蛋白质溶液NMR结构测定的一些新进展

新的标记技术的进展和采用稀释的液晶作为溶剂以提供额外的结构信息,提高了核磁共振技术测定蛋白质溶液三维结构的精度,扩大了分子质量测定范围.目前已经利用多维 ¹⁵N,¹³C,²H标记NMR测定了许多分子质量为30 ku左右的蛋白质溶液结构,这一上限可能还会被进一步提高.     

荧光方法直接测定一氧化氮

根据2,3-二氨基萘(2,3-diaminonaphthalene,DAN)可与一氧化氮( ^·NO)反应生成荧光性2,3-萘酚三唑(2,3-naphthotriazole,NAT)和 ^·NO的气体特性,设计了一个流动气体和荧光方法相结合的 ^·NO直接测定方法.此法以惰性气体氮气为流动气体使样品中的待测 ^·NO随流动气体进入测定溶液,溶液中的DAN捕集流动气体中的 ^·NO生成荧光性NAT.实验结果表明测定溶液的荧光强度与 ^·NO浓度呈正比,与酸化亚硝酸盐溶液的浓度亦呈良好线性关系.用此方法测得五份酸化正常人血浆的 ^·NO浓度为(31.04±4.70) nmol/L,并可用于连续观察 ^·NO从亚硝基硫醇的自发释放.     

高等植物光系统Ⅱ中强光照射产生超氧阴离子自由基的ESR探索

利用自旋捕捉电子顺磁共振（ESR）的方法对从菠菜叶绿体中分离提纯的光系统Ⅱ(PSⅡ)颗粒产生O₂^-_·的机理进行了直接检测.通过对样品充氧、加入超氧化物歧化酶（SOD）抑制剂四氰乙烯（TCNE）以及原位光照检测ESR信号等手段，在PSⅡ中检测到O₂^-_·与DMPO加合物的特征ESR信号.而在没有SOD抑制剂的情况下，光照时PSⅡ中O₂^-_·与DMPO加合物浓度显著下降.进一步实验发现PSⅡ中O₂^-_·产率与氧分子浓度直接正相关.O₂^-_·产率还具有pH值依赖性，在pH值为6.0～6.5范围内，O₂^-_·产率最高，大于此范围时则呈显著下降趋势.而PSⅡ颗粒的Tris处理也将导致O₂^-_·产率的急剧减少.以上结果证实水裂解放氧十分活跃的PSⅡ也是高等植物叶绿体在光照下产生活性O₂^-_·的主要部位，通常大部分的O₂^-_·能被内源SOD清除，且O₂^-_·的生成与PSⅡ的电子传递活性密切相关.     

2.5次微分伏安法对生物样品中丙二醛的测定

以0.1mol/L NH₄Cl溶液为介质, 用2.5次微分伏安法测定了丙二醛, 线性范围为1.0×10^-6至1.0×10^-3 mol/L, 检测限达1.0×10^-7 mol/L. 并测定了细胞培养液介质中新生SD大鼠心室肌细胞样品中的丙二醛.     

Tb3＋探针法研究蛇毒中纤溶组分的Ca2＋结合环境

采用Tb^3＋作为荧光探针研究了皖南尖吻蝮蛇蛇毒中纤溶组分中钙离子的结合环境.实验表明每个纤溶组分中含有一个高亲和点.钙离子位于发色团色氨酸(Trp)附近,并可能和苯丙氨酸(Phe)结合,在不同波长的激发下能产生Trp→Tb^3＋,Trn→Tb^3＋→phe,Tb^3＋→phe和Tb^3＋→Trp之间的能量转移.Tb^3＋位于Trp附近并可能与Phe结合.计算表明Tb^3＋与Trp之间的距离约为5.66Å.     

三标记参入法及其在硒对淋巴细胞代谢影响研究中的应用

分别以 ³H-UR, ¹⁴C-Leu, ¹²⁵I-UdR为前体,采用三标记参入方法,更严格地在同一样品中同时观察了淋巴细胞染硒前后DNA,RNA,蛋白质的合成及变化。结果表明该方法可行,且显著提高了实验效率;三种受试硒化合物在10^-8—10^-4mol/L浓度范围内对DNA,RNA,蛋白质合成均具有双相性影响,在中毒浓度时,三种硒化合物的毒性顺序为:亚硒酸钠＞硒酸钠＞硒蛋氨酸。     

亚硒酸钠对巨噬细胞内游离Ca2+和Mg2+的影响

用单细胞阳离子测定系统研究了SeO^2-₃对巨噬细胞内游离Ca²⁺和Mg²⁺的影响.实验结果表明:SeO^2-₃高于10^-4mol/L时,有显著的细胞毒性.SeO^2-₃对细胞的毒性作用使细胞内游离Ca²⁺和Mg²⁺的浓度升高但Ca²⁺浓度的升高速率比Mg²⁺快.还有,高于10^-4mol/L的SeO^2-₃对红细胞膜上的Ca²⁺-ATP酶活性有明显抑制作用.     

肝癌肿瘤干细胞的分离鉴定及差异性小分子RNA筛选

旨在分离并鉴定肝癌肿瘤干细胞,并对其异常表达的microRNA进行了初步筛选。首先利用流式细胞术及免疫荧光技术分别在肝癌细胞系及肝癌组织标本中确认了CD90⁺细胞的存在;随后利用免疫磁珠分选技术从肝癌细胞系MHCC97-H中分离出了CD90⁺细胞,化疗药物耐药性实验表明,CD90⁺细胞具有明显的化疗药物耐受能力;两次裸鼠皮下成瘤性实验也表明CD90⁺细胞具有较强的成瘤能力,而CD90^-细胞不具备成瘤能力。上述实验充分说明:CD90⁺细胞具有肝癌肿瘤干细胞特性。因此利用该细胞模型进行了肝癌肿瘤干细胞CD90⁺细胞和非肝癌肿瘤干细胞CD90^-细胞之间差异表达的microRNA的检测,结果表明,CD90⁺细胞与CD90^-细胞之间共有92个microRNAs的表达存在差异性,其中在CD90⁺细胞中高表达的microRNAs有52个;在CD90^-细胞中高表达的microRNAs有40个。     

Ca2＋对蝮蛇蛇毒溶血毒素构象的影响

利用荧光光谱学对BPLA₂和Ca^2＋相互作用的研究表明,Ca^2＋在BPLA₂中十分重要.在Ca^2＋存在时,底物与BPLA₂的结合使酶中色氨酸残基周围的环境变得较为疏水,荧光发射谱蓝移达9nm,而无Ca^2＋存在时却无此现象发生;实验证明BPLA₂分子中有一较强的疏水区,Ca^2＋可明显增强这一区域的疏水性;另外,我们还发现Ca^2＋与酶的结合与酶中唯一的His残基有关.     

呼吸链电子漏在细胞凋亡中的作用

实验证明细胞色素c具有很强的抗氧化功能,在线粒体中氧化态的细胞色素c直接清除O2·-,还原态的细胞色素c清除H2O2.由于呼吸链传递电子合成ATP的同时,总有少部分电子从呼吸链底物端的复合物Ⅰ和Ⅲ漏出,而且漏出的电子首先使氧分子还原成O2·- ,然后O2·-歧化成H2O2,所以细胞色素c清除O2·-和H2O2的功能使呼吸链出现了两条电子漏旁路.细胞色素c通过这两条电子漏路径实现其控制线粒体中O2·-和H2O2水平的功能.根据两条电子漏旁路都是O2·-代谢路径的事实,引进了线粒体自由基代谢的概念,并从自由基代谢失调的角度探讨了呼吸链电子漏在细胞凋亡中的作用.     

谷氨酸脱羧酶放射测量法的改良及应用

用NaOH代替苯乙胺作为¹⁴CO₂的吸附剂,改进谷氨酸脱羧酶（GAD）活性的放射测定方法,结果发现NaOH为吸附剂组内变异系数为9.6%, 以苯乙胺为吸附剂组内变异系数为31.9%;以NaOH为吸附剂72 h后测量其放射活性仍稳定不变,以苯乙胺为吸附剂者1 h后放射性活性即下降47%,6 h后已降低至本底水平;¹⁴CO₂重吸收实验亦证明以苯乙胺为吸附剂吸附的¹⁴CO₂ 6 h内已有80%以上重新被NaOH吸附;以NaOH作为吸附剂测定GAD的活性,在0.39～17.8 mg脑组织样品范围内GAD量与¹⁴CO₂生成量之间有线性关系.NaOH代替苯乙胺作为¹⁴CO₂的吸附剂测定GAD的活性其灵敏度提高1.66倍.用此方法测定组织和细胞内GAD活性证明其具有良好的重复性和稳定性,值得推广应用.     

聚氨酯表面偶联重组水蛭素及其抗凝血酶活性的评价

在PU和Chro表面上涂覆含羧基硬段的PU1溶液并用次甲基蓝吸附法测定表面羧基含量;用EDC接枝牛血清白蛋白并用FT-ATR-IR谱的差减测定表面BSA接枝量;用EDC偶联rHir并用放射性同位素测定表面rHir偶联量,最后用白陶土部分凝血酶时间测定(KPTT)、凝血酶原测定(PT)、凝血酶时间测定(TT)试验评价样品的抗凝血酶活性.CPU和C-Chro表面羧基含量分别为3.77和3.03 mmol/m²,CPU-BSA和C-Chro-BSA表面BSA含量分别为426和262 mg/m²,CPU-BSA-¹²⁵I-rHir和C-Chro-BSA-¹²⁵I-rHir表面rHir含量分别为716.7和691.1 μg/m²,比对照样品都有很大的提高.抗凝血酶试验评价表明,rHir偶联样品的KPTT、PT、TT时间都明显延长,它们的抗凝血酶活性确有提高,抗血栓性能得到有效的改善.     

多细胞盐腺离子选择性分泌机理及其成因

为揭示多细胞盐腺对阳离子的选择性分泌机理, 在室内水培条件下, 研究了不同盐分胁迫(NaCl, KCl和NaCl+KCl)对多枝柽柳和短穗柽柳Na⁺, K⁺的分泌和累积, 以及不同盐腺抑制剂(orthovanadate, Ba²⁺, ouabain, tetraethylammonium[TEA]和verapami)对Na⁺和K⁺分泌的抑制及其在体内累积的影响. 结果表明, NaCl处理明显增加了盐腺对Na⁺分泌, 而KCl处理则显著促进K⁺分泌; Na⁺和K⁺的分泌量同累积量的比值表明, Na⁺的比值高于K⁺; 单一盐溶液中添加不同离子成分后, Na⁺和K⁺分泌表现不同: KCl处理中添加NaCl后, K⁺分泌速率显著降低, 但在NaCl处理中添加KCl, Na⁺的分泌则不受影响, 这些结果表明, 柽柳对Na⁺的分泌具有较高的选择性. 此外, 添加盐腺抑制剂后, 柽柳对Na⁺分泌分别受orthovanadate, ouabain, tetraethylammonium[TEA]和verapami的显著抑制, 而K⁺的分泌则分别受ouabain, tetraethylammonium[TEA]和verapami的显著抑制. orthovanadate对Na⁺, K⁺分泌抑制效应的差异, 可能是引起多细胞盐腺分泌Na⁺和K⁺能力不同的主要原因.     

抗VacA+CagA+幽门螺杆菌IgY的抗感染作用研究*

为研究抗VacA⁺CagA⁺幽门螺杆菌(Hp)IgY的抗感染作用,以VacA⁺CagA+Hp为抗原免疫蛋鸡,聚乙二醇法和水稀释法从鸡卵黄中提取抗-VacA⁺CagA⁺Hp-IgY,酶联免疫吸附实验(ELISA)测定IgY抗体效价。建立胃腔感染VacA⁺CagAHp的昆明系小鼠模型,观察抗-VacA⁺CagA⁺     

脉冲电场引起的红血球内钠离子浓度变化的研究

利用位移试剂和²³Na-NMR的方法研究脉冲电场对正常人红血球内Na⁺浓度的影响,实验结果给出在高强度电场作用下,细胞内Na⁺浓度增加,并且随脉冲强度的增加而增加,比指数关系还快.在低强度电场作用下,细胞内Na⁺浓度减少.乌苯苷能抑制细胞内Na⁺浓度的减少,抑制程度随乌苯苷浓度的增加而增强,从而证实了低强度的脉冲电场对Na⁺,K⁺-ATPase的激活作用,直接测定脉冲电场对红血球血影膜的Na⁺,K⁺-ATPase活性的影响,进一步证实了这一结果.并对在电场作用下细胞膜的通透性和电场对酶的激活作用及电场等外界物理信号是否能跨过细胞膜等进行了讨论.     

重金属Cd2+和Cu2+胁迫下泥蚶消化酶活性的变化

为了探讨重金属Cd²⁺和Cu²⁺胁迫对泥蚶消化酶活性的影响,运用酶学分析的方法,按《渔业水质标准》（GB 11607）规定的Cd²⁺、Cu²⁺最高限量值的1、2、5、10倍设置重金属离子Cd²⁺、Cu²⁺浓度及其组合,研究了在重金属Cd²⁺、Cu²⁺胁迫下,30d内泥蚶3种消化酶活性的变化规律。结果表明：与空白对照组相比,在重金属Cd²⁺、Cu²⁺或其组合的胁迫下,较低浓度组泥蚶的淀粉酶活性实验前期增强（即被诱导）,实验后期减弱（即被抑制）,较高浓度组泥蚶的淀粉酶活性从实验一开始就减弱,并保持在较低水平,毒性比较,同一重金属高浓度 > 低浓度,不同重金属及其组合Cu²⁺ > （Cd²⁺+Cu²⁺）组合 > Cd²⁺;泥蚶脂肪酶的活性实验前期增强,实验后期转为微减弱或减弱,毒性比较,同一重金属高浓度 > 低浓度,不同重金属及其组合（Cd²⁺+Cu²⁺）组合 > Cu²⁺ > Cd²⁺;泥蚶胃蛋白酶的活性实验前期增强,且活性呈现升高-降低-再升高-再降低的变化,实验后期分别表现微增强、微减弱和减弱,毒性比较,同一重金属高浓度 > 低浓度,不同重金属及其组合（Cd²⁺+Cu²⁺）组合 > Cu²⁺ > Cd²⁺。可见：环境中的Cd²⁺和Cu²⁺对泥蚶的消化酶活性起着明显的影响作用。     

活细胞 23Na-NMR研究进展；水溶性位移试剂的应用

钠离子(N⁺)是生物体内最重要的无机阳离子之一。引入适当的水溶性位移试剂(SR),应用 ²³Na核磁共振波谱( ²³Na-NMR)技术,是研究活细胞中N⁺代谢的二条新途径。本文综述了活细胞中 ²³Na-SR-NMR研究的实验方法及其研究进展。     

CellCul－20A反应器的丝网间液体交换速率及氧传递模型

针对笼式通气搅拌生物反应器的特点,本文提出了一种简单可信的测量丝网内外液体交换速率的实验方法,根据此方法,在CellCul-20 A生物反应器中得出了通过丝网的液体交换速率关联式: 单层丝网：Qs=1．93×1O^-5N^1.81+1．13×10^-4UG^0.61(Ⅰ) 双层丝网：Qs=3．42×10^-5N^1.49+1．46×10^-4UG ^0.68 (Ⅱ)并在此基础上,建立了台适的深层通气的氧传递模型,得到： 1- 1- 1- (K_La)d.Vc Qs + Vb.[(K_La)b-(K_La)d](Ⅲ)理论分析和实验结果表明,增大丝网内的液体体积和提高丝网内的氧传递速率,可以有效地提高反应器的体积氧传递系数。     

广州大夫山雨季林内外空气TSP和PM2.5浓度及水溶性离子特征

采用平行同步采样法,于2012年雨季,对广州市大夫山森林公园林内外空气的总悬浮颗粒物(TSP)和细颗粒物(PM_2.5)样品进行了24 h收集,测定了TSP和PM_2.5的质量浓度并分析了样品中水溶性无机离子成分。结果表明:林内外PM_2.5的质量浓度平均值分别为(40.18±10.47)和(55.79±13.01) g/cm³;林内外TSP的质量浓度分别为(101.32 ± 33.19)和(116.61±35.36) g/cm³。林内与林外比,PM_2.5和TSP平均质量浓度都显著减少(P < 0.05),表明森林能显著改善空气环境质量。TSP和PM_2.5中SO₄^2-、Na⁺、NH₄⁺和NO₃^-为水溶性无机离子主要成分,占总离子质量的80%以上,林外这些离子的浓度高于林内(NH₄⁺除外)。这4种离子雨季在空气中的主要存在方式为NaCl、Na₂SO₄、NH₄HSO₄和NH₄NO₃。计算表明,采样期间海盐对大夫山空气TSP和PM_2.5的水溶性组分中Na⁺和Cl^-贡献最大,其它元素主要源自陆地源。林内外TSP和PM_2.5的c(NO₃^-)/c(SO₄^2-)比值在0.3以下,表明固定源是大夫山森林公园空气主要污染贡献者,TSP中c(NO₃^-)/c(SO₄^2-)的比值大于PM_2.5的比值,说明移动源对TSP的贡献大于PM_2.5。     

活化海绵镉微型柱层析法测定血清中一氧化氮

采用铜离子活化海绵镉微型柱层析法将血清中的硝酸盐(NO^-₃)还原为亚硝酸盐(NO^-₂),再通过Griess反应测定NO^-₃/NO^-₂总量以反应体内一氧化氮（NO）水平,从而建立血清NO间接测定新方法. 结果表明,在pH 9.7 时,活化海绵镉还原NO^-₃能力强、速度快、抗干扰性好,还原率为96.4%～100.0%,检测范围为0～400 μmol·L^-1,检测限为1.85 μmol·L^-1,相对标准偏差为2.56%～3.46%,对NO^-₃的回收率为96.4%～102.2%,对NO^-₂的回收率为95.2%～101.3%,对混合标准液的回收率为98.7%～104.4%.该方法具有简便快速、灵敏准确、样品和试剂用量小等优点,可在临床推广应用.