斗鱼属鱼类亲缘关系的Cyt b基因序列和RAPD分析

采用mtDNA Cyt b基因序列分析和RAPD两种分子标记技术,研究了中国分布的叉尾斗鱼(Macropodus opercularis)、圆尾斗鱼(M.chinensis)和香港斗鱼(M.hongkongensis)以及越南的红鳍斗鱼(M.erythropterus)4种鱼类之间的亲缘关系.获得4种斗鱼14条Cyt b基因全序列(1 155 bp),结合GenBank中搜索到的近缘物种同源序列进行分析.从133条随机引物中筛选到36条引物,在优化的反应条件下,10个群体96个个体共扩增出清晰稳定的条带749条,构建矩阵进行分析和聚类.基于Cyt b全序列以邻接法和最小进化法构建的系统树及RAPD数据UPGMA聚类分析的结果都显示,香港斗鱼和红鳍斗鱼先聚为一分支,再与叉尾斗鱼聚类,圆尾斗鱼处于外缘.本研究结果反映了圆尾斗鱼与其他斗鱼的亲缘关系较远,种间遗传距离为0.184 5～0.225 3(Cyt b)和0.653 6～0.746 5(RAPD),两者为同一单系群中两个独立演化的自然类群;香港斗鱼与叉尾斗鱼间遗传分化明显,Cyt b碱基差异为11.00%,RAFD遗传距离达0.577 7,支持其为独立物种的观点,且香港斗鱼群体间遗传差异较大,Cyt b碱基差异为3.12%,RAPD遗传距离0.060 1;叉尾斗鱼群体间Nei's基因多样度和Shannon信息指数分别为0.058 2和0.086 9,而各群体内的数值分别为0.016 1～0.031 7和0.023 5～0.046 7,表明遗传差异主要来自群体间,并按分布流域分别聚类.     

越南黑叉尾斗鱼展示行为的偏侧化及其对镜面影像的响应

动物行为的偏侧化现象广泛存在于各个类群,特别是具有仪式化展示和打斗行为的鱼类。越南黑叉尾斗鱼(Macropodus spechti)是一种雄性个体间具有模式化展尾行为小型淡水鱼类。本文主要研究越南黑叉尾斗鱼展尾行为或眼睛使用的偏侧化现象,以及镜面影像对其行为的影响。研究发现,越南黑叉尾斗鱼中在个体(94.6%,n=35)和群体(左侧化指数:LⅠ=0.25±0.19)水平均具有明显的左侧化倾向;镜面影像会降低斗鱼的展示强度和左侧化倾向(LⅠ=0.10±0.23),但是,对水面呼吸的频次没有显著影响。这表明,越南黑叉尾斗鱼的左侧化倾向是对"头-尾"相对展示的一种适应,而镜面影像中"头-尾"展示姿势的变化对越南黑叉尾斗鱼的展示行为具有明显影响,但这种影响在反应强度(换气次数)上并没有差异,由此认为越南黑叉尾斗鱼对镜面影像缺乏自我识别能力。同时,由于偏侧化现象的存在,使得使用镜面影像无法获得和真实个体一致的行为响应结果。本研究对未来行为学研究中如何使用镜面影像研究动物行为具有重要的指导意义。     

叉尾斗鱼种群遗传变异与亲缘地理

通过分析采自珠江、鉴江、漠阳江、赣江、韩江、黄冈河、九龙江和闽江8个流域23个采样点121尾叉尾斗鱼mtDNA控制区3'端和临近序列共400bp,研究其种群遗传变异和亲缘地理格局。所分析序列只有13个变异位点,共有11个单倍型,碱基序列总的单倍型多样性为0.576,核苷酸多样性为0.00818,均较低。珠江流域存在群体内独有单倍型,有两个广布单倍型H1和H2,分别占所有样品的19%和62%。最小进化网络图显示单倍型没有明显的亲缘地理格局,呈星状发散,H1和H2处于中心。AMOVA分析显示变异主要来自地理区内群体间,歧点分布和中性检测显示叉尾斗鱼并未经历种群扩张。结果表明叉尾斗鱼种群遗传多样性很低且存在地理差异;各流域个体呈混杂分布格局,现有群体可能在珠江流域有东西两个起源;推测种群最近经历严重瓶颈效应。     

氯丙嗪在斑马鱼胚胎和早期幼鱼发育过程中的神经毒性作用

目的 采用模式动物斑马鱼作为研究对象,观察氯丙嗪（chlorpromazine,CPZ）暴露对胚胎和幼鱼早期神经发育的影响.方法 在一般毒性评价的基础上,通过整体胚胎细胞凋亡检测和脑组织病理学检查,了解CPZ对神经发育的器质性改变;采用神经行为学方法,包括幼鱼触动逃避反应、自发运动以及惊恐逃避反射等,研究氯丙嗪暴露所致的神经发育功能性障碍.结果斑马鱼胚胎受精后6 h（6 hpf）～72 hpf暴露于CPZ（≥5 mg/L）可引起胚胎和幼鱼死亡、致畸和幼鱼孵化延迟,并呈浓度和时间依赖性;采用吖啶橙染色检测36 hpf整体胚胎凋亡细胞,发现凋亡细胞主要集中在胚胎中脑、后脑、丘脑以及中后脑连接区、脊索和尾部等处;脑组织病理学检测发现,7dpf幼鱼颅腔增大、脑体积减小、脑细胞缩小且细胞间隙增宽.6～72 hpf CPZ（≥0.0625 mg/L）暴露后,幼鱼神经行为学研究发现,CPZ（≥0.125 mg/L）可引起3dpf幼鱼触觉运动能力下降;CPZ（≥0 5 mg/L）可浓度依赖性地抑制幼鱼自发运动,并出现僵直不动、震颤或快速刻板式转圈运动等行为改变;光惊恐实验中,暗环境下各暴露组幼鱼对突发强光刺激均表现为惊跳逃避,并且暗-光交替期运动加速度变化与对照组无显著差异;在撤除光源后,1mg/L和2 mg/L暴露组幼鱼暗适应时程缩短,而0.125 mg/L和0.25 mg/L暴露组暗适应时程延长,提示CPZ对外界刺激引发的幼鱼活跃游动有抑制和促进双重毒性作用.结论 CPZ暴露对斑马鱼胚胎和幼鱼具有明显的神经发育毒性作用.模式动物斑马鱼作为一种高通量筛选模型在外源性化合物神经发育毒性评价中具有较好的应用前景.     

香港斗鱼海南种群的分子鉴定和亲缘关系分析

香港斗鱼（Macropodus hongkongensis）是一种斗鱼科（Belontiidae）斗鱼属（Macropodus）的淡水鱼,记录于香港、广东等地,分布稀少。本研究通过线粒体COI、Cytb及16S rRNA基因对海南万泉河水系发现的疑似香港斗鱼进行分子鉴定和亲缘关系分析。基于3种基因的比对鉴定显示,该斗鱼和香港斗鱼广东鹤山种群的亲缘关系最近,海南万泉河水系发现的斗鱼为香港斗鱼海南种群。本文中几种斗鱼的种间遗传距离在0.136～0.238,大于香港斗鱼海南种群种内遗传距离（0.000～0.006(COI)）的10倍,与10倍理论一致,满足物种的有效鉴定。香港斗鱼不同地理种群之间遗传差异明显,海南种群和广东鹤山种群之间的种内遗传距离为0.036。NJ进化树也显示,香港斗鱼海南种群和香港斗鱼广东种群聚为一支,接着与红鳍斗鱼（M.erythropteru）聚为一支,再与叉尾斗鱼（M. opercularis）聚为一支,最后与圆尾斗鱼（M. chinensis）聚为一支。本文为海南岛香港斗鱼种群的首次研究报道,有关结果将为我国香港斗鱼的演化和保护研究提供重要参考。     

白消安在斑马鱼早期胚胎和幼鱼发育过程中的毒理和致畸作用

白消安(1,4-二甲磺酸丁酯)是目前在治疗慢性嗜中性粒细胞白血病和骨髓移植中使用最广泛的一种摄生体,因为它在临床上的重要作用,其胚胎毒性长期以来一直是医生们关注的焦点。本研究的目的是评估白消安在斑马鱼胚胎和幼鱼早期发育过程中的毒理作用,包括胚胎毒性和致畸效应。研究首先确定了白消安对斑马鱼胚胎和幼鱼的半致死浓度(LD50),在白消安/DMSO溶液中孵育24h的胚胎其LD50值为43.42μg·mL^-1, 幼鱼的LD50则为237.33μg·mL^-1;其次对白消安处理导致的形态学缺陷也进行了研究,主要包括钩形尾、无尾、脊椎弯曲、脊索波浪状扭曲、单胸鳍、围心包水肿、卵黄囊吸收延迟以及短体长;第三,利用阿利辛蓝(Alcian Blue)染色研究了颌骨和脊椎骨的异常发育,白消安处理过的幼鱼的麦克尔氏软骨(Meckel's cartilage)间的距离显著短于未处理过的阴性对照组,而处理组的幼鱼在脊椎骨的分化程度上也明显低于对照组;另外,为了研究白消安对斑马鱼生殖系统的影响,使用生殖细胞特异性的nanos1 cRNA探针标定斑马鱼原始生殖细胞,研究处理前后原始生殖细胞的增殖和迁移状况,发现暴露在40μg·mL^-1的白消安/DMSO溶液中12h,不仅能够抑制原始细胞的增殖而且明显干扰了这些细胞的定向迁移。这种对细胞的迁移作用之前从未见诸报道,其机制需要进一步地深入研究。     

细胞质膜在罗非鱼和叉尾斗鱼低温驯化过程中的功能

研究通过一系列科学的指标,比如死亡温度、累计温度处理时间和存活率曲线,检测并比较了吉富罗非鱼和叉尾斗鱼的低温耐受能力,然后系统地检测了在两种鱼中,低温对一系列与细胞膜相关的生理指标的影响,包括细胞膜流动性、内吞作用和膜蛋白Na+, K+ -ATPase的活性。实验结果显示叉尾斗鱼比吉富罗非鱼有着明显优良的耐寒力。两种鱼内与细胞膜相关的生理指标都对温度敏感,但是具体的敏感程度却在耐寒种(叉尾斗鱼)和不耐寒种(吉富罗非鱼)之间存在显著差异。在具体每个物种内部,与细胞膜相关的一系列生理功能对温度的敏感程度是一致的。所有这些种间差异性和种内一致性都使得细胞膜流动性在物种耐寒过程中的重要性凸显出来。结果揭示细胞质膜,尤其是质膜流动性可能在这两种鱼对低温适应过程中扮演重要的角色。       

鳙♀×(鳙♀×鲢♂)♂回交鱼胚胎、幼鱼发育研究

关于鱼类的胚胎、胚后发育的研究工作,国外的鱼类学家在这方面进行了许多工作,而且找出了一般规律,确立了硬骨鱼类发育阶段的理论。我国的鱼类学工作者对草、鲢、鳙、鲤、非洲鲫鱼等淡水养殖鱼类的胚胎、幼鱼发育的研究,也进行了许多细致深入的工作,积累了颇为丰富的观察研究资料,并把研究成果应用于渔业生产实践,取得了一定的成就。但是国内、外对于杂交种胚胎、胚后发育的研究较少,更由于生产的需要,回交鱼具有生长优势,进一步推广应用吋需要这方面的理论指导,为此,我们在品种改良和培育过程中,对鳙_(♀x)(鳙_(♀x)鲢_(?))_(?)回交鱼胚胎、幼鱼的发育进行初步观察,目的在于:(1)为今后进一步探求回交杂种的胚胎、幼鱼发育的规律,打下基础。(2)在掌握此回交鱼发育阶段形态特征的基础上进一步研究其所要求的生活条件,为培育回交杂种提供合理饲养的资料。     

piggyBac转座子介导的转基因叉尾斗鱼的构建

为探讨piggyBac转座子在鱼类动物中应用的可能性,以包含家蚕(Bombyx mori)肌动蛋白3启动子驱动的增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)基因的piggyBac质粒为载体,以及一个包含piggyBac转座酶的辅助质粒,采用显微注射的方法将其导入叉尾斗鱼(Macropodusopercularis)受精卵中,利用PCR技术证实了piggyBac转座子能够介导EGFP基因进入叉尾斗鱼基因组,并能够稳定遗传到下一代,符合孟德尔遗传规律。EGFP基因遗传到G1代的阳性鱼占交配鱼比率,即外源基因整合率为12.30%。实验证明,piggyBac质粒有可能成为水产动物转基因实验的新型载体。     

不同光照条件下叉尾斗鱼仔鱼摄食节律

在自然光照、持续光照和持续黑暗3种光照条件下,研究了孵化后第5、8和12日龄的叉尾斗鱼仔鱼的摄食节律。结果表明:自然光照下,3个日龄的叉尾斗鱼仔鱼在午后12:00—16:00表现出明显的摄食高峰,而持续光照组与持续黑暗组未表现出明显的摄食峰谷。持续光照下,叉尾斗鱼仔鱼的昼夜摄食活动均很活跃,全日各时段平均摄食量显著增加,尤其是夜晚20:00—翌日4:00各时段平均摄食量极显著高于同一时段自然光照组。而在持续黑暗下,与自然光照相比全日各时段平均摄食量明显减少,尤其是白天8:00—16:00各时段的平均摄食量极显著降低。叉尾斗鱼仔鱼属于典型的白天摄食类型,其摄食节律与光照条件密切相关。     

斗鱼及其饲养

斗鱼及其饲养陶渭熊（四川省璧山中学６３２７６０）斗鱼是九年制义务教育教材《生物》（第二册）中讲授“动物繁殖行为”的代表动物,又是著名的观赏鱼,因此了解和饲养斗鱼是很有意义的。１一形态和习性斗鱼是鱼纲鲈形目攀鲈科的小鱼,我国有叉尾斗鱼（Ｍａｃｒｏｐｏｄ...     

细胞质膜在罗非鱼和叉尾斗鱼低温驯化过程中的功能（英文）

研究通过一系列科学的指标,比如死亡温度、累计温度处理时间和存活率曲线,检测并比较了吉富罗非鱼和叉尾斗鱼的低温耐受能力,然后系统地检测了在两种鱼中,低温对一系列与细胞膜相关的生理指标的影响,包括细胞膜流动性、内吞作用和膜蛋白Na~+,K~+-ATPase的活性。实验结果显示叉尾斗鱼比吉富罗非鱼有着明显优良的耐寒力。两种鱼内与细胞膜相关的生理指标都对温度敏感,但是具体的敏感程度却在耐寒种(叉尾斗鱼)和不耐寒种(吉富罗非鱼)之间存在显著差异。在具体每个物种内部,与细胞膜相关的一系列生理功能对温度的敏感程度是一致的。所有这些种间差异性和种内一致性都使得细胞膜流动性在物种耐寒过程中的重要性凸显出来。结果揭示细胞质膜,尤其是质膜流动性可能在这两种鱼对低温适应过程中扮演重要的角色。     

胸腺肽-β4在小鼠卯母细胞和早期胚胎中的表达与分布规律

胸腺肽-β4(thymosin-β4,Tb4)是一种重要的G-actin遮蔽因子(G-actin sequestening factor),在细胞微丝活动中有着调节G-actin活性的作用.以往报道证实了Tb4在细胞中具有广泛的生理作用,但其在哺乳动物卵母细胞成熟和早期胚胎发育等方面的作用,迄今还没有系统的研究报道.以昆明白小鼠卵巢、卵母细胞和早期胚胎作为实验材料,以免疫(荧光)组织化学和RT-PCR技术为主要研究方法,对Tb4的表达与分布进行了研究.结果显示,Tb4在相关发育过程中,存在差异性的表达和定位变化.结果表明,在小鼠卵母细胞成熟和早期胚胎的发育过程,Tb4能够通过表达与分布的变化对细胞微丝活动和细胞增殖活动进行调控,对小鼠卵母细胞成熟、早期胚胎发育以及胚胎着床过程有重要的作用.     

温度对胡子鲶(Clarias fuscus)胚胎和幼鱼发育的影响

鱼类的早期发育对温度的变化十分敏感,尤其是在胚胎阶段和早期仔鱼阶段更为突出,过高或过低的水温往往会导致胚胎发育的畸型或停止发育甚至死亡。因而,研究温度对各种鱼的胚胎和幼鱼发育的影响,是进行鱼类尤其是养殖的经济鱼类的人工繁殖研究所必须进行的重要工作之一。国内外学者:Hayes,F.R.     

东北七鳃鳗早期发育研究

通过开展东北七鳃鳗(Lampetra morii)胚胎、卵黄囊期仔鱼和幼鱼发育研究, 系统地描述东北七鳃鳗的早期发育形态特征和生长发育规律。研究结果表明: 东北七鳃鳗的卵裂为全裂类型, 在(18±1)℃水温下, 受精卵经卵裂期、囊胚期、原肠胚期、神经胚期、头凸期、孵出前期以及孵出期, 历时11—12d孵育出仔鱼。初孵仔鱼体重为(0.00032±0.00002) g, 全长为(0.29±0.02) cm。在卵黄囊期内, 仔鱼体重和全长随日龄的增加而增长, 吻长、眼径、眼鳃间距、口笠长、鳃前长、鳃长、头长、体长、尾长和泄殖孔长均存在异速生长现象。初孵仔鱼经过约15d(卵黄囊期)发育成幼鱼, 幼鱼卵黄囊完全吸收, 消化道贯通, 形成肠道, 开始摄食。在幼鱼期, 经5 个月的培育, 幼鱼体重和全长随月龄的增加而增长, 体色逐渐加深, 5月龄幼鱼的体重和全长分别为(0.07±0.01) g和(3.87±0.32) cm。东北七鳃鳗的早期发育研究为七鳃鳗发育生物学积累基础资料, 同时也为七鳃鳗的人工增养殖提供了科学依据, 推进七鳃鳗的模式化进程。     

叉尾斗鱼一对相对性状单因子杂交试验

早在一百多年前,孟德尔在研究豌豆杂交时,发现了遗传的一些规律。以后,许多学者在其他植物、动物上的研究,也证实了孟德尔的遗传分离定律。在鱼类方面,古德里奇和史密斯(Goodrich and Smith,1937)用叉尾斗鱼     

中国裸斑螟属分类研究(鳞翅目,螟蛾科,斑螟亚科)

首次报道裸斑螟属Gymnancyla Zeller,1848在中国的分布,并记述裸斑螟亚属Gymnancyla(Gymnancyla)2新种:尖裸斑螟G.(G.)termacerba Li,sp.nov.和叉裸斑螟G.(G.)termifurcata Li,sp.nov.,及2个中国新纪录种:须裸斑螟G.(G.)barbatella Erschoff,1874和砾褐裸斑螟G.(G.)sfakesella Chr(e)tien,1911.提供了新种的外生殖器照片和中国已知种的检索表.     

叉尾斗鱼繁殖行为的观察

采用室内研究法对叉尾斗鱼(Macropodus opercularis)的繁殖行为进行了观察,结果表明,叉尾斗鱼分批产卵。雌雄鱼交配于21:35~21:55时开始,00:44~1:56时结束,整个过程持续约3~4 h,交配20~37次(Mean=28.83,n=6),时间跨度从8.9~18.6 s(11.31±2.61,n=141);只交配但雌鱼未产卵的伪交配4~6次(Mean=5.17,n=6),时间跨度从6.2~15.5 s(10.27±2.51 s,n=27);只完成交配第一步的伪交配36~117次(Mean=76.83,n=6),时间跨度1.4~15.0 s(5.69±2.31 s,n=440)。生殖期产卵8~9批,每批卵62~1 316粒(Mean=793.36,n=11);孵卵、护幼由雄性担当。卵从产出到孵化成鱼苗离开泡巢历时约4 d。野生叉尾斗鱼6~9月繁殖,产卵期水温22.4~33.5℃,溶解氧量1.1~4.2 mg/L,pH值6.0~7.0。     

寒武纪宽川铺生物群中球状胚胎化石表面刺状结构及其意义*

以宽川铺生物群中获取的磷酸盐化立体保存的胚胎化石为研究材料,对胚胎化石表面超微结构和内部解剖结构进行观察并对比分析。结果显示,大部分胚胎化石表面被一单层光滑卵膜结构所包裹,卵膜之下胚胎形态多样;刺状结构位于卵膜之下,为原生质胚胎分泌而成的保护层,出现在不同大小和不同类型的胚胎中。结果表明:1)单一依靠胚胎大小或者表面结构不能作为胚胎的分类依据;2)与现生海葵等动物胚胎表面微绒毛相似,Olivooides表面刺状结构可能具有保护胚胎和生态扩散的功能;3)带刺Olivooides很可能发育成为动物演化早期最简单的带刺幼虫形式,是动物间接发育的证据。     

孔雀鱼胚胎心血管发育的显微观察

心血管系统的组织分化研究是近年热点课题之一1.胚体透明且发育速度快的鱼类胚胎由于具备便于观察的特性2,正广泛用于脊椎动物造血系统的发生、血细胞生成、及血循环系统分化时序、调控因子等研究3-5.孔雀鱼(Poecilia reticulata Peters)是卵胎生(Ovoviviparity)鱼类的代表种,其卵子在雌鱼的泄殖腔内受精发育,长成鱼后再出生 ;同时孔雀鱼又是一种小型观赏鱼类,在实验室易于饲养,能不断提供实验用卵和胚胎。因此,在本实验室长期进行鱼类组织细胞培养的基础上6-11,制备孔雀鱼胚胎组织标本,并对早期胚胎及心血管系统进行了体外培养, 观察和比较了孔雀鱼胚胎心血管系统在体内、外的形成过程。