NO对鲫鱼视网膜视杆和视锥信号传递的不同作用

在离体、灌流的鲫鱼视网膜上,考察了一氧化氮(NO)对视网膜电图(ERG)和水平细胞的作用.NO的供体硝普钠(SNP)压抑暗视ERGb波,却增大明视b波,这些作用均可为血红蛋白所阻遏.进而,SNP使视杆水平细胞对光反应减小,而增强L型视锥水平细胞的对光反应.这些结果表明,NO在外视网膜可压抑视杆系统的活动而增强视锥系统的活动.此外,可溶性鸟苷酸环化酶的抑制剂亚甲基蓝对视杆、视锥水平细胞的作用恰与SNP作用相反,这提示NO的作用可能由cGMP所介导.对NO的作用位点提出了工作假设.     

急性低氧对鲫鱼视网膜视杆和视锥信号的不同影响

在保持完整血液循环的鲫鱼眼杯标本上,应用Ａｇ－ＡｇＣｌ电极记录视网膜电图（ＥＲＧ）,研究了急性低氧下不同适应状态ＥＲＧ反应变化的情况,以期分析视锥与视杆通路对急性低氧的敏感性是否不同。结果表明：１．急性低氧对明视ＥＲＧ－ｂ波的影响要远远快于对暗视ｂ波的影响,这说明视锥信号通路比视杆信号通路对缺氧敏感;２．在间视状态下,ＥＲＧ的ｂ波在低氧开始反几分钟内有一个明显的增大过程,而在明视或暗视中皆未观察到     

低钙对鲫鱼视网膜中视杆,视锥信号向水平细胞传递的不同作用

本工作应用细胞内记录技术,在灌流的鲫鱼离体视网膜的标本上,研究了低钙对外网状层中视锥、视杆信号向水平细胞传递的不同影响。当降低灌流溶液中Ｃａ（２＋）浓度至０．１ｍｍｏｌ／Ｌ时使视锥－和视杆－水平细胞（Ｃｏｎｅ－ＨＣ和Ｒｏｄ－ＨＣ）均去极化,但对两者的光反应性有不同的影响：使Ｌ型Ｃｏｎｅ－ＨＣ对６８０ｕｍ和５００ｕｍ闪光反应的幅度有不同程度的减小,但使Ｒｏｄ－ＨＣ对光反应的幅度显著增大。在０．１ｍｍｏｌ／ＬＣａ（２＋）Ｒｉｎｇｅｒ液灌流时,无论是明视ＰⅢ（反映机锥活动）或暗视ＰⅢ（反映视杆活动）,其反应的幅度均增大,提示发生在低钙时Ｃｏｎｅ－ＨＣ和Ｒｏｄ－ＨＣ光反应性的不同变化产生于突触传递的过程中。进而,磷酸二酯酶抑制剂ＩＢＭＸ对ＰⅢ的影响与０．１ｍｍｏｌ／ＬＣａ（２＋）Ｒｉｎｇｅｒ液的作用相似,而对Ｌ型Ｃｏｎｅ－ＨＣ和Ｒｏｄ－ＨＣ的作用均是使光反应性增大。这提示,在０．１ｍｍｏｌ／ＬＣａ（２＋）的Ｒｉｎｇｅｒ液中,Ｃｏｎｅ－ＨＣ和Ｒｏｄ－ＨＣ光反应性的变化差异可能是由于低钙对视锥和视杆终末Ｃａ２＋内流的不同影响而产生。     

GABA对鲫鱼视网膜视锥水平细胞的选择性压抑

本工作应用细胞内记录技术,在灌流的鲫鱼视网膜的标本上,研究了γ－氨基丁酸对视杆水平细胞笔视锥水平细胞的影响。结果表明,在ＧＡＢＡ的作用下,Ｌ型视锥水平细胞暗中膜电位超极化,对光反应减小;ＧＡＢＡＡ受体的特异性拮抗剂荷包牡丹碱在７０％的细胞上能阻断上述ＧＡＢＡ的效应。     

暗视条件下鲫鱼视网膜电图的单变量分析

本工作研究了暗视条件下鲫鱼视网膜电图(ERG)的特性。ERG 波形没有波长特异性。不同波长的 b 波振幅-强度曲线平行性良好。b 波不同时相(上升相、峰值、下降相)的光谱敏感性甚为一致。进而,对颜色混合刺激的 b 波幅值与基于单变量原理所作的预测几乎完全一致。基于这些结果,我们的结论是:在暗视条件下,鲤属鱼 ERG b 波仅反映了杆细胞系统的活动,并非象有些研究所认为的也有明视系统的贡献。     

AMPA对视网膜L型水平细胞所接收的红、绿敏视锥信号的不同调制作用

在离体灌流的鲫鱼视网膜,应用细胞内记录技术,研究了谷氨酸受体激动剂——AMPA对L型水平细胞(LHC)的作用.AMPA压抑LHC由红敏视锥驱动的反应,却增强由绿敏视锥驱动的反应.此效应可为AMPA受体特异的拮抗剂(GYKI53655)所逆转,表明仅有AMPA受体参与其中.印防己毒素(PTX)或双氢红藻氨酸(DHK)存在时,依然可以观察到这种效应,提示自LHC向视锥的负反馈和视锥谷氨酸转运体在此效应中不起显著作用.AMPA的不同调制作用提示,LHC上可能存在不同特性的AMPA受体亚型介导红敏和绿敏视锥的信号传递.     

鲫鱼视网膜锌离子分布的光、电镜观察

本文应用ｎｅｏ－Ｔｉｍｍ染色法,观察了鲫鱼视网膜内锌离子的分布情况以及明,暗适应条件下鲫鱼视网膜内锌离子分布的变化。结果发现,明适应条件下,外网层、部分光感受器、双极细胞、无长突细胞以及神经节细胞胞体锌离子着色明显,含锌光感受器和双极细胞的突起伸入外网层,暗适应条件下,外网层锌离子染色减弱或消失（Ｐ〈０．０１）。外核层胞体锌离子染色阴性,少数散在分布的视锥细胞呈锌离子阳性,上述资料提示,明适应条件     

鲫鱼视网膜亮度型水平细胞上不同视锥信号的相互作用:实验及模型

本文应用胞内记录和动态模型分析方法,研究了离体鲫鱼视网膜视锥驱动的高度型水平细胞（ＬＨＣ）上不同视锥信号的相互作用。实验表明,绿背景光的作用可以提高ＬＨＣ的红光反应,这种增强作用与绿敏锥的活动程度密切相关,模型分析表明,背景光 的作用谷氨酸介导的前馈性通路和ＧＡＢＡ介导的反馈性通路活动同时得以增强,水平细胞对光反应的增强效应不能为外泊性ＧＡＢＡ所消除。则其程度为前馈性通路和反馈性通路活动增加的相对     

正常人和某些病变性眼的平均视网膜电图及振荡电位

本工作用全视野闪光刺激器结合微处理机平均技术对人视网膜电图(ERG)进行了记录和分析。正常人的 ERG 主要由 a 波、b 波和振荡电位组成。正常人的振荡电位的峰值时间及其间隔相当恒定,但在糖尿病性视网膜病和视神经萎缩病人,振荡电位减小或消失。本文对这种改变的可能原因进行了讨论。     

甘氨酸对鲫鱼视网膜ERG b-波和ON型双极细胞活动的调制

本工作在分离灌流的鲫鱼视网膜上研究了甘氨酸对明,暗视视网膜电图（ＥＲＧ）ｂ－波和胞内记录的ＯＮ型双极细胞反应的作用。结果表明,甘氨酸能明显压抑ＥＲＧ ｂ－波和ＯＮ型双极细胞的反应,其作用能为士的宁所翻转;甘氨酸对用谷氨酸分离的ＥＲＧ ＰⅢ成分（光感受器电位）无明显影响。这些结果提示,甘氨酸可能直接作用于双极细胞的受体,从而调节视网膜ＯＮ通路的活动。     

蛙离体视网膜中杆系统对锥系统的抑制作用

在蛙离体视网膜标本上研究了由条件刺激(F_c)引起的快速暗适应(RDA)过程中b 波的变化。当F_c超过一定强度时,以501nm 闪光为测试刺激(F_(t(501)))时b波阈值单调下降,先为锥相后为杆相,两者过渡处呈现杆-锥转折;但以654nm闪光为测试刺激时(F_(t(654))),阈值先略有下降,继而上升,之后再下降。F_(t(654))应阈值在RDA 过程中的这种升高是反映575锤系统的活动受到502杆系统抑制的结果,433杆系统对此没有明显的贡献,主要依据是:(1)F_(t(654))反应阈值的上升在时间上与暗适应曲线的杆相的出现一致;(2)在RDA 过程的锥相,反应的光谱敏感性与锥色素吸收光谱一致,而在F_(t(654))反应阈值上升到最大值时,反应的光谱敏感性与502杆色素的吸收光谱非常接近;(3)对502杆系统作用等效的F_(c(439))、F_(c(501))和F_(c(616))作用后,F_(t(654))的敏感度变化在整个RDA 过程中基本相同。     

视网膜水平细胞钙离子信号的调节与功能

钙离子是细胞内功能最为广泛的第二信使之一,在为数众多的细胞内信号通路中发挥作用。对细胞内钙离子分布、调控及功能的研究是我们了解细胞生理的重要途径。本文基于我们实验室对视网膜的研究工作,介绍了视网膜水平细胞中钙离子信号的调控与生理功能。     

低钙条件下Co2+提高鲫鱼视锥水平细胞的对光反应性

在鲫鱼离休灌流视网膜上研究了低钙(0.1mmol/L)条件下钴离子(Co~(2+))对水平细胞的作用.0.1mmol/L Co²⁺在正常Ringer液中完全压抑视锥-(Cone-)和视杆-(Rod-)水平细胞(HC),但在 0.1mmol/L Ca²⁺的Ringr液中却显著地增大了Cone-HC对光反应的幅度.上述作用并非因Co²⁺对光感受器的对光反应性的影响所致.磷酸二酯酶的抑制剂IBMX在正常Ringer液中减小了Co²⁺对Cone-HC的压抑作用,因此,上述Cone-HC光反应性的增高可能是因为低钙使视锥去极化,从而增强其终末膜上的电压敏感性钙通道的活动.     

基于单细胞转录组的视网膜母细胞瘤进展特征分析

视网膜母细胞瘤（retinoblastoma,RB）是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤。在RB进展过程中的关键致病因素目前尚不十分清楚。因此,识别与RB进展密切相关的基因能为病情诊断及基因治疗提供重要信息。然而,肿瘤组织具有很强的细胞异质性,不同病理状态下的细胞,其功能及基因表达都可能呈现显著的差异。本研究从公共基因表达数据库（gene expression omnibus,GEO）下载了1例4个月肿瘤患者和1例2年患者的肿瘤及癌旁组织的单细胞转录组测序数据,从单细胞水平解析不同患病时长的RB肿瘤转录图谱,鉴定与RB进展有潜在关联的细胞亚群及基因集。结果显示,肿瘤组织与癌旁组织在单细胞转录图谱上具有整体的一致性,但视锥前体G1期细胞群、G2期细胞群以及小胶质细胞群在肿瘤与癌旁组织中的分布比例存在明显差异。进一步分析了这3种细胞群在RB肿瘤进展过程中的作用。研究发现,在RB肿瘤的早期阶段,视锥前体细胞在G1期异常增殖,随着RB肿瘤的进展,视锥前体G2期细胞比例显著增加。同时,RB进展过程的小胶质细胞群差异分析结果显示,主要参与免疫应答的关键基因包括RPL23、B2M、HLA家族基因。本研究可为RB发病机制及进展研究提供更多新视角和数据资源。     

人胎视网膜神经肽Y免疫反应神经元的发育

本文用免疫细胞化学ＡＢＣ法,研究１５—３８周龄人胎视网膜神经肽Ｙ免疫反应（ＮｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅＹｉｍｍｕｎｏｒｅｃｔｉｖｅ,ＮＰＹ－ＩＲ）神经元（以下称ＮＰＹ－ＩＲ细胞）的发育。结果表明：①胎龄１５周视网膜中央部已出现不同类型的ＮＰＹ－ＩＲ细胞：位于黄斑及其周围外核层的为ＮＰＹ－ＩＲ视锥细胞;位于内核层最内一列的为ＮＰＹ－ＩＲ无长突细胞位于节细胞层的可能为ＮＰＹ－ＩＲ移位无长突细胞或节细胞;内核层和节细胞层的ＮＰＹ－ＩＲ细胞的突起均分布在内网层的第１亚层。②胎龄２４周后,ＮＰＹ－ＩＲ视锥细胞完全消失。③随着视网膜的发育,内核层和节细胞层的ＮＰＹ－ＩＲ细胞数量增多,突起增粗增长,胞体分布由中央部扩展到周边部,其中内核层ＮＰＹ－ＩＲ细胞的密度呈现从中央部向周边部逐渐降低的分布方式,节细胞层ＮＰＹ－ＩＲ细胞则多数集中分布在视网膜的边缘和黄斑之间,形成较高密度的环状区。     

多巴胺对鲫鱼视网膜H1型水平细胞上电压门控钙离子通道的调控特性

利用细胞内的钙离子成像技术,研究了多巴胺对鲫鱼视网膜H1型水平细胞上L型电压门控钙离子通道的调控特性。研究发现,在不同胞外pH(6.8、7.4、8.0)条件下,不同浓度多巴胺(50和500μmol/L、1 mmol/L)对L型电压门控钙离子通道均具有上调作用。50μmol/L多巴胺在不同pH下的上调程度没有显著性差异;高浓度多巴胺(500μmol/L和1 mmol/L)在pH8.0条件下比pH6.8和7.4条件下具有更显著的上调作用。这些结果表明,在鲫鱼视网膜H1型水平细胞上,多巴胺对电压门控钙离子通道的调控与胞外pH环境密切相关。在光照情况下,L型电压门控钙离子通道活性被相对高浓度多巴胺上调,并被胞外碱性环境协同增强。这种协同增强效应有助于阐明视网膜对光反应的信息传递机制。     

鲫鱼视网膜明、暗适应状态NADPH黄递酶染色的比较

在鲫鱼视网膜上考察了明、暗适应两种状态下视网膜细胞的NADPH黄递酶染色的不同.在暗适应5h的视网膜中,视杆和视锥的内段、部分水平细胞呈深度染色.部分无长突细胞和神经节细胞也有染色.此外,Muller细胞对NADPH黄递酶染色是强阳性.在明适应的视网膜中,光感受器的内段、神经节细胞的染色则较浅,而Muller细胞和水平细胞则呈阴性反应.此外,视杆去极化型双极细胞则清楚地被染色.无长突细胞在两种状态下的染色没有显著差异.Muller细胞,部分水平细胞和视杆去极化型双极细胞中存在诱导型一氧化氮合成酶,其诱导与否取决于视网膜的适应状态.     

锌离子压抑鲫鱼视网膜水平细胞内向整流钾离子通道的模型和机理探究

内向整流钾离子通道(inwardly rectifying potassium channel,Kir)广泛存在于神经元和肌肉细胞中,在维持细胞膜静息电位和传导神经信号中起到了重要作用。有研究显示,Zn2+在特定的pH值条件下可以抑制Kir电流。本文使用NEURON软件对Kir通道介导的电流建模,模拟了Kir的电流-电压关系,提出一组动力学状态转换方程来描述Zn2+对Kir的压抑作用。模型可以较好地描述不同浓度Zn2+对Kir电流的调节情况,提示Zn2+通过结合在Kir上的特定位点产生压抑作用,并且此位点会被H+竞争性结合。     

离子导入疗法对防治糖尿病视网膜病变及改善症状的临床研究

目的：探讨离子导入疗法对糖尿病视网膜病变患者进行护理的临床效果。方法：选取88例（122眼）糖尿病视网膜病变患者,随机分为照组和实验组,其中对照组44例（58眼）,给予常规护理治疗;实验组44例（64眼）,在对照组基础上采用离子导入疗法进行护理。观察患者视网膜改变、视力的改善及自觉症状改善情况。结果：实验组实施干预后,视网膜改变、视力的改善、自觉症状的改善显效率明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：离子导入疗法有助于改善糖尿病视网膜病变患者眼底血液循环。促进出血点吸收、改善临床症状,操作简单易行,患者易于接受。     

调控Muller细胞去分化为视网膜前体细胞的信号通路

在视网膜中,Muller细胞被视为具有干细胞特性及再生修复能力,刺激内源性干细胞活化增殖并向视网膜前体细胞去分化,或许是治疗视网膜疾病的重要策略之一。然而,在高等哺乳动物视网膜中,Muller细胞自发去分化的能力极为有限。近年来研究发现,某些生长因子、转录因子及细胞外基质能通过一系列信号通路促进视网膜Muller细胞的去分化及再生修复。阐明这些信号通路的调控机制将对利用内源性干细胞治疗视网膜疾病有极大的帮助。