化学突变具有底物结合部位的单克隆抗体制备含硒抗体酶

开发了一种制备抗体酶的新方法。用二硝基氯苯（ＤＮＣＢ）专一地与谷胱甘肽（ＧＳＨ）的巯基反应,合成出半抗原ＧＳＨ－Ｓ－ＤＮＰ。用戊二醛将半抗原偶联到牛血清白蛋白（ＢＳＡ）上,制成全抗原。再用标准的单抗制备法获得具有ＧＳＨ结合部位的单抗（４Ａ４ＩｇＧ）。用苯甲基磺酞氟（ＰＭＳＦ）和Ｈ２Ｓｅ相继处理该单抗,则将单拉结合部位上的丝氨酸（Ｓｅｒ）突变成硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ,因而在单抗结合部位上引入了谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团。突变后的单抗具有ＧＰＸ活性,其活力已达到天然ＧＰＸ的数量级水平。动力学行为也与天然ＧＰＸ类似。这种新的含硒抗体酶有优于ＧＰＸ的一些特点。     

具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的含硒单链抗体酶制备

 利用RT PCR从分泌有谷胱甘肽结合部位的单克隆抗体杂交瘤细胞株 2F3中 ,扩增出单抗重链可变区和轻链可变区基因 .经DNA测序后 ,用Linker(Gly4 Ser1) 3 构建成单链抗体 (scFv)表达载体pTMF scFv ,将重组质粒pTMF scFv转化到大肠杆菌BL2 1(DE3) ,实现了单链抗体的高效表达 .表达的单链抗体占菌体总蛋白 2 5%～ 30 % .该重组蛋白以包涵体形式存在 ,分子量为 30kD .经过金属螯合亲和层析纯化、复性和凝胶过滤纯化 ,得到电泳均一的单链抗体 .再经化学诱变 ,得到含硒单链抗体酶 ,其谷胱甘肽过氧化物酶活性为 330 0U μmol.采用荧光滴定法测定了单链抗体对谷胱甘肽的结合常数     

化学修饰单克隆抗体模拟谷胱甘肽过氧化物酶

化学修饰具有底物谷胱甘肽（ＧＳＨ）结合部位的单克隆抗体（４Ａ４）使其结合部位上的丝氨酸（Ｓｅｒ）转变成谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基因硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ）因而产生高活力的含硒抗体酶（Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ）突变的４Ａ４（ｍ４Ａ４）的ＧＰＸ活力达到了天然酶活力的１９％并对ｍ４Ａ４的酶学性质和动力学性质进行了研究;硒代谷胱甘肽（ＧＳｅＨ）连到４Ａ４结合部位,其ＧＰＸ活力由３．８６Ｕ／μｍｏｌ提     

抗体酶正在问世

把抗体与催化剂的优点合并起来将有助手设计蛋白质用于治疗疾病与化学加工并有助于加速合成与改进提纯方法。目前美国的IGEN公司正在研究使其商业化。这方面的工作具有重要的实际的与理论的意义。     

化学修饰单克隆抗体模拟谷胱甘肽过氧化物酶

化学修饰具有底物谷胱甘肽（ＧＳＨ）结合部位的单克隆抗体（４Ａ４）,使其结合部位上的丝氨酸（Ｓｅｒ）转变成谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团硒代半胱氨酸（Ｓｅ－Ｃｙｓ）,因而产生高活力的含硒抗体酶（Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ）．突变的４Ａ４（ｍ４Ａ４）的ＧＰＸ活力达到了天然酶活力的１９％,并对ｍ４Ａ４的酶学性质和动力学性质进行了研究;硒代谷胱甘肽（ＧＳｅＨ）连到４Ａ４结合部位,其ＧＰＸ活力由３．８６Ｕ／μｍｏｌ提高到５９８．９Ｕ／μｍｏｌ用黄嘌呤氧化酶／次黄嘌呤为中心的心肌线粒体自由基损伤模型证明Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ（ｍ４Ａ４）可减轻活性氧对线粒体的损伤。     

植物谷胱甘肽过氧化物酶研究进展

氧化胁迫可诱导植物多种防御酶的产生,其中包括超氧化物歧化酶(SOD,EC1.15.L1)、抗坏血酸过氧化物酶(APX,EC1.11.1.11)、过氧化氢酶(CAT,E.C.1.11.1.6)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPXs,EC1.11.1.9).它们在清除活性氧过程中起着不同的作用.GPXs是动物体内清除氧自由基的主要酶类,但它在植物中的功能报道甚少.最近几年研究表明,植物体内也存在类似于哺乳动物的GPXs家族,并对其功能研究已初见端倪.本文综述了有关GPXs的结构以及植物GPXs功能的研究进展.     

萝卜过氧化物酶对小鼠机体抗氧化作用的研究

目的 探索新的抗氧化剂.方法 研究萝卜过氧化物酶(POD)对小鼠肝、脾和肾脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)的影响.结果 用不同剂量的POD处理后,可以提高肝、脾和肾的SOD、GSH-Px的活性,减低丙二醛的含量.结论 萝卜过氧化物酶可以提高机体的抗氧化能力.     

大鼠肝脏的四种抗过氧化酶类的活性与鼠龄的关系

近年来的研究证实不少疾病的起因和老化的发生均与自由基和脂质过氧化的作用有关,因而一些与自由基和脂质过氧化物的正常代谢密切相关的抗过氧化酶类的研究越来越受到生物学家和医学家们的重视。虽然对于抗过氧化酶类的化学和生物学特性及与某些疾病发病的关系都作了较为详尽的研究,但对于生物年龄与这些酶类活性的关系的研究还很少报道。本文报道了四种抗过氧化酶类与鼠龄的关系。     

亚硒酸钠对小麦幼苗中谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽转硫酶活性以及谷胱甘肽含量的影响

用1.0 mg·L-1的亚硒酸钠根施小麦幼苗,测定亚硒酸钠对谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽转硫酶活性以及还原性谷胱甘肽含量的结果表明,外源亚硒酸钠对麦苗地上部的谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽转硫酶活性均有诱导作用,使麦苗体内的谷胱甘肽含量水平增加.     

硒抗辐射损伤作用的探讨

小鼠分次腹腔注射1.5mg Se/kg后,用 ⁶⁰Co 6.0Gy一次照射,观察硒对血及肝脏亚细胞组分线粒体GSHPx活性,LPO含量改变和 ³H-TdR掺入的影响,以及在不同时间血和肝的GSHPx活性变化。并对不同剂量硒对LPO形成的影响进行了研究。结果表明,给硒及 ⁶⁰Co照射后小鼠体内的GsHPx活性显著增高;硒表现一定的抗辐射损伤作用和对损伤机体的恢复作用。另一方面,当给硒量在0.5mg/kg以上时,随着硒浓度的增加,LPO也增加,存在剂量效应关系。     

活性氧对巨噬细胞呼吸爆发影响及云芝多糖的保护作用

用化学发光法观察到叔丁基氢过氧化物对培养的小鼠腹腔巨噬细胞呼吸爆发有强烈的抑制作用。云芝多糖经腹腔注射后,能增强巨噬细胞呼吸爆发功能对叔丁基氢过氧化物损伤的抵抗力。云芝多糖处理的巨噬细胞谷胱甘肽过氧化物酶基础活力显著提高,在叔丁基氢过氧化物作用下,云芝多糖处理的巨噬细胞仍有较高的谷胱甘肽过氧化物酶活力。说明巨噬细胞的免疫功能与谷胱甘肽过氧化物酶活力有关,非特异性免疫多糖可提高细胞抗氧化能力,减轻活性氧损伤作用。     

植物谷胱甘肽过氧化物酶研究进展

氧化胁迫可诱导植物多种防御酶的产生, 其中包括超氧化物歧化酶(SOD, EC1.15.1.1)、抗坏血酸过氧化物酶(APX, EC1.11.1.11)、过氧化氢酶(CAT, E.C.1.11.1.6 )和谷胱甘肽过氧化物酶(GPXs,EC1.11.1.9)。它们在清除活性氧过程中起着不同的作用。GPXs是动物体内清除氧自由基的主要酶类,但它在植物中的功能报道甚少。最近几年研究表明, 植物体内也存在类似于哺乳动物的GPXs家族, 并对其功能研究已初见端倪。本文综述了有关GPXs的结构以及植物GPXs功能的研究进展。     

兼具SOD和GPX活力的双功能酶的制备及性质研究

用苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）和Ｈ_２Ｓｅ相继处理铜锌超氧化物岐化酶（Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ）,将酶分子中的丝氨酸（Ｓｅｒ）转化为硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ）,从而引入了谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团,使其在ＳＯＤ酶活性大部分保留的情况下,具有ＧＰＸ活性,其ＧＰＸ活力是ＰＺ５１活力的３０倍。研究了双功能酶的最佳制备条件,包括ＰＭＳＦ的剂量、反应最适温度及Ｈ_２Ｓｅ处理时间等,并用电子能谱、ＤＴＮＢ等方法测定了双功能酶的硒含量;测定了双功能酶对不同底物的米氏常数及双功能酶的荧光光谱、紫外吸收光谱及稳定性。     

水分胁迫对刺槐叶和根谷胱甘肽抗氧化系统的影响

在人工控水条件下,采用土壤最大持水量70%、55%、40%的水分处理模拟环境中的正常水分、轻度和重度水分胁迫处理,测定了刺槐叶片和根系中还原型谷胱甘肽(GSH)和还原型抗坏血酸(AsA)含量以及谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,以探讨水分胁迫条件下刺槐谷胱甘肽抗氧化系统的保护作用.结果显示:各水分处理的刺槐叶片GSH和AsA含量及GR 和SOD活性均明显高于根,根中GSH-Px活性只有在重度水分胁迫处理下大于叶片.随水分胁迫加剧,刺槐GSH含量在叶片中先升高后降低,在根中不断升高;AsA含量在叶中持续降低,在根中先升高后降低;GR活性在叶片和根系中都会降低,GSH-Px和SOD活性在叶中先升高后降低,在根中均持续升高.研究表明,刺槐谷胱甘肽抗氧化系统的GSH和GSH-Px对干旱胁迫诱发的活性氧清除起主要作用,同时提高GSH含量和GSH-Px活性是刺槐应对干旱胁迫的重要措施.     

GPX8的肿瘤调控机制及临床研究进展

谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidases,GPXs)是抗氧化酶系的重要成员之一,这些酶促进过氧化氢代谢,保护细胞膜结构和功能免受氧化损伤。其中,GPX8是最新发现的家族成员,它位于内质网中,是一种非特异性的抗氧化酶。GPX8的基因突变以及对DNA甲基化的影响都与肿瘤的发生密切相关。GPX8在多种肿瘤组织中异常表达,影响肿瘤的免疫微环境,在肿瘤的迁移和侵袭等方面具有重要的调节作用。但到目前为止GPX8在肿瘤中作用机制的研究甚少,为了更加全面地了解GPX8在肿瘤中的作用,本文对GPX8在胶质细胞瘤、胃癌和浸润性乳腺癌等多种肿瘤中的调控机制,以及其在临床患者治疗和预后评估中的作用进行了详细地综述。同时,本文阐述了GPX8在肾透明细胞癌、肝细胞癌和胰腺癌中近几年的最新研究进展。本文不仅概括了GPX8的研究现状,也总结了研究的不足,旨在为进一步深入研究GPX8在肿瘤中的调节机制以及临床寻找新的靶向治疗方法提供有利的理论基础。     

小鼠全血中谷胱甘肽过氧化物酶活力的微量测定法

报道了用分光光度计法直接测定小鼠全血中谷胱甘肽过氧化物酶GSH-PX活力的方法.取血样10μl,423nm为测定波长,三氯醋酸为蛋白沉淀剂,在pH6.5,3min的酶反应条件下,反应剩余的谷胱甘肽和其与DTNB试剂反应生成的颜色产物成线性相关.该法灵敏度高,重复性好,所需仪器简单,可成为科研及临床研究工作中分析全血中GSH-PX的重要方法之一     

小鼠谷胱甘肽过氧化物酶分布的免疫组化研究

本文应用免疫组化PAP法对GSH-Px在小鼠各组织的分布进行观察,发现GSH-Px广泛存在于肝、肾、肺、胰、结肠、心肌、骨骼肌、脑、肾上腺、甲状腺以及睾丸等组织中,在肝脏小叶周边带肝细胞阳性反应明显强于中央带,肾脏酶阳性反应主要见于肾皮质近曲小管上皮细胞,肾上腺髓质嗜铬细胞、胰岛β细胞、甲状腺间质C细胞以及睾丸Leydig细胞均呈中度至强阳性反应。并就该酶细胞内的定位与其代谢功能的关系进行了讨论。     

TNT在大鼠晶状体内的代谢及其对晶状体中抗氧化相关酶活性的影响

大鼠皮下注射ＴＮＴ,以ＨＰＬＣ分析其在晶状体内的代谢过程,并检测晶状体谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶及超氧化物歧化酶的活性变化。发现在注射ＴＮＴ后２ｈ即可在晶状体内检测到为量极少的ＴＮＴ及其代谢产物,第１２ｈ一氨基二硝基甲苯含量达最高峰。鼠龄较小的大鼠晶状体内ＴＮＴ及其代谢产物高于鼠龄较大的大鼠．多剂量注射ＴＮＴ时大鼠晶状体内一氨基二硝基甲苯于第２天达到高峰,ＴＮＴ于第５天达饱和状态,第１８天一氨基二硝基甲苯含量与ＴＮＴ含量相近。谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶及超氧化物歧化酶活性在注射ＴＮＴ的第２天均有不同程度的升高,在第５天和第１８天维持在低活性状态。实验表明ＴＮＴ在晶状体内是通过硝基还原而代谢的．ＴＮＴ进入晶状体后初期可诱发晶状体抗氧化相关酶活性的增高,后期则导致晶状体抗氧化相关酶活性的降低。     

修饰血红素提高血红蛋白类过氧化物酶活性

利用苯酚或对羟基联苯对血红蛋白的血红素辅基进行化学修饰,将修饰后的血红素与脱辅基血红蛋白进行重组得到新的血红蛋白。以光吸收扫描分析修饰血红素和重组血红蛋白,证明新的重组血红蛋白构建成功。酶活力测定表明,修饰血红素得到的重组血红蛋白的类过氧化物酶活性都比天然血红蛋白的酶活力高,用对羟基联苯修饰血红素得到的重组血红蛋白的酶活提高明显,约是天然血红蛋白的1.6倍。     

溴化1-己基-3-甲基咪唑对斜生栅藻谷胱甘肽及其代谢酶的影响

研究了浓度为0、1、5、10、15、20 mg/L的新兴离子液体溴化1-己基-3-甲基咪唑([C6mim]Br)在24h、48h、72h和96h对斜生栅藻还原型谷胱甘肽（GSH）及其代谢酶-谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）、谷胱甘肽转硫酶（GST）和谷胱甘肽还原酶（GR）的影响。结果表明：GSH含量在24h、48h和72h时,在最低处理浓度下不变,其他处理浓度下随胁迫浓度增加而降低,96h时则与对照无差异或较小;GPX和GST的活性在72h之前明显升高（最高浓度组的GST活性有波动）,96h时均降低至对照水平;GR活性在24h时,[C6mim]Br=1 mg/L时升高,之后降低,在48h增高至对照水平,72h时,[C6mim]Br≥10 mg/L的处理组高于对照水平,96h时,除最低处理组外,均降至对照水平以下。GR是GSH系统中的限速酶,GST则是该系统中活性和灵敏性最高的酶,可作为[C6mim]Br胁迫时的敏感的生物标志物。1 mg/L的[C6mim]Br可引起藻细胞的氧化胁迫,具有环境毒性。