适合于植物花器官的冰冻切片技术

通过对4种植物主要花器官冰冻切片技术的各个环节及参数的研究,建立了一种适合于植物花器官的冰冻切片技术,即蔗糖保护-液氮速冻-冰冻切片法。其具体程序是：材料经固定和冷冻保护(蔗糖为冷冻保护剂)后进行速冻包埋(液氮为包埋剂);尔后进行冰冻切片;切片经干燥和染色(或者不染色)后,在显微镜下观察并摄影。此法为植物花器官的细胞生物学和分子生物学研究提供了简便、快速和高效的切片技术。     

凤仙花属两种植物花粉的扫描电镜制样研究

采用腊叶标本花粉直接制样法、烘干法、FAA固定液复原法(酒精梯度脱水、自然干燥)和FAA固定新鲜花药法(脱水、干燥处理同前)四种不同处理方法对凤仙花属(Impatiens L.)植物红纹凤仙花(I.rubro-striata Hook.f.)和长角凤仙花(I.longicornut Y.L.Chen)的花粉进行了制样研究。结果表明:经后两种方法处理的花粉形状不变,且外壁网纹清晰,可获得质量较高的照片,观察时间也不受季节和产地的影响,既可在野外固定保存新鲜花蕾备用,又可利用标本馆现有的腊叶标本花粉经固定液复原后制样观察,操作简便,是进行花粉形态研究的一种较理想的方法。     

微小组织冰冻快速制片技术

目的摸索提高微小组织冰冻快速制片质量的方法。方法针对小组织冰冻切片中常常出现组织切完、多粒组织切片不全、冰晶、染色不均匀等问题,采用预先制作冷冻平台、快速冷冻等方法来制作优质的冰冻切片。结果组织铺平可使组织切片完整,快速冷冻可减少冰晶形成,使组织结构更清晰,及时固定和加温染色可使细胞核染色更鲜艳,核、质对比明显。结论组织铺平、速冻、固定、染色等都是提高微小组织制片质量的关键。     

利用冰冻切片机快速制作木质茎显微切片技术

植物的木质茎,因次生维管组织含量多,细胞壁木质化程度高,质地较硬,徒手切片和石蜡切片均难以获得满意的切片效果。冰冻切片机可对一定硬度的组织进行切片,是制件植物木质茎的制片的有效工具之一。【方法】利用冰冻切片机可在不经化学固定,对一些质地均匀,含水量较高的木质茎直接切片;而对木质坚硬、含水量较少的茎,经过FAA等固定剂固定后,OCT包埋,(-30)～(-25)℃切片,用0.1%甲苯胺蓝染色液染色。【结果】木质茎的冰冻切片结构完整,图像清晰、色彩丰富。【结论】冰冻切片机可用于木质茎的显微切片制作,再结合甲苯胺蓝染色,具有简便、高效、易操作的优点。     

LCM联合快速免疫组化技术——一种获取肿瘤原位血管内皮细胞的可行途径

目的肿瘤血管内皮细胞对肿瘤发生发展极为重要,是目前肿瘤研究的热点。本研究为从肿瘤组织原位获取高纯度血管内皮细胞进行基因表达研究摸索可行方法。方法获取淋巴瘤组织标本后,置于锌固定液中固定,并通过进行激光捕获显微切割(lasercapture microdissection,LCM)前操作模拟LCM环境,确定锌固定法对RNA完整性的保护作用。将组织标本制作冰冻切片,采用快速免疫组化染色方法标记血管内皮细胞,利用LCM技术获取肿瘤组织原位血管内皮细胞,并用RT-PCR方法对所获细胞进行纯度检测。结果无论是固定后直接提取组织RNA,还是经模拟LCM环境再提取RNA,均显示锌固定法对RNA完整性提供了良好保护。快速免疫组化可以明确标记血管内皮细胞,后者能够被LCM准确捕获,并经RT-PCR验证为高纯度的血管内皮细胞。结论快速免疫组化联合LCM技术可以从肿瘤组织原位获取高纯度血管内皮细胞,并保证RNA的完整性,可能为肿瘤血管内皮细胞基因表达研究奠定基础。     

脑标本热甘油浸渍法

一般脑标本,多用瓶装液体保存,有时往往由于瓶口封闭不严,瓶内液体蒸发而降低质量。此外,液体保存的标本,使用时也不方便。因此,不少作者先后介绍了各种制作干标本的方法,企图弥补液体保存的缺陷。例如:Rack(1951)曾介绍过石蜡浸渍法;(1954)、横地千仞和大手裕(1957)等分别介绍过冰冻法;Kubik(1957)曾介绍过先用食盐福尔马林液固定,然后再用甘油浸泡的方法;Sakla(1959)还介绍了先用逐增浓度的福尔马林液固定,继之用酒精、丙酮、甘油混合液涂浸标本,然后晾干的方法。上述各种方法,各有利弊,如用石蜡浸渍法作出的标本,能够保持其体积不发生大的变化,但往往由于蜡液处理而使脑表面的结构不太明显;冰冻法制作的干标本往往体积收缩较剧。Kubik和Sakla介绍的方法比前两种好,做出的标本既能使体积变化不大,又能使表面结构清晰,但是,需要较长的时间才能得到令人满意的结果。因此,我们试用了热甘油浸渍法制作脑的干标     

一种制备植物扫描电镜样品的新干燥法：叔丁醇冻结干燥法

叔丁醇冻结干燥法用于植物材料,获得了良好的效果。经常规固定的样品完成脱水以后浸泡在叔丁醇中,然后将含醇样品放入电冰箱中冷冻,待叔丁醇凝固后再转移到真空镀膜机的钟罩里,用机械泵抽真空,冻结的醇在低真空中升华后样品得到了干燥。SEM 镜检表明,样品的表面和细胞断裂面及其深层(可见到内质网的双层膜、线粒体的嵴、高尔基体潴泡叠层、核糖体颗粒等细胞器)的三维图象均优于用临界点干燥法所得到的样品图象,叔丁醇冻结干燥法用于植物 SEM 样品制备,是一种操作简单,干燥质量可靠、值得推广的方法。     

实验与临床中血液系统的神经调节

近年来,血液系統的神經調节問題引起了許多研究者的注意。在許多专著与选集中(1952,1953,1954,1955;1953;1954;与1953),收集与綜合了許多实际的材料,显著地丰富了我們的知識。这个問題也引起了某些国外学者的兴趣。(1956)发表了专著,报导他与他的同事們进行的研究工作。但在同时候,这个問題不仅得     

扫描电子显微镜植物材料的一种化学干燥技术

扫描电镜新鲜生物材料的制备,一般都要经过干燥处理,其目的主要是使样品不产生收缩畸变,以使样品的形态结构保持在生活状态,如此获得的样品图像才自然真实。现代广为应用的扫描电镜生物样品的干燥方法是临界点干燥(CPD)法。另外还有莰烯干燥法、乙腈干燥法和叔丁醇干燥法等。Jemes(1983)应用化学试剂六甲基二硅胺烷(nexamthyl disilazane,简称 HMDS),分子式[(CH_3)_3Si]_2对昆虫组织进行干燥处理并     

冰冻断裂方法在豌豆叶光合膜亚分子结构观察中的初步应用

当前在光合作用研究领域内,光合膜结构与功能的研究极为活跃;而电子显微镜冰冻断裂和冰冻蚀刻方法则是揭示生物膜(包括光合膜)亚分子结构的一种有效手段。冰冻断裂就是将生物材料迅速冷却固定后施以外力,使之断裂,再利用低温真空复型技术将材料的断裂面制成复型后于电镜下观察。如果材料断裂后,使其温度适当上升,让断裂     

肾移植穿刺标本冰冻切片制作方法及体会

目的介绍一种肾移植穿刺标本冰冻切片的制作方法并分享制片过程中的体会。方法选取2017年武汉大学人民医院手术室提供的肾移植供体穿刺标本10例,分别记录每例冰冻切片的制作方法,切片质量,制片时间。收到标本后,首先在样本托上均匀涂抹一层普通胶水,于冷冻锤下压平成型30s,取出样本托,将标本铺展成一条直线于样品托上之后,在放置好的标本上均匀涂抹一层普通胶水覆盖标本,并用冷冻锤轻轻压平1min,取出进行切片。切片经改良AFA固定液固定,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色制片后,显微镜下观察。结果切片完整平坦,无褶皱、卷缩、刀痕;染色核质分明,红蓝适度,对比度好;制片时间在13min左右。结论肾移植穿刺标本经两步法包埋再切片,联合改良AFA固定液固定及HE染色,大大缩短了制片时间,提高了制片质量,易于观察,且重复性好,可以推广。     

几种冰冻切片固定液固定效果的比较

<正>冰冻切片具有方便快捷的特点,对手术中的的快速病理诊断具有重要的意义。冰冻切片质量的好坏直接关系到术中病理诊断的结果,制做高质量的冰冻切片要求每一环节都要做到精益求精,尤以固定液的选择更为至关重要[1]。为了选择一种固定效果较为理想的固定液,我们选择了几种较为常用的固定液,切片染色后对比观察各自的固定效果对染     

2,4-D对小麦、綠豆幼苗生长和呼吸代謝的影响

引言 2,4-D(2,4-二氯苯酚代乙酸)作为除莠剂的生理机制,过去20年許多作者从不同的角度曾提出过許多作用机制的假說。娄成后等、薛应龙、Woodford, E. K. 等及Hilton, J. L. 等曾加以討論和总結。     

冰冻切片制作体会及常见问题

目的:探讨冰冻切片制作过程中的影响因素及改进措施,提高切片质量,确保实验结果科学性、稳定性及可靠性.方法:从标本的取材、制片以及固定等多个环节阐述冰冻切片常见问题.结果:通过调整切片机的相应设置并且在冰冻切片多个环节中采取了相应措施,使切片更完整,厚薄均匀,无脱片和冰晶空洞现象产生,切片质量优良.结论:制作出高质量的冰冻切片需在取材处理、切片、固定等诸多环节上精益求精,这对冰冻切片这一专业性很强的实验技术的质控有着重大意义.     

植物冰冻切片条件的优化及其与石蜡切片在组织化学应用中的比较

冰冻切片是植物组织学研究中一项重要的实验技术,冷冻温度和冷冻时间是决定切片质量的关键因素。通过比较15种冰冻切片条件,得出植物组织直接冰冻切片较适宜的冷箱温度、冷台温度和冷冻时间。同时,通过对5种植物的不同组织进行组织化学染色,比较了新鲜材料直接冰冻切片与常规石蜡切片在不同化学成分鉴定上的异同及各自的适用范围。结果表明,对于多糖、蛋白质和角质,两种切片方法的鉴定结果比较一致,但对于脂肪只能采用冰冻切片技术。研究结果对植物组织学实验和研究方法的改进具有一定的参考价值。     

组织保护液在NADH-TR组织化学方法中的应用

还原型辅酶 四唑氮还原酶 (NADH- TR)组织化学方法是区别肌肉 、 型纤维的重要技术 ,该酶的显示对神经肌病的病理诊断和鉴别诊断具有实用意义。传统的酶组织化学方法 ,染色前多采用 1 %甲醛 -钙液及丙酮等固定液在 4℃下对组织进行处理 ,而后冰冻制片。实际应用中发现 ,经这些方法处理的组织 ,染色后酶活性明显降低 ,且容易扩散。我们经大量实验 ,在酶显色前 ,改用自行研制的组织保护液 (Tissue Protection Solution,TPS)对组织进行前期处理 ;同时对孵育液的配方进行改良 ,收到了理想染色效果。现将此法介绍如下 :1 .材料和方法1 .1…     

激光微切割与定量PCR技术分析肾脏病理切片RNA

采用激光微切割与定量PCR技术,分析使用不同提取方法从不同固定方法固定的病理切片中提取的RNA.用70%乙醇、丙酮、甲醇、4%多聚甲醛固定肾脏冰冻切片,使用激光微切割技术切取肾小球,用硫氰酸胍方法(guanidinethiocyanatemethods,GTC)和Trizol试剂方法提取RNA,使用Taqman定量PCR方法分析比较各组RNA的量;选取丙酮固定的石蜡切片,使用激光微切割技术切取肾小球,采用RNA裂解液提取RNA,使用Taqman定量PCR方法,比较石蜡切片和冰冻切片中RNA含量.结果显示:提取沉淀性固定剂如乙醇、丙酮、甲醇固定的冰冻切片的RNA时,2种提取方法和3种固定方法对RNA含量的影响都无明显差异;但在提取4%多聚甲醛固定冰冻切片时,使用Trizol提取RNA含量明显高于使用GTC方法,且其含量与沉淀性固定剂固定的切片RNA含量无明显差异.石蜡切片中经激光微切割肾小球的RNA含量与冰冻切片经激光微切割肾小球的RNA含量无明显差异.结果提示:切片的固定方法和RNA的提取方法是影响切片RNA提取量的主要原因.     

微生物的保存方法(续五)

<正> (九)非冻干的其他干燥保存法 如前所还,冻干法的基本特征是首先使试料冻结,继而使冰升华。所以,同液态干燥法相比,具有下列优点:(1)可防止发生气泡;(2)操作的全过程可在低温下进行;(3)在干燥过程中保持着多孔状态,不会形成皮膜或干燥不均匀;(4)能保持原形不变,加水后容易溶解。所以,冻干法可以说是微生物干燥保存的主要方法。 但是,冻干法并非在任何情况下总是最好的方法。例如,试料的予冻就有可能对于某种微生物具有极大的伤害。因此,人们又设计了几种不通过结冰进行干燥的方法。这一节就介绍此类干燥保存方法。 用土、砂等也是一种干燥方法,是一向应用甚广的主要的微生物保存方法,即前述的载体保存法。     

聚丙烯酰胺板状凝胶的简单干燥方法

我们依据组织逐级脱水的原理,经过摸索得到一种经济简单的凝胶干燥方法,特别是解决了浓度较高(10％—15％)凝胶和3％—25％梯度凝胶的干燥,可将聚丙烯酰胺板状凝胶干燥成一张平整、透明的干胶片,可直接照相或用感光胶片直接印制成负片。现将方法介绍如下:     

BOULTONIA属的一个新种*

(竹蜓)科Boultonia一屬係1927年李四光教授所建立,以Boultonia willsi Lee为其屬型。标本採自遼东半島五湖嘴煤田,時代屬上石炭紀太原統。在同一文中,他又描寫了另一个种Boultonia rawi Lee, B. rawi是中石炭紀本溪統的產物,後來这个种曾被許多(竹蜓)科学者歸入Wedekindella或Fusiellina。其後,陈旭教授在1934年描寫了一个採自廣西馬平石灰岩中的Boultonia新种,名为Boultonia cylindrica Chen。最近Skin-ner及Wilde根据陈旭教授对該种的描述和圖版指出該种以其隔壁褶皺不强烈,可能