九香虫生物学的初步观察

<正> 九香虫Aspongopus chinensis Dallas是半翅目蝽科、九香虫亚科(Dinidorinae)的一种药用价值颇大的昆虫,主治“膈脘滞气、脾肾亏损,壮元阳”。有关九香虫生物学的研究不多,著者结合“中国半翅目昆虫经济志”等任务,于1980—1981年在贵阳市花溪区对该虫的生活史及生活     

九香虫滞育期脂肪、糖类和蛋白质含量的变化规律

【目的】研究九香虫Aspongopus chinensis Dallas滞育期体内的脂肪、糖类(总糖、糖原、海藻糖)、蛋白质含量的变化,探索体内营养物质变化与九香虫滞育的关系。【方法】本研究利用索氏提取法、蒽酮比色法和BCA蛋白定量试剂盒分别测定了九香虫滞育期(10月-次年4月)和滞育解除后(次年5月)其体内的脂肪、糖类和蛋白质含量变化。【结果】九香虫滞育期脂肪含量随着时间推移逐渐降低,到滞育后期(4月)脂肪含量最低为19.51%,与滞育初期(10月)的40.55%相比存在显著性差异(P<0.05);糖类在滞育初期(10月)开始积累,直至11月后不断减少至4月,滞育解除后(5月)糖类的含量又显著增高(P<0.05);蛋白质含量从滞育初期(10月)开始缓慢增加,直至3月开始下降,滞育解除后蛋白质含量显著低于滞育期(P<0.05)。【结论】九香虫滞育期体内脂肪、糖类和蛋白都发生了不同程度的变化。脂肪含量降低,糖类的含量先升后降,蛋白质含量先增后减是九香虫滞育过程中主要的生理特征。     

不同方法处理的九香虫对人胃癌SGC-7901细胞体外作用比较及其抑癌组分分布

本实验探讨冷冻和传统中药炮制方法处理的九香虫对胃癌细胞增殖的影响及九香虫抑癌活性组分的体内分布。体外培养人胃癌SGC-7901细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)观察不同方法处理的九香虫各组分水溶液对SGC-7901细胞的体外抑制作用。结果发现,炮制九香虫蛋白浓度为50和100mg·L~(-1)时作用48h对SGC-7901细胞生长具有抑制作用,抑制率分别为13.45%和14.68%,而浓度达到200和400mg·L~(-1)时对SGC-7901细胞生长具有促进作用,抑制率为-7.94%和-82.50%;冷冻处理下九香虫不同浓度对SGC-7901细胞生长具有显著的抑制作用,该处理组蛋白浓度为50、100、200和400mg·L-1时抑制率分别为0.49%,3.82%,4.42%,39.33%。选取九香虫整虫及分解后的各部位处理组最大作用浓度比较,增殖抑制率为血淋巴腹部整虫头部。因此,冷冻处理的九香虫对胃癌细胞抑制率更高,且在该条件下九香虫的抑癌活性组分主要分布于血淋巴和腹部。     

九香虫保幼激素环氧水解酶基因克隆、生物信息学及表达分析

[目的]保幼激素环氧水解酶(Juvenile hormone epoxide hydrolase,JHEH)是昆虫体内保幼激素(Juvenile hormone,JH)的主要降解酶.本文旨在分析九香虫Aspongopus chinensis Dallas保幼激素环氧水解酶基因序列(AcJHEH)信息,探索其在九香虫生长发育过程中的作用.[方法]以九香虫成虫的cDNA为模板,采用RT-PCR技术克隆获得AcJHEH基因序列,并利用生物信息学软件对其编码蛋白的理化特性、结构特征和系统进化进行分析;采用qRT-PCR技术检测并分析九香虫不同龄期和不同组织中AcJHEH的相对表达量.[结果]成功获得了AcJHEH的完整开放阅读框ORF序列,全长均为1 363 bp,共编码453个氨基酸,预测分子量为51.74 ku,等电点(pI)为7.66,分子蛋白式C2414H3683N581O653S14,含有N-端跨膜基序XWG、催化三联体、保守基序HGWP和2个酪氨酸,属于环氧水解酶家族.系统进化树分析表明,AcJHEH与茶翅蝽Halyomorpha halys的JHEH聚为一支,再与同为半翅目的臭虫Cimex lectulariu和绿盲蝽Apolygus lucorum的JHEH聚为一类.荧光定量PCR结果显示,AcJHEH在九香虫不同发育阶段和各组织中均有表达,且脂肪中的表达量极显著高于其它组织(P＜0.001);滞育九香虫成虫表达量最高,其次为4-5龄若虫都极显著高于其它发育阶段(P＜0.001).[结论]九香虫JHEH属于环氧水解酶家族,确定为保幼激素环氧水解酶.依据qPCR结果推测AcJHEH通过改变九香虫体内保幼激素浓度来影响九香虫4-5龄若虫蜕皮发育、成虫生殖系统发育和滞育等.     

关于小九香虫的种类问题

九香虫(Aspongopus chinensisDallas)是我国有名的一种药用昆虫,属半翅目蝽科九香虫亚科,俗名“瓜黑蝽”或“黑兜虫”。九香虫早在李时珍(1590)所著《本草纲目》卷三的十九虫部中已有如下记载:“九香虫产于贵州永宁卫赤水河中。大如小指头,状如水黾,身青黑色。至冬伏于石下,土人多取之,以克人事。至惊蛰后即飞出,不可用矣。……[主治]膈脘滞气,脾肾亏损,壮元阳。”从中可以看出,供药用的九     

CCK-8法检测九香虫血淋巴对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用

为了明确九香虫血淋巴对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用,本文利用Bradford法检测九香虫血淋巴浓度,用不同浓度的九香虫血淋巴处理体外培养的MCF-7细胞,采用CCK-8法检测九香虫血淋巴对MCF-7细胞的抑制作用。结果表明:九香虫血淋巴能显著抑制人乳腺癌MCF-7细胞的生长,且对MCF-7的抑制率呈时间、剂量依赖关系。     

九香虫交配产卵节律研究

[目的]明确中国传统药食两用资源昆虫九香虫Aspongopus chinensis Dallas繁育特性,为其人工养殖奠定基础。[方法]九香虫实验室内饲养观察其交配产卵的时间节律,分析其交配次数与时长的关系。[结果]研究表明九香虫一天中的交配频次近呈"V"形,两个交配高峰分别为00:00—2:00和20:00—22:00,在10:00—16:00一般不发生交配;在交配总时长未达到15 h以前,交配时长随雌虫的交配次数的增加而增加,交配时长为(8.92±1.97)~(15.36±2.85)h;产卵一般在15:00—20:00进行,大约5~6 min产下一枚卵,卵呈圆柱形,产卵持续1~2h。[结论]九香虫交配产卵具有显著节律性,雌虫的交配次数会显著影响其交配时长。     

九香虫多糖提取条件筛选及其对人乳腺癌HCC1937细胞的抑制作用

【目的】推进中药九香虫Aspongopus chinensis开发与利用,探究九香虫多糖对人乳腺癌HCC1937细胞的作用效果。【方法】采用单因素实验和正交试验探究水提醇沉法提取九香虫多糖的最优条件,基于九香虫多糖提取率来确定最佳液料比、提取温度、提取时间和提取次数;CCK-8法检测0, 2, 4, 6, 8和10 mg/mL九香虫多糖作用后24和48 h时对人乳腺癌HCC1937细胞增殖的影响;0, 4和8 mg/mL九香虫多糖处理HCC1937细胞,0, 24和48 h时倒置显微镜下观察HCC1937细胞形态并于24和48 h时利用Hoechst 33258染色检测HCC1937细胞凋亡,24 h时利用流式细胞术检测HCC1937细胞的细胞周期并利用Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。【结果】正交试验结果表明,九香虫多糖的最佳提取条件为：液料比40 mL/g、提取温度90℃、提取时间3 h和提取次数3次,在上述条件下九香虫多糖提取率最高,为5.067%±0.071%。4, 6, 8和10 mg/mL九香虫多糖能够显著抑制HCC1937细胞增殖;8 mg/mL九香虫多糖阻...     

九香虫水煎液主要成分分析及对乳腺癌细胞增殖的抑制作用

为检测九香虫水煎液对乳腺癌细胞体外增殖的影响及分析其主要成分,通过制备九香虫水煎液,利用MTT法、形态学观察及细胞划痕实验检测九香虫水煎液对人乳腺癌细胞MDA-MB-453及小鼠乳腺癌细胞4T1增殖和迁移的影响,采用GC-MS技术分析九香虫水煎液的主要化学成分。结果表明,九香虫水煎液对人乳腺癌MDA-MB-453及小鼠乳腺癌4T1细胞的体外增殖具有显著的抑制作用,且呈剂量相关性,IC 50分别为0.034、0.101 g/mL,其对4T1细胞的迁移具有抑制作用。九香虫水煎液对乳腺癌细胞的增殖及迁移抑制作用可能与其中含有具抗肿瘤功效的反丁烯二酸、3,4-二羟基苯甲酸、腺苷、尿苷、棕榈酸等物质相关。     

九香虫抗菌肽CcAMP1的分离纯化和抗菌活性检测

【目的】从药用昆虫九香虫 Coridius chinensis 中分离纯化抗菌肽,为进一步开发九香虫抗菌肽资源及深入挖掘九香虫的药用功能奠定基础。【方法】用大肠杆菌Escherichia coli 和金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 混合物作诱导源刺激九香虫产生抗菌肽,对血淋巴进行提取、凝胶过滤层析、固相萃取及反相色谱纯化,活性组分经质谱测定。对分离得到的这种抗菌肽进行人工合成,并进行抗菌活性检测。【结果】本研究获得一种九香虫抗菌肽CcAMP1,由17个氨基酸残基组成,分子量为1 997.37 u,带1个正电荷,表面有5个疏水氨基酸。对人工合成的CcAMP1进行抗菌活性检测表明,该抗菌肽与九香虫血淋巴一样对金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌和大肠杆菌等革兰氏阴性菌都有较好的抗菌活性,且对革兰氏阴性菌的抗菌活性更强。【结论】从九香虫中分离得到具有较强抗菌活性的阳离子抗菌肽CcAMP1,有较大的开发利用价值。     

九香虫醇提物对运动大鼠骨骼肌抗氧化酶活性及其基因表达水平的影响北大核心CSCD

旨在探讨补充九香虫醇提物对运动大鼠骨骼肌抗氧化酶活性及其基因表达水平的影响。对大负荷游泳训练大鼠补充剂量分别为各组平均体重的0.5、1.0和1.5 g/kg的九香虫提取物,在8周大负荷训练结束后测定骨骼肌抗氧化酶活性与表达水平。8周大负荷训练后,相比单纯大负荷运动组,补充九香虫提取物组SOD、CAT、GST三种抗氧化酶活性均显著增加,同时3种酶的编码基因表达水平也显著上调。说明补充九香虫提取物提高运动大鼠骨骼肌抗氧化酶系活性的机理之一是上调了编码基因的表达水平。     

九香虫血淋巴对肿瘤细胞凋亡相关蛋白表达的影响

探索九香虫血淋巴诱导肿瘤细胞凋亡的作用通路。利用Bradford法检测九香虫血淋巴浓度并将其作用于体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞、人胃癌SGC-7901细胞,Western blot法检测经九香虫血淋巴干预后肿瘤细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2、Bax等的表达。结果显示,九香虫血淋巴作用的SGC-7901、MCF-7细胞中Caspase-3、Caspase-9、Bax蛋白的表达较对照组细胞明显上调;两种细胞的Bcl-2蛋白,较对照组细胞表达明显下调;两种细胞的Caspase-8蛋白,较对照组细胞表达无明显差异。结果表明,经九香虫血淋巴诱导的SGC-7901、MCF-7细胞可能通过触发其线粒体凋亡途径使肿瘤细胞发生不可逆的凋亡。     

九香虫醇提物对运动大鼠骨骼肌抗氧化酶活性及其基因表达水平的影响

旨在探讨补充九香虫醇提物对运动大鼠骨骼肌抗氧化酶活性及其基因表达水平的影响。对大负荷游泳训练大鼠补充剂量分别为各组平均体重的0.5、1.0和1.5 g/kg的九香虫提取物,在8周大负荷训练结束后测定骨骼肌抗氧化酶活性与表达水平。8周大负荷训练后,相比单纯大负荷运动组,补充九香虫提取物组SOD、CAT、GST三种抗氧化酶活性均显著增加,同时3种酶的编码基因表达水平也显著上调。说明补充九香虫提取物提高运动大鼠骨骼肌抗氧化酶系活性的机理之一是上调了编码基因的表达水平。     

基于网络药理学的九香虫水煎液抗肝癌成分及可能机制分析

【目的】运用网络药理学探究九香虫Aspongopus chinensis水煎液治疗肝癌的成分及可能作用机制。【方法】在前期测定的九香虫水煎液成分基础上,运用Pubchem、SwissTargetPrediction等数据库收集排名前50的化合物及其可能靶点,GeneCards、Drugbank、DisGeNET等数据库获取肝癌治疗的可能靶点,Cytoscape 3.9.0构建药物-成分-靶点-疾病网络与成分-靶点-通路网络,STRING、cytoHubba等构建PPI网络,Metascap进行KEGG与GO富集分析,得到治疗的关键通路,进而得到关键成分和靶点。【结果】九香虫水煎液可能通过腺苷等15种成分,作用于EGFR、MAPK1、CCND1等13个靶点,调控20条癌症相关通路发挥其对肝癌的重要治疗作用。【结论】九香虫水煎液可能通过多成分、多靶点、多通路发挥治疗肝癌的作用。     

九香虫血淋巴及其纯化蛋白抑菌活性的研究

对九香虫AsporgopuschinensisDallas血淋巴及其血淋巴蛋白质分离物的抗菌活性进行了研究,抗菌活性检测指示菌为大肠杆菌Escherichiacoli和金黄色葡萄球菌Staphilocalliesacereus。测定结果表明,九香虫血淋巴及其离心上清液都具有明显的抗菌活性。用凝胶过滤法从血淋巴蛋白分离提纯获得一种小分子肽,SDS PAGE电泳为单一带,分子量约为1～1 4 4kD。该小分子蛋白对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有抑菌作用,与血淋巴对2种细菌的抗菌性一致,表明其是九香虫血淋巴中具抗菌作用的主要物质之一。     

五种不同组织结构特点昆虫的总RNA提取效率比较

【目的】比较RNAeasy抽提试剂盒法和Trizol提取法对不同种昆虫总RNA提取的效率,为不同种昆虫总RNA提取方法选择提供参考。【方法】采用RNAeasy抽提试剂盒法和Trizol提取法分别对九香虫Aspongopus chinensis Dallas、白背飞虱Sogatella furcifera Horváth、中华蜜蜂Apis cerana cerana、黄蜻Pantala flavescens和蒿金叶甲Chrysolina aurichalcea进行总RNA提取,通过紫外分光光度计测定总RNA吸光度(OD)值,利用琼脂糖凝胶电泳检测等方式对RNA质量进行评估。【结果】2种提取方法提取不同昆虫总RNA中,Trizol法提取白背飞虱(同翅目)、蒿金叶甲(鞘翅目)和九香虫(半翅目)的总RNA浓度较高,但纯度较低。电泳结果显示总RNA有降解,完整性较差,RNAeasy抽提试剂盒法提取黄蜻(蜻蜓目)和中华蜜蜂(膜翅目)的浓度较低,纯度较高,电泳结果显示完整性较好。【结论】Trizol法更适合提取小型或几丁质含量高的昆虫,RNA抽提试剂盒法更适合几丁质含量较少、腹软且有大量体液的昆虫总RNA提取。     

九香虫形态及生物学特征研究

通过建立网室近自然实验种群,结合野生个体观察记述了云南玉溪九香虫Coridius chinensis (Dallas)种群的各虫期形态特征、在云南玉溪红塔区的年生活史、寄主范围、取食偏好、成虫及若虫的行为习性,为该虫的保育和规模化养殖提供依据。结果显示,九香虫卵有绿色和粉色两种生态型,若虫有5个龄期;在云南玉溪红塔区1年仅发生1代,仅以成虫态越冬;红塔区九香虫野生个体主要以佛手瓜和南瓜等葫芦科植物为食;取食偏好选择试验表明该虫最喜取食葫芦,冬瓜和南瓜次之;雌雄成虫可多次交配多次产卵,单雌单次平均产卵量为16.3±6.0粒。研究表明,云南玉溪红塔区的九香虫种群为典型的一化性昆虫,休眠期可达8个月;该虫食性较广,可取食多科植物,但以葫芦科瓜类为主;羽化成虫每年9月中旬至10月上旬陆续从佛手瓜、南瓜等寄主植物上迁至枯树皮下、柴堆等隐蔽场所越冬,翌年4月下旬陆续解除休眠,迁至佛手瓜、南瓜等作物上取食繁殖。     

九香虫(椿象)体内可培养细菌的多样性分析

【目的】认识药用昆虫九香虫(Aspongopus chinesis Dallas)成虫体内可培养细菌资源多样性。【方法】运用纯培养法、反转录重复因子扩增(BOXA1R-PCR)分析技术、16S r RNA基因测序和系统发育分析对样品中可培养细菌进行多样性研究,测定了分离菌株的抗菌特性、吲哚乙酸(IAA)含量和产淀粉酶活性等指标。【结果】通过6种不同培养基共分离得到52株菌落特征不同的细菌菌株。基于菌落特征和BOXA1R-PCR图谱选取12株代表菌株用于16S r RNA基因序列测定。16S r RNA基因序列系统发育分析显示,52株菌株分属于芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)和伯克霍尔德氏菌属(Burkholderia)4个属,其中芽孢杆菌属(Bacillus)为优势菌属。分离到的52株细菌有44株(占总分离菌株的84.6%)表现出对供试病原菌具有较好的抑制作用,高达94.2%的分离菌株能产IAA,有43株(占总分离菌株的82.7%)表现出淀粉酶活性。【结论】九香虫内细菌种群较为多样,具有潜在应用价值。     

利用红外相机对四川白水河国家级自然保护区鸟兽资源的初步调查

2017年5月至2018年5月, 我们在四川白水河国家级自然保护区内设置红外相机对地面活动鸟兽进行了初步调查。布设在24个位点的24台相机累计工作3,832天, 共获得可识别物种的独立有效照片535张。经鉴定, 兽类有4目10科17种, 鸟类有2目4科10种。其中, 国家I级重点保护野生动物5种, 国家II级重点保护野生动物8种, 中国豪猪(Hystrix hodgsoni)、宝兴歌鸫(Turdus mupinensis)和黑顶噪鹛(Trochalopteron affine)为保护区新记录种, 而大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)为汶川地震后首次拍到。兽类中, 花面狸(Paguma larvata)、黄喉貂(Martes flavigula)和中华斑羚(Naemorhedus griseus) 3种动物的独立有效照片总数占全部兽类独立有效照片数的50.2%。鸟类中, 血雉(Ithaginis cruentus)和红腹角雉(Tragopan temminckii)的独立有效照片总数占全部鸟类独立有效照片数的91.6%。本研究为白水河国家级自然保护区野生动物资源管理和保护提供了参考依据。     

为“北京人”呼风唤雨的学界泰斗艾略特·史密斯爵士——从杨钟健院士保存的一张周口店历史照片说起

<正>在著名地质古生物学家、中国古脊椎动物学奠基人杨钟健院士(1897-1979)遗留的大量照片、日记和书信中,有一张周口店龙骨山的历史照片引人注目(见下图)。照片中,三位参加北京人早期发掘的中外先贤和一位个头高大的西方客人一起,站在鸽子堂的洞口前面。熟悉北京人发掘历史的朋友们,或许能从中认出著名的古人类学家裴文中(左1)、中国地质调查所所长翁文灏(左2)和协和医学院解剖系系主任步达生(右1)。裴文中(1904-1982)在1929年12月发现了震惊世界的北京人第一个头盖骨。翁文灏(1889-1971)统筹领导周口店的发掘与研究工作。1929年4月,他和步达生一起,