发根农杆菌对骆驼刺的转化及转化组织的形态发生

将骆驼刺离体再生苗的茎切段经发根农杆菌A4菌株感染后,在含500mg/L头孢霉素的MS无激素培养基上培养,产生了转化的发根和愈伤组织.转化根在附加2mg/L2,4-D和0.5-1mg/L6BA的MS培养基上培养后,亦可诱导出愈伤组织.在含3mg/L6BA和0.5mg/LNAA的培养基上诱导出了苗的分化.冠瘿碱分析表明,在95%以上的发根和75%的转化愈伤组织及再生植株中都显示了T-DNA的整合和表达.染色体检查发现,约81%的发根细胞具有正常染色体数(2n=18),其余则存在染色体数目的变化,在继代培养一年之后,转化体仍维持旺盛的再生能力.     

高粱不同类型胚性和非胚性愈伤组织的生理生化差异

植物体细胞胚胎发生过程中伴随着复杂的生理生化变化,为进一步揭示胚性愈伤组织的再生潜力,该研究以高粱Sb19未成熟胚诱导产生的两种胚性愈伤组织和一种非胚性愈伤组织为材料,通过测定各愈伤组织中可溶性蛋白、游离脯氨酸和可溶性糖的含量,采用方差分析法对高粱体细胞胚胎发生过程中不同类型愈伤组织的生理生化指标进行了差异比较研究。结果表明:(1)高粱两种胚性愈伤组织中可溶性蛋白、游离脯氨酸和可溶性糖的含量均显著高于非胚性愈伤组织,表明胚性愈伤组织中的代谢活性高于非胚性愈伤组织,能够为体细胞胚胎发生提供更多的物质能量基础。(2)两种类型胚性愈伤组织之间生理生化差异显著,其中,Ⅱ型胚性愈伤组织中可溶性蛋白和游离脯氨酸含量均显著高于Ⅰ型胚性愈伤组织,相反,Ⅱ型胚性愈伤组织中可溶性糖含量显著低于Ⅰ型胚性愈伤组织,这种生理生化差异在一定程度上影响了后期的分化。该研究结果为愈伤组织的胚胎发生能力与生化代谢的关系提供理论依据。     

柑橘愈伤组织倍性变化及其与体细胞胚胎发生能力的关系

柑橘愈伤组织是细胞融合、遗传转化等生物技术研究的良好材料。本实验室通过近20年的工作,先后诱导和保存了近80份不同种类和品种的柑橘愈伤组织。这些愈伤组织在MT基本培养基上继代保存。在长期保存过程中,部分材料仍然保持较好的胚胎发生能力。为研究愈伤组织在继代过程中的染色体变异趋势以及这种变异对胚胎发生能力的影响,本文选择有代表性的35份材料作为试材,在4年中连续3次使用流式细胞仪,对细胞DNA含量进行测定。结果发现,待测的35种愈伤组织均存在部分细胞DNA含量加倍的现象,而且,随着时间的推移,除佩奇橘柚、沙漠蒂甜橙、鲁斯脐橙、印度酸橘等4种愈伤组织的DNA含量加倍的细胞有减少的趋势外,其他愈伤组织的DNA含量加倍的细胞均有增加的趋势。数据分析表明,在待测的35种愈伤组织中,有71．4％的基因型的愈伤组织细胞出现了多倍体细胞增加的趋势。对这35种柑橘愈伤组织进行体细胞胚诱导,发现只有9种愈伤组织具有不同程度的胚胎发生能力,其他26种愈伤组织不能再生。相关性分析表明,柑橘愈伤组织细胞DNA含量增加的细胞比例与体细胞胚胎发生能力之间的相关性较小,相关系数为忙-0．10（P〈0．01）,未达到显著水平。另外,柑橘胚性愈伤组织继代时间与体细胞胚胎发生能力之间的相关性也不显著。     

发根土壤杆菌Ri质粒对黄瓜进行遗传转化的研究

以发根土壤杆菌Ｒｉ质粒介导,对载体ｐＢＴＣ－８上的Ｔ－ＤＮＡ转化黄瓜进行了初步研究。采用黄瓜的各种不同外植体片断与土壤直菌共培养的方法,诱导出具有典型毛状根特性的转化根,转化根经诱导培养形成愈伤组织,冠瘿碱检测表明,转化根及愈伤组织含有农杆碱和甘露碱。愈伤组织进一步分化培养再生出完整植株。再生植株表现卡那霉素抗性。     

不同分化状态的白百利烟草愈伤组织在生长过程中核酸蛋白质的变化

本文报道了在正常分化芽和根、诱导芽或恨定向发生的白百利烟草(Nico-tiana tabacum Baibaili)愈伤组织在生长过程中DNA、RNA和蛋白质变化的结果。MS+0.2mg/1NAA+0.2mg/1 KT诱导白百利烟草愈伤组织正常分化出芽和根,MS+0.05mg/1NAA+2mg/1KT诱导愈防组织定向地芽发生,MS+0.5mg/1NAA+0.05mg/1KT诱导愈伤组织定向地根发生。在定向诱导芽或根发生愈伤组织里的RNA和蛋白质合成的第一个高峰出现,比正常发生芽和根的愈伤组织里DNA、RNA和蛋白质的第一个高峰迟5天,在芽发生的愈伤组织里DNA峰出现也迟5天,在根发生的愈伤组织里DNA蜂,则相同于正常分化的愈伤组织DNA峰出现。外源的植物生长物质诱导器官定向发生的作用表现在RNA水平上。在三种分化状态的愈伤组织里,蛋白质组成在第8天表现出明显的差异。41KD和46KD蛋白质在器官的定向发生中可能起着相当重要的作用。     

金鱼草愈伤组织过氧化物酶活性及其同工酶变化

在不同激素比例的MS培养基上 ,金鱼草 (Antirrhinummajus)茎愈伤组织主要有三种分化状态 :a愈伤组织不分化 ;b以器官发生途径分化出不定芽和不定根 ;c通过胚胎发生途径形成胚状体。过氧化物酶活性与愈伤组织分化程度呈正相关。未分化愈伤组织与分化芽、分胚状体及分化芽和根的愈伤组织酶活性呈线性递增关系 ,相对酶活力为 1:3:5 :6。在其同工酶谱中 ,三种状态的愈伤组织都具有酶带I和II,表明这两种同工酶与细胞的增殖生长有联系。分化的愈伤组织比未分化愈伤组织多出现酶带Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ ,说明这三条酶带是影响分化的特异蛋白质。在分化芽的愈伤组织中 ,还存在酶带Ⅳ ,说明它是催化器官发生途径的特有同工酶。     

一种便于机械化的微繁殖方法

用组织培养方法繁殖植物的一个主要的经济限制是,通过愈伤继代培养费工很大。继代培养操作的机械化将大大降低微繁殖的代价,并且使离体培养技术可以适用于范围更广的物种。目前大多数商品化的微繁殖方法都是采用一种茎-尖(Shoot-tip)方式繁殖植物。这种方式避免了可能产生体细胞变异的愈伤或悬浮培养阶段。但是,繁殖芽必须从基组织上切下来,然后手工转移到新鲜培养基上。这种操作技术要求高、劳动强度大,无法实行机械化。另一种方法是直接的体细胞胚发生法,用这种方法繁殖植物不会由于经过一个愈伤或悬浮培养阶段而产生变异。澳大利亚墨尔本大学的G.Maheswaran与E.G.Williams由三叶草     

金鱼草愈伤组织过氧化的酶活性及其同工酶变化

在不同激素比例的MS培养基上,金鱼草（Antirrhinum majus）茎愈伤组织主要有三种分化状态：a愈伤组织不分化;b以器官发生途径分化出不定芽和不定根;c通过胚胎发生途径形成胚状体。过氧化物酶活性与愈伤组织分化程度呈正相关。未分化愈合组织与分化芽,分胚状体及分化芽和根的愈伤组织酶活性呈线性递增关系,相对酶活力为1：3：5：6。在其同工酶谱中,三种状态的愈伤组织都具有酶带和Ⅰ和Ⅱ,表明这两种同工酶与细胞的增殖生长有联系。分化的愈伤组织经未分化愈伤组织多出现酶带Ⅲ,Ⅳ和Ⅴ,说明这三条酶带是影响分化的特异蛋白质。在分化芽的愈伤组织中,还存在酶带Ⅳ,说明它是催化器官发生途径的特有同工酶。     

发根农杆菌转化大豆的研究

本文利用发根农杆菌感染大豆不同外植体,在成熟胚靠近子叶节部位诱导产生毛状根。经冠瘿碱检测表明,毛状根及由此产生的愈伤组织均有甘露碱存在,说明Ri质粒的T-DNA已整合到大豆的转化根及愈伤组织中。转化根再生实验表明,在含NAA和IAA8mg/L的MS培养基上得到不定根的分化,MS和B_3培养基及6％蔗糖对转化丛生芽的诱导有利。转化的丛生芽在MS基本培养基上进一步长成小植株。     

两种生长素对毛叶茶插穗生根影响的研究

对野生毛叶茶一年生半木质化枝条,进行17个组合短穗扦插的试验,比较了两种植物生长激素,对促进插穗愈伤组织和根产生的作用,得到了如下的结论:①生长素对毛叶茶插穗愈伤组织的发生具有渐进性的作用,与空白对照相比,它们对插穗产生愈伤组织的速度不占明显的优势;在不同生长素组合间进行比较,生长素对愈伤组织的产生表现了明显的作用。在促使毛叶茶插穗产生愈伤组织的速率上,NAA 优于1BA,1BA 产生愈伤组织的速度较慢。②毛叶茶插穗属于较难生根的植物类型,一定浓度的生长素对插穗生根具有明显的促进作用。在单独使用1BA 和 NAA 的情况下,1BA 的生根作用优于 NAA。③复合生长素 NAA 和1BA 在促进毛叶茶插穗生根上具有互补性,即NAA 加快了毛叶茶插穗愈伤组织的产生,而1BA 把这种愈伤组织引向生根。因此适当浓度的这种复合生长素综合了两种生长素的优点,具有促进毛叶茶插穗早日生根的效果。     

香雪兰的直接与间接体细胞胚胎发生

香雪兰的体细胞胚胎发生可通过两种途径进行,即直接发生与间接发生。在直接发生方式中,体细胞胚直接来源于尚未完全分化的外植体表皮细胞;体细胞胚与母体组织以一种类似胚柄的结构相联系。间接发生方式中,体细胞胚的形成要经过一个愈伤组织阶段。以是否能形成体细胞胚分类,可将愈伤组织分为胚性和非胚性愈伤组织。以间接方式形成的体细胞胚是由胚性愈伤组织中的一种决定细胞发育来的。这种体细胞胚不具有类似胚柄的结构,而与母体组织共同形成一个复合体。体细胞胚具有自己独立的维管束系统,在脱离母体组织后能够独立发育成株。     

荞麦高频离体再生及发根农杆菌转化体系的建立

荞麦无菌苗下胚轴切段在不同激素配比的MS培养基上诱导愈伤组织,出愈率均为100％。在2．0mg/L2,4-D和1．5mg/L 6-BA组合下诱导产生的愈伤组织;转入2．0mg/L 6-BA和1．0mg/L KT的MS培养基,再生苗分化率在80％以上。根尖色体分析表明再生植株具一定的遗传稳定性。发根农杆菌A4转化荞麦下胚轴和子叶获得发状根,纸电泳检测所有随机取样测定的发状根均有相应冠瘿碱的存在。     

春小麦体细胞无性系变异的研究

利用RAPD技术检测春小麦愈伤组织和再生植株在离体培养过程中产生的变异,对培养不同时期的愈伤组织、再生植株检测结果表明,在小麦离体培养愈伤组织和再生植株中,RAPD谱带发生变化,表明发生了体细胞无性系分子水平变异．且具有明显的规律性和变异特点：杂交B代幼穗培养获得的愈伤组织发生变异的频率高于遗传稳定品种幼穗培养获得的愈伤组织。在愈伤组织培养75d时,在RAPD电泳图谱反映出高频率的亲本谱带缺失和非亲本谱带增加。不同基因型或外植体诱导的愈伤组织和再生植株中出现了相同的变异。与愈伤组织相比．再生植株中检测到的变异频率更高。不同外植体离体培养获得的再生植株,即使表型上没有观察到变异,但从RAPD图谱上却反映出变异的发生。表明RAPD技术可以快建方便地检测组织培养每个阶段出现的DNA水平变异。     

秦艽(Gentiana macrophylla Pall.)离体培养再生过程中体细胞胚的发生(简报)

本文以秦艽叶片和茎段作为外植体,通过离体培养对秦艽植株再生途径进行研究。愈伤组织在添加2mg/L 2,4-D和0.5mg/L BA的MS培养基上诱导,两周内可出现愈伤组织。愈伤组织在相同激素配比并附加500mg/L LH的MS培养基上继代。愈伤组织的分化在添加有0.1mg/L 2,4-D和0.5mg/L BA的MB培养基上进行。通过显微观测,疑似体细胞胚可以在叶片和茎段的愈伤组织上产生。形态学和组织学的分析进一步证实了秦艽离体再生过程中体细胞胚发生的现象。体细胞胚和合子胚一样,也经历球形、心形、鱼雷和子叶胚等发育时期。相对独立的结构说明秦艽的体细胞胚可能是单细胞来源。体细胞胚在愈伤组织的表面和内部都有出现。在本实验中,体细胞胚发生途径是在秦艽愈伤组织形成后观察到的唯一再生途径。     

烟草原生质体再生的愈伤组织与冠瘿组织分化的比较

普通烟草(Nicotiana tabacum L.)原生质体培养成植株的研究国内外已有不少报道。我们研究了红花大金元品种的烟草叶肉原生质体培养成植株的条件,并考虑到由根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)诱导的烟草冠瘿及其畸胎瘤与正常细胞有显著差别,它们在不加任何激素的培养基上细胞能继续分裂,增殖。如果冠瘿及畸胎瘤组织与原生质体再生的愈伤组织在分化芽和根方面也有差别,那末,利用它与正常细胞融合后,有可能提供更多的筛选杂种的条件,我们对这两种细胞在同样条件下分化芽和根的情况作了比较研究。     

北京郊区根癌土壤杆菌生物型及质粒类型的鉴定

我们从北京郊区姚树、山挑树、梨树、毛白杨上采集到的26个冠瘿中,分离并鉴定出6株根癌土壤杆菌(Agrobacterium tunefaciens)。通过对向日葵、蕃茄幼苗、落地生根的致瘤试验;在乳糖培养基上3-酮基乳糖的生成;石蕊牛奶反应;碳源利用;在Clark和Ncw与Kerr两种选择性培养基上的生长以及对向日葵、烟草冠瘿组织中Opin类物质种类的鉴定,证明：一、从桃树冠瘿中分离的根癌土壤杆菌Pp 5、即一6两株和从梨树冠瘿中分到的Py 10菌株均属生物I型,质粒属N。Palinc类型;二、从山挑树冠瘿分到的剐一7菌株属生物r型,质粒为Oetpine类型;三、从北京东北旺毛白杨分到的Pt-12 菌株属生物l型,质粒为Agropine类型;四、从大兴县毛白杨冠瘿分到的另一菌株p．-2j属生物b—ll中间型,质粒为Nopaline类型。     

睫毛萼凤仙花的组织培养及其愈伤组织的超微观察

试验以睫毛萼凤仙花无菌苗的叶片、茎和根为外植体进行离体培养,并对两种具有不同再分化能力的愈伤组织进行电镜超微观察.结果表明:在培养基MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L上愈伤组织诱导率达最高,叶片愈伤组织的诱导率为100%,茎的愈伤组织诱导率为67%,而根却没有愈伤组织的发生;叶片愈伤组织在MS+...     

应用生物反应器扩繁魔芋愈伤组织(简报)

以魔芋颗粒状愈伤组织为试材,用生物反应器进行扩繁愈伤组织研究.结果表明,魔芋愈伤组织在接种量10g/6L、通气量60L/h、搅拌转速100r/min的生物反应器中培养12d后,材料直径从接种时的0.3cm增大至0.8cm.文中还分析了生物反应器培养魔芋愈伤组织存在的难点.     

根癌农杆菌T-DNA在向日葵离体组织中的转移与表达

利用根癌农杆菌B6S3和T37菌株离体感染向日葵切伤的子叶、下胚轴外植体。感染处理的外植体与菌共培养三天后,在无激素条件下以60—96％的频率获得了离体转化的瘤组织。瘤组织在继代培养过程中具有激素自主性生长特性。在无激素培养基上瘤组织的生长速率显著高于正常愈伤组织。所有随机取样测定的瘤组织内均有相应冠瘿碱的存在。     

植物组织培养简报摘编

1.叶片切段在(1)上培养,先出现白点,以后白点处向上鼓起形成白色或淡绿色突起的愈伤组织,继代几次后,愈伤组织变成淡绿色,并可直接长出绿色嫩芽。如把愈伤组织转入(3)上继代培养,在每块愈伤组织上生出数个健壮的芽丛。