“α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测”实验优化

采用包埋法对"α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测"实验中固定化方法进行优化,缩短实验所需时间、简化学生操作步骤,使实验现象更加明显。     

“α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测”实验改进

新课程标准倡导探究性学习,实验是学习生物技术的有效途径之一。本实验按照教材中的实验步骤需要2 h左右,无法满足高中课堂教学要求。另外本校前几届师生根据此步骤进行实验,收集的流出液加入碘液混匀后显黄色而非红色。从搅拌时间、蒸馏水洗涤的体积、流速控制等方面对本实验进行了改进,将实验时间控制在30 min左右,以便学生在课堂中完成相关实验;并对以往实验中遇到的一些疑问进行了探讨。     

固定化解淀粉芽孢杆菌α－淀粉酶的研究

本文对固定化α－淀粉酶进行了初步的研究,固定化酶采用海藻酸钙凝胶球来包埋一定纯度的解淀粉芽孢杆菌α－淀粉酶,并且把固定化酶的特点和性质同游离酶进行了比较。同游离酶相比固定化酶明显提高了酶的耐热性和贮藏稳定性,游离酶的最适作用温度为６０℃,而固定化酶最适温度为７０℃。     

“α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测”实验探讨

通过对α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测实验条件和实验步骤进行优化,使实验现象更明显,实验时间更短,实验操作更简便、明确。     

海洋耐高温酸性α-淀粉酶水解玉米淀粉的研究

为开发适用于工业生产的新型酶制剂,以实验室自主构建的基因工程菌所产的新型海洋耐高温酸性α-淀粉酶为液化酶,以玉米淀粉液化后的DE值为指标,研究影响玉米淀粉的液化的因素,确定该酶水解玉米淀粉的最佳工艺条件。新型海洋耐高温酸性α-淀粉酶最佳的工艺条件为温度85℃、时间90 min、粉浆浓度250 g/L、酶用量32 U/g淀粉。     

α淀粉酶与糖化酶的共固定化研究

以纤维素为载体用重氮化法同时固定了糖化酶和α淀粉酶,确定了共固定化的最适条件,研究了共固定化酶的性质,发现共固定化酶较固定化单酶能更好地发挥协同效应,能在较低温度下将淀粉一步水解为葡萄糖。共固定化酶在３０℃下的操作半寿期可达９２０小时。     

微生物源α-淀粉酶抑制剂研究进展

微生物源α-淀粉酶抑制剂能特异性抑制哺乳动物和某些微生物的α-淀粉酶,在医药上有重要的应用价值,因而成为近年来新的研究热点.论述了国内外分离纯化的微生物源α-淀粉酶抑制剂,对其蛋白、基因结构、作用机理及应用前景等作了概述.     

盾叶薯蓣淀粉对枯草芽孢杆菌α-淀粉酶活性的影响

以盾叶薯蓣淀粉为惟一碳源 ,探讨不同淀粉浓度对 1株污染地分离菌 (BacillussubtilisHY 0 2 )α 淀粉酶活性的影响。 3 2℃恒温摇床发酵实验表明 :淀粉浓度在 1 .75 %时枯草芽孢杆菌α 淀粉酶活性、细菌数及淀粉消耗量均较 0 .5 % ,1 %实验组明显增加。 3 2℃温度下 ,淀粉浓度与枯草芽孢杆菌α 淀粉酶活性成正相关 ,为选择微生物法解决淀粉导致的水源污染提供了依据。     

α淀粉酶与糖化酶的共固定化研究

经纤维素为载体用重氮化法同时固定了糖化酶和α淀粉酶,确定了共固定化的最适条件,研究了共固定化酶的性质,发现共固定化酶较固定化单酶能更好地发挥协同效应,能在较低温度下将淀粉一步水解为葡萄糖,共固定化酶在３０℃下的操作半寿期可达９２０小时。     

真菌α-淀粉酶的研究进展

真菌α-淀粉酶在现代淀粉糖浆、焙烤制品、啤酒酿制及生料酒精等行业已得到广泛的应用。随着现代制糖工业与发酵工业的发展及其对真菌α-淀粉酶的使用需求,使得真菌α-淀粉酶在现代工业酶制剂中占有重要地位。对真菌α-淀粉酶的研究和利用,为满足国内市场需求、调整我国酶制剂工业结构和带动相关食品或发酵行业的发展等具有重要意义。从真菌α-淀粉的催化机制、来源、异源表达及应用等方面进行了介绍。     

接枝淀粉载体固定化糖化酶的研究

合成了淀粉接枝丙烯腈及烯酰胺的两亲性高分子化合物,并以此为载体,用物理吸附方法固定化了糖化酶,最适偶联条件研究表明：缓冲液的浓度,ＰＨ值及吸附时间和加酶量都对固定化酶活力,比活有一定的影响,有最适固定化条件下,固定化酶的活力为１５００Ｕ／ｇ干胶,蛋白载量为２５ｍｇ／ｇ干胶,比活为６０Ｕ／ｍｇ蛋白,比天然酶的比活提高６倍,最适反应温度比天然酶提高１０℃。无底物存在下,固定化酶在５５℃的半衰期为２４ｈ     

α-淀粉酶AmyP中淀粉结合结构域的鉴定

【目的】检测具有生淀粉降解活性的新型α-淀粉酶AmyP是否具有淀粉结合结构域(SBD)。【方法】通过结构域预测和序列分析, 推测AmyP的C端是一个SBD。将这段序列克隆、表达和重组蛋白纯化后, 采用亲和电泳和生淀粉吸附两种方法对重组表达的蛋白进行研究。【结果】AmyP的C端序列是一个新型的SBD, 根据序列特征可以将其划分在碳水化合物结合结构域(CBM) 20家族。该SBD与生大米淀粉的吸附能力最强, 生玉米淀粉次之, 不能与生小麦淀粉、生马铃薯淀粉和生绿豆淀粉吸附。【结论】α-淀粉酶AmyP在蛋白C端具有一个SBD, 有助于理解AmyP快速偏好性降解生淀粉的能力。     

固定化解淀粉芽孢杆菌a—淀粉酶的研究

本文对固定化ａ－淀粉酶进行了初步的研究,固定化酶采用海藻酸钙凝胶球来包埋一定纯度的解淀粉芽孢杆菌ａ－淀粉酶,并且把固定化酶的特点和性质同游离酶进行了比较。同游离酶相比固定比酶明显提高了酶的耐热性和贮藏稳定性,游离酶的最适作用温度为６０℃,而固定化酶最适温度为７０℃。     

融合淀粉酶AmyP-Clo对大米生淀粉的高效降解

【目的】获得能高效降解大米生淀粉的α-淀粉酶。【方法】将来源Clostridium butyricum T-7的α-淀粉酶的淀粉结合结构域与能快速偏好性降解大米生淀粉的α-淀粉酶Amy P的催化结构域融合重组表达。【结果】融合蛋白Amy P-Clo保留了野生型Amy P催化优势的基础上,对大米生淀粉的比活为(373.9±8.4)U/mg,4 h内对5%大米生淀粉的最终降解率为(42.7±1.1)%,对大米生淀粉的最高结合率为(71.1±1.6)%,这些数据相比Amy P分别提高了3.1、2.8和1.3倍。【结论】融合蛋白Amy P-Clo能高效降解生大米淀粉,是一个具有优良应用价值的酶。     

高温α-淀粉酶生产菌种选育的研究

以地衣芽孢杆菌B．198为出发株,经不同诱变剂反复诱变和自然选育,得到突变株A.404l,其产高温α-淀粉酶为出发株的100倍。在摇瓶培养条件下,酶活力达200u／ml．是一株无孢子并带有Rifr、Met-、Arg-标记的抗分解代谢阻遏突变株。初步纯化的A1041α-淀粉酶最适反应pH为5—7,晟适反应温度90—95℃,于90℃、60分钟处理不失活,表明突变株A．4041所产α-淀粉酶是高温淀粉酶,具有工业生产价值。     

接枝淀粉载体固定化糖化酶的研究

合成了淀粉接枝丙烯腈及丙烯酰胺的两亲性高分子化合物,并以此为载体,用物理吸附方法固定化了糖化酶。最适偶联条件研究表明：缓冲液的浓度,ｐＨ值及吸附时间和加酶量都对固定化酶活力,比活有一定的影响。在最适固定化条件下,固定化酶的活力为１５００Ｕ／ｇ干胶,蛋白载量为２５ｍｇ／ｇ干胶,比活为６０Ｕ／ｍｇ蛋白,比天然酶的比活（８．０Ｕ／ｍｇ蛋白）提高６倍。最适反应温度比天然酶提高１０℃（天然酶最适反应温度为５０℃）．无底物存在下,固定化酶在５５℃的半衰期为２４ｈ,而天然酶只有１ｈ;有底物存在下,固定化酶在５５℃的半衰期为２２０ｈ,４５℃的操作半衰期由外推法算得为６９天,而且该载体对糖化酶有一定的保护作用,当固定化酶在低于５５℃热处理一段时间后,对酶活力有激活作用,酶活力最大可提高４０％。该载体合成简单,固定化方法简单,步骤少,因而为工业上应用提供了一种新的可能性。     

解淀粉芽孢杆菌中温α-淀粉酶基因的克隆、表达与酶学性质分析

以中温α-淀粉酶生产菌株Bacillus amyloliquefaciens M23基因组DNA为模板。PCR扩增得到了2．0kb α-淀粉酶基因全长序列。该基因由上游启动子220bp,结构基因1544bp和终止序列320bp构成。将无信号肽的α-淀粉酶结构基因amyQ,克隆入表达载体pET28a,转化E．coli BL21（DE3）,经诱导,测定α-淀粉酶活性。结果表明：α-淀粉酶基因amyQ获得了活性表达,酶活力为2．297U／mL,SDS-PAGE电泳结果显示出分子量约为58kDa特异性蛋白质条带。酶学性质分析表明,重组α-淀粉酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为6．5,在60℃保温15min保持85％以上活性,超过15min,酶迅速失活,在pH5．5～10．0环境下稳定。水解产物分析表明：淀粉水解终产物主要为麦芽寡糖和糊精和少量葡萄糖。     

小麦α-淀粉酶抑制剂减肥作用的实验研究

研究小麦中α-淀粉酶抑制剂对肥胖症大鼠的影响。将肥胖大鼠随机分为以下5组:模型对照组、阳性药对照组(曲美3 mg/kg),α-淀粉酶抑制剂45,15,5 mg/kg 3个剂量组。其中阳性药对照组和AI组从造模当天起每天ig给药一次,模型空白组则ig同体积的生理盐水,连续灌胃4周,动态检测质量、体长。在实验结束时,各给药组与模型组相比较,Lee指数和脂肪湿重都有不同程度的降低,其中高剂量组变化明显,与曲美组比较效果相当。高、中剂量的α-淀粉酶抑制剂能有效地减少营养性肥胖大鼠的质量和体内脂肪,且AI的减肥效应与其剂量呈正相关性。