环介导恒温扩增法快速检测海产品中的副溶血弧菌

副溶血弧菌广泛分布于海水或海产品中,人类摄入或接触污染的水源和食物易引起感染。近年来,有关致病性弧菌引起腹泻的报道逐渐增多,但GB标准的细菌学诊断方法检测周期长达1周左右,而且操作较为复杂,难以满足控制疾病暴发和传播的需要,就这一现状,建立了一套不仅快速、准确,而且操作简便、不依赖昂贵仪器的检测方法,应用于海产品中副溶血弧菌快速检测。采用环介导恒温扩增方法(LAMP),针对副溶血弧菌的gyrB基因设计特异引物,进行恒温扩增。使用该方法最低检出限达到101CFU/mL,灵敏度可以达到0.1pg副溶血弧菌基因组DNA,为海产品中副溶血弧菌的检测提供了一个新的辅助方法。     

环介导恒温扩增技术在呼吸道感染常见细菌临床检测中的应用评价

【背景】传统的细菌培养为下呼吸道感染诊断的金标准,但其检验周期长且敏感性低。环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术方法简单、检测快速,可应用于临床呼吸道感染常见细菌的快速检测。【目的】评估环介导恒温扩增技术对呼吸道感染常见7种细菌的检测能力。【方法】设计呼吸道感染常见的7种病原菌肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)、卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis,MC)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae,HI)的环介导恒温扩增特异性引物,建立检测7种病原菌的LAMP方法。通过梯度稀释的方法检测敏感性,交叉反应实验检测特异性。回顾性分析2019年11月–2021年3月北京大学人民医院的2...     

环介导恒温扩增法快速检测短小芽孢杆菌

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)是一种能引起食源性疾病的腐败菌,对其进行快速检测具有重要意义。针对短小芽孢杆菌木聚糖(xynA)基因,设计了4条特异性引物(两条内引物和两条外引物),通过条件优化,首次将一种新颖的核酸扩增技术——环介导恒温扩增技术应用于短小芽孢杆菌的快速检测。采用该技术,63℃温育1h的条件下扩增短小芽孢杆菌DNA,琼脂糖凝胶电泳得到特异性梯度条带。PCR和LAMP的检测灵敏度分别约为162和16.2拷贝每反应。结果表明,该方法检测短小芽孢杆菌特异性强、灵敏度高、操作简便、检测成本低,1h即可完成,有望发展成为快速检测短小芽孢杆菌的有效手段。     

DNA环介导恒温扩增技术快速检测霍乱弧菌

霍乱弧菌是一种重要的食源性致病菌,主要引起急性肠道传染病,其快速检测具有重要意义。根据霍乱弧菌的mdh管家基因序列,设计2对特异性检测引物,利用DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),经反应体系优化,成功建立了霍乱弧菌的LAMP快速检测方法。该方法最佳反应温度为65℃,60min完成检测,对培养菌的检测限为25CFU/mL,污染食品中霍乱弧菌的检测限为32CFU/g。对33株同种或近源细菌进行LAMP检测,仅霍乱弧菌得到阳性扩增。LAMP方法实践应用结果表明,对1057份虾、蟹、牡蛎、肉类、人腹泻物等样本进行检测,共检出85份阳性,与国际标准(ISO TS21872-1-2007)检测结果的符合率为100%。结果表明,本研究建立的霍乱弧菌LAMP检测方法特异性强、灵敏度高、操作简便,有利于霍乱弧菌疫情的监测。     

环介导恒温扩增对莱姆病病原伯氏疏螺旋体的分型鉴定

使用环介导恒温扩增技术,基于莱姆病病原伯氏疏螺旋体的外膜蛋白A(OspA)基因,针对伯氏疏螺旋体不同的基因型设计特异性引物,对国内主要的莱姆病病原伯氏疏螺旋体的3个基因型进行分型鉴定。研究结果表明,设计的引物具有良好的特异性,可以对狭义伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi sensu strict)、嘎氏疏螺旋体(B.afzelii)和伽氏疏螺旋体(B.garinii)进行分型鉴定。伯氏疏螺旋体的分型鉴定可以对不同临床症状莱姆病患者的治疗和莱姆病的控制提供一定的依据。     

环介导的恒温扩增技术及其在病毒性疾病诊断中的应用

环介导的恒温扩增（LAMP）是近年来新兴的一种快速DNA扩增技术,其基本原理在于利用4个特殊设计的引物和具有链置换活性的DNA聚合酶,在恒温条件下对靶序列进行扩增。LAMP技术具有特异性强、敏感性高、反应迅速、设备简单等特点,在人类病毒性疾病的诊断领域有着广泛的应用。     

环介导恒温扩增法检测肺炎链球菌的研究

目的 建立环介导恒温扩增(LAMP)检测肺炎链球菌的方法.方法 用LAMP技术扩增肺炎链球菌菌株,并应用50例临床标本采用传统培养法、PCR法、LAMP法进行检测,比较3种方法的检出率,同时检测方法特异性和灵敏度.结果 所测肺炎链球菌均获扩增产物,对其他非肺炎链球菌无交叉反应.LAMP检测灵敏度可达102 CFU/mL.50例临床标本使用LAMP法检出9例肺炎链球菌阳性(18.0％),使用传统培养法检出阳性4例(8.0％).结论 LAMP法较传统培养检测方法特异性强、灵敏度高、操作方便、快速,适合临床标本的肺炎链球菌检测.     

重组酶介导扩增技术及其在病原微生物快速检测中的应用进展*

建立快速的病原学诊断方法对动物疫病的预防和控制、公共卫生安全等方面具有重要意义。重组酶介导扩增法(RAA)是一种新型恒温体外核酸扩增技术,在体外较低温度下就可以实现对DNA或RNA的快速扩增。RAA具有操作简便、快速、准确、节能、便捷等优点。重组酶、单链结合蛋白和DNA聚合酶是该技术的三大核心物质,利用这三种物质可替代传统PCR的热循环解链过程。该技术将会在病原微生物检测方面发挥重要作用。对RAA技术及其在病原检测方面的应用进行了综述,以期为相关领域的研究提供参考。     

一种新的高效快速核酸恒温扩增方法--LAMP法

介绍一种新式恒温核酸扩增方法LAMP(Loop—Mediated Isothermal Amplification)法,其原理是采用四条特异引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶,在65℃左右对核酸进行扩增。短时间扩增效率可达到10^9-10^10个拷贝。LAMP法具有高特异性、高效性、快速、廉价、易检测等特点。预计在临床诊断、食品卫生检疫及微阵列基因芯片的开发上将有广阔的应用前景。     

利用环介导恒温扩增法快速检测溶组织梭菌

目的:利用环介导恒温扩增技术(LAMP),设计快速检测溶组织梭菌的方法,研究其反应特性,以期能应用于气性坏疽溶组织梭菌感染的临床现场检验.方法:通过基因比对与引物设计,设计针对溶组织梭菌的环介导恒温扩增检测方法.然后检测该方法对溶组织梭菌及其他干扰菌的扩增情况,对其特异性进行评价.检测该方法对不同浓度溶组织梭菌的扩增情况,对其灵敏度进行评价.最后与全自动细菌培养法进行比较,评价其与常规检测方法的可比性.结果:本LAMP检测方法只针对溶组织梭菌有扩增,对其他15种菌不扩增,显示出良好的特异性.对溶组织梭菌的最低检测限为1× 101CFU/ml,显示其灵敏度较高.与全自动细菌培养法相比,有良好的可比性(P＜0.05),很高的灵敏度(92.6％)、特异性(98.1％)及准确度(97.3％).结论:本试验设计出了针对溶组织梭菌的LAMP检测方法,该LAMP检测方法具有良好的特异性较高的灵敏度,能够用于溶组织梭菌的临床现场检验.