5.蝮蛇毒磷酸二酯酶能充分水解RNA和DNA但后者的水解速度比前者快许多。     

短命植物小甘菊营养器官解剖学研究

小甘菊（Cancriniadiscoidea（Idb．）Pok）营养器官的结构特点为望叶表皮细胞中含有叶绿体;茎内有大型长弧形裂腔;叶为等而叶,叶柄近轴面具栅栏组织却为异而叶的极特殊结构,具C4植物型结构特征;根具次生结构,茎（花葶）仅有初生结构。     

我国现有的金鱼品种的分类及其系统发育的探讨1)

一、引言 金鱼是我国广大人民乐于饲养的一种家养观赏鱼类。它是由野生红黄色鲫鱼演变而来的。明朝李时珍在《本草纲目》中记载:金鱼“述异记载晋桓冲游庐山,见湖中有赤鳞鱼,即此也。”他还写道:“自宋始有畜者,今则处处家养玩矣。”因此可以认为金鱼起源于我国晋朝(公元265—420年间)。至今已有一千多年的历史了。 李璞(1959)报道了我国的金鱼品种已有二十余个。徐金声等(1980)报道有143个之多。耶么迄今为止我国的金鱼品种究竟有多少呢?为了弄清我国的金鱼品种资源,作者曾在北京等十七个省市的各大公园和花木公司所属鱼场作了调查。在调查过程中,我们     

落叶松落叶前后重金属元素内外迁移循环规律研究

供试元素在落叶松各部位的含量和贮量顺序为Ｚｎ〉Ｃｕ〉Ａｓ〉Ｐｂ〉Ｃｄ,并与环境中相应元素浓度呈正相关。元素的迁移主要发生在叶和枝、干、根之间,落叶时叶中６％的Ｚｎ迁移到枝、干中,且贮量均有增加,存在明显的内循环,占总循环量的２５％;Ｃｕ、Ｐｂ、Ｃｄ、Ａｓ主要为外循环,其循环量占总贮量的２０％￣７１％,循环率分别为３０％、６８％、２７％和２３％。