明党参内生菌的分离鉴定及其对金黄色葡萄球菌的抑制作用

研究郑州市栽培明党参内生菌资源状况,筛选出对金黄色葡萄球菌具有拮抗作用的内生菌。采用平板培养法从明党参中分离内生细菌,通过混菌法和牛津杯双层平板扩散法筛选出对金黄色葡萄球菌具有明显抑制作用的菌株,并通过培养特征、形态特征、生化特征、全自动微生物质谱检测、16S rDNA基因序列分析和系统进化树分析对菌株进行了分类学鉴定。在明党参中共分离到29株内生细菌,通过初筛和复筛后,筛选出对金黄色葡萄球菌具有明显抑制作用的4株菌株NMY1、NMJ10、NMG10、PMG3,其中NMJ10对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径达20.3 mm,经鉴定菌株NMJ10和菌株PMG3为芽胞杆菌属新菌种(Bacillus spp.),菌株NMY1为枯草芽胞杆菌(B.subtilis),菌株NMG10为假蕈状芽胞杆菌(B.pseudomycoides)。明党参内生菌具有多样性,其中芽胞杆菌属为优势菌株,有拮抗金黄色葡萄球菌活性高的菌株存在,其代谢产物对金黄色葡萄球菌有较高抑制作用,为抗菌药源成分的开发提供了新的来源。     

雪貂葡萄球菌的分离与鉴定

目的对雪貂分离菌株进行鉴定。方法通过菌落、菌体形态、生化特征等细菌学检测方法和药敏实验对所分离菌株进行鉴定。结果根据生物学特性和药敏实验确定所分离菌株为金黄色葡萄球菌和中间葡萄球菌。结论分离菌株为金黄色葡萄球菌和中间葡萄球菌。     

榄绿粗叶木茎甲醇提取物体外抗菌活性研究

目的研究榄绿粗叶木茎甲醇提取物(以下简称MESLL)的抗菌作用及机理。方法体外抗菌实验,采用抑菌圈法及MIC法测定了金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌和大肠杆菌5种临床常见致病性菌株的抗菌活性。2结果 MESLL对金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌均有一定程度的抗菌活性,而对其它3种菌株则无明显抑制作用;结论 MESLL对金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌两种测试菌株具有一定抗菌活性。     

中型滇丁香抑菌及抗耐药菌株作用的研究

采用平板法 ,对中型滇丁香乙醇浸膏抑菌和抗耐药菌株的活性进行研究 ,发现其对金黄葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌敏感菌株具有抑制或杀菌作用 ;对金黄葡萄球菌、大肠埃希菌的耐药菌株没有抑菌或杀菌的作用 ;以青霉素为对照 ,发现其对大肠埃希菌和白色念珠菌的抑菌作用比青霉素明显。     

金黄色葡萄球菌RNaseH Ⅰ、RNaseH Ⅱ和RNaseH Ⅲ突变菌株的构建及功能研究

目的:在金黄色葡萄球菌中分别构建RNaseHⅠ、RNaseHⅡ和RNaseHⅢ的突变菌株,并研究它们在金黄色葡萄球菌中的生物学功能。方法:利用同源重组的方法在金黄色葡萄球菌中分别构建RNaseHⅠ、RNaseHⅡ和RNaseHⅢ的插入突变菌株,检测突变株生长速度、溶血活性及外分泌蛋白表达水平与野生型的差异,进一步通过流式细胞术检测突变株外分泌蛋白细胞毒性的改变,同时在体外检测突变株在全血中的存活能力。结果:构建了金黄色葡萄球菌RNaseHⅠ、RNaseHⅡ和RNaseHⅢ的插入突变菌株;表型检测结果显示,与野生型菌株相比,3种突变株的生长速度减慢,溶血素和外分泌蛋白明显减少;流式细胞术检测结果显示3种突变株毒性比野生型菌株减弱;全血杀伤实验结果显示3种突变株在全血中的存活率低于野生型菌株。结论:RNaseHⅠ、RNaseHⅡ和RNaseHⅢ在金黄色葡萄球菌生长繁殖、毒素产生和侵袭机体的过程中有重要作用,它们可能与金黄色葡萄球菌的致病性相关。     

美洲大蠊肠道内生细菌的分离及其初步抑菌活性研究

分离鉴定美洲大蠊肠道内生细菌,并初步研究了其抑菌活性。采用平板稀释法对美洲大蠊肠道内生细菌进行分离纯化,分离菌株通过形态学观察和16S rDNA基因序列BLAST比对进行种属鉴定。以金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希氏菌4株细菌为对象,采用牛津杯法初步鉴定各分离菌株的抑菌活性。BLAST比对分析结果表明:从15只美洲大蠊肠道内分离鉴定出125株内生细菌,分属12科20属。初步抑菌活性显示:部分菌株对金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希氏菌有明显抑菌活性。美洲大蠊肠道内生菌种类繁多,而且较多菌株具有抑菌活性。     

以agr基因为靶点快速检测金黄色葡萄球菌方法的建立

旨在建立一种以agr基因为靶点,快速检测金黄色葡萄球菌的环介导等温扩增（LAMP)方法。针对金黄色葡萄球菌附属基因调控基因agr序列,设计了4条特异性引物;优化了LAMP体系中甜菜碱、dNTP浓度、长短引物比等因素;通过对14株不同金黄色葡萄球菌菌株和4株其他常见食品致病菌株进行检测,评估引物特异性。结果表明,在Mg²⁺浓度为2.4 mmol/L,dNTP浓度为0.8 mmol/L,甜菜碱浓度为0.1 mol/L,长短引物比为1:8,65 ℃反应50 min条件下扩增可达最佳效果。优化后的LAMP对14株金黄色葡萄球菌均表现为阳性,对4株非金黄色葡萄球菌菌株表现为阴性,证明引物具有特异性。本文首次利用agr基因作为靶基因片段,建立了一个简单、快速、特异性强的检测金黄色葡萄球菌的方法,在食品安全检测方面极具意义。     

青天葵体外抑菌活性研究

目的:研究青天葵水提取液、醇提取液和水醇提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌、伤寒沙门菌、绿脓杆菌、黑曲霉菌6种菌株的抑菌效果。方法:制备青天葵3种提取液,采用试管两倍稀释法测定3种提取液对金黄色葡萄球菌等6种菌株的最低抑菌浓度(MIC)。结果:青天葵水提取液对伤寒沙门菌的抑菌作用较强(MIC为12.5%),对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和黑曲霉菌的抑菌作用较弱(MIC为50%);醇提取液对伤寒沙门菌和绿脓杆菌都有很强的抑菌作用(MIC为6.25%),对金黄色葡萄球菌也有较强的抑菌活性(MIC为12.5%),对大肠杆菌的抑菌作用较弱(MIC为50%);水醇提取液的抑菌活性与醇提取液相当。结论:青天葵对金黄色葡萄球菌等6种菌株表现出不同程度的抑制活性。     

畜禽养殖粪污中典型致病菌的三重微滴式数字PCR定量检测方法的建立北大核心CSCD

为精准、快速检测畜禽养殖粪污中典型致病微生物,减少人畜共患病的传播风险,以金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌(O157:H7)和肠炎沙门氏菌3种常见致病菌为研究对象,通过筛选其特异性引物与探针、优化反应系统,建立起快速、稳定的多重微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)反应体系。通过检测不同菌株验证该体系的特异性,并确定畜禽养殖废弃物致病菌的检出限,开发出多重微滴数字PCR快速检测方法。研究结果表明,各对引物探针对目标菌株均能扩增,ddPCR体系内未出现交叉反应,检测肠炎沙门氏菌的绝对定量检测低限为0.68 copies/μL;检测金黄色葡萄球菌的绝对定量检测低限为0.79 copies/μL;检测大肠埃希氏菌的绝对定量检测低限为1.02 copies/μL。研究建立的方法可实现对畜禽养殖粪污中3种典型致病菌的高效率、高精度的检测。     

海洋真菌抗病原菌生物活性物质的研究

对分离自大连海域的海洋生物共附生真菌进行了抗菌活性的初筛与复筛,发现有6株具有抗表皮葡萄球菌和铜绿假单胞菌的活性,发现培养基成分及培养方式对活性菌株抗菌物质的产生有显著影响。菌株11-N2抗菌活性最强,其发酵液抗表皮葡萄球菌的效价相当于为氨苄青霉素11.4 U/mL,抗铜绿假单胞菌的效价相当于氨苄青霉素6.0 U/mL。通过硅胶柱层析对该菌株提取物的抗菌活性成分进行了初步追踪,发现二氯甲烷∶甲醇=15∶1洗脱组分具有最强活性,薄层层析显示该组分主要成分在254 nm紫外光下具有强吸收,薄层显色反应提示其主要成分可能为含胺基的甾体或三萜类、有机胺类、吲哚衍生物类化合物。     

类SCC样甲氧西林敏感性金黄色葡萄球菌的基因组学分析

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S. aureus), 作为一种常见的致病菌常可导致严重感染性疾病. 金黄色葡萄球菌的主要特点是易产生耐药性. 临床上运用多重PCR方法对S. aureus耐药菌株进行分型. SCC作为一种mecA基因的转运载体, 介导金黄色葡萄球菌产生耐药性. 本研究报道了一株新甲氧西林敏感性金黄色葡萄球菌的全基因组序列信息, 即类SCC样MSSA463菌株, 经多重PCR方法, 该菌株被误鉴定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌, 结果与药敏结果相冲突. 为此, 运用焦磷酸测序方法完成了该菌株的全基因组测序, 并与已知金黄色葡萄球菌的基因组序列信息不同, 发现可读框(CZ049; AB037671)存在于attL, attR反向重复序列的临近下游. 这些结果提示, 在金黄色葡萄球菌与其他微生物之间可能存在一种水平基因转移, 并改变了金黄色葡萄球菌对药物的敏感性, 推测attL, attR反向重复序列可能作为外源性基因的插入部位而存在.     

空气环境中几种细菌检测与16S rRNA测序鉴定

采集空气环境微生物,根据菌落和革兰氏染色特征,分离5株细菌。提取分离株DNA,采用设计的16SrRNA引物扩增DNA片段;纯化PCR产物,进行测序反应并再纯化,上机读序。拼接与校对DNA序列,在NCBI网站进行Blast,鉴定细菌型别。5株菌株分别是表皮葡萄球菌、头状葡萄球菌、施氏假单胞菌、溶血葡萄球菌和大肠杆菌;其中溶血葡萄球菌是致病菌,其他4株是条件致病菌。这提示,应警惕空气环境中致病菌的感染。     

金黄色葡萄球菌的分离及其抗药性的研究

从土壤中分离出金黄色葡萄球菌后,以其为出发菌株,采用梯度培养皿法,利用青霉素、四环素、红霉素、氯霉素和链霉素5种抗生素,对自然界中和经过NaNO2诱变的菌株进行了耐药性菌株的分离及抗性水平的确定。在自然界中分离的金黄色葡萄球菌只对青霉素(80μg/mL)和四环素(60μg/mL)有抗性,而对红霉素、氯霉素和链霉素则没有抗性。经过NaNO2诱变后,金黄色葡萄球菌对四环素(40μg/mL)的抗性降低,但对青霉素(120μg/mL)和其他3种抗生素的抗性均有所增加。     

葡萄球菌核酸酶对金黄色葡萄球菌和其他细菌生物被膜形成的抑制作用

葡萄球菌核酸酶是金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）的一个重要毒力因子,它的生物学作用仍没有完全阐述清楚．本研究观察到金黄色葡萄球菌核酸酶产生菌株的生物被膜形成受到明显抑制．葡萄球菌核酸酶是由nucl基因编码,当nucl基因被敲除后,突变菌株生物被膜形成能力大大增加．扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜用于评价nucl基因在生物被膜形成中的作用．另外,nucl基因编码的产物——葡萄球菌核酸酶和NUCl重组蛋白对其他生物被膜形成细菌（铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae）和副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis））同样有明显抑制作用．本研究表明,葡萄球菌核酸酶和生物被膜的形成之间有直接联系,并且葡萄球菌核酸酶起着抑制生物被膜形成的重要作用,为研究葡萄球菌核酸酶的生物学作用和理解葡萄球菌核酸酶抑制生物被膜形成提供理论依据．     

金诺芬对表皮葡萄球菌及其生物膜的影响

目的 研究金诺芬对表皮葡萄球菌及其生物膜的作用。方法 利用微量稀释法药敏试验检测金诺芬对表皮葡萄球菌浮游菌生长的影响,并利用结晶紫染色和激光共聚焦显微镜观察金诺芬对表皮葡萄球菌生物膜形成的影响。结果 金诺芬对表皮葡萄球菌的MIC和MBC分别为0.125~0.250 μg/mL和2.000~4.000 μg/mL。同时,4 μg/mL金诺芬还能显著抑制表皮葡萄球菌标准菌株和临床菌株生物膜的形成（P<0.05）。通过激光共聚焦显微镜观察发现金诺芬能有效抑制生物膜的形成,降低生物膜的聚集,并增加死亡细菌的比例。结论 金诺芬能显著抑制表皮葡萄球菌浮游菌的增殖和生物膜的形成。     

产SEB金黄色葡萄球菌α-溶血毒素基因缺失菌株的构建

构建产肠毒素B(Staphylococcal enterotoxin B ,SEB)的金黄色葡萄球菌α-溶血毒素（α-hemolysin, α-HL)缺失菌株。首先构建用于α-HL基因敲除的同源重组质粒pMHL-α,经金黄色葡萄球菌RN4220修饰后再通过原生质体转入金黄色葡萄球菌SM-01。含重组质粒pMHL-α的金黄色葡萄球菌SM-01在42℃诱导条件下培养多代,最终筛选出α-溶血毒素基因缺失菌株。经序列分析和血平板溶血实验结果证明最终获得产SEB金黄色葡萄球菌α-HL缺失菌株。为野生型金黄色葡萄球菌的体内遗传操作及构建产超抗原药物金黄色葡萄球菌基因工程菌株提供了一定的理论基础和方法。     

临床分离金黄色葡萄球菌药物敏感性及其生物膜形成能力的研究CSCD

目的 初步探讨临床分离金黄色葡萄球菌药物敏感性与其生物膜形成的关系。方法 收集2020年1月至2022年1月大同市第二人民医院检验科临床送检的痰液、尿液、血液和伤口分泌物等样本。采用VITEK-2全自动微生物菌株鉴定系统分离出非重复致病性金黄色葡萄球菌60株;采用刚果红试验定性鉴定产膜菌株和非产膜菌株;采用VITEK-2全自动微生物药敏试验系统进行药敏分析;采用96微孔板试验半定量鉴定菌株产膜能力。结果 通过VITEK-2全自动微生物菌株鉴定系统检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)32例(53.3%),甲氧西林敏感型金黄色葡萄球菌(MSSA)28例(46.7%)。生物膜阳性菌30株(50.0%),生物膜阴性菌30株(50.0%)。其中,MRSA菌株产膜率53.1%,MSSA菌株产膜率46.4%,二者差异无统计学意义(P>0.05)。96微孔板试验筛选出强产膜菌株7株(23.3%),弱产膜菌株23株(76.7%)。强产膜菌株中,MRSA菌株6株,占85.7%,耐药5种以上占71.4%;弱产膜菌株中,MRSA菌株11株,占47.8%,耐药5种以上占26.1%;30株生物膜阴性菌,耐药5种以上占26.7%。结论 本研究临床分离的金黄色葡萄球菌中,MRSA菌株产膜能力强于MSSA菌株,产膜菌株耐药种类高于非产膜菌株。     

乳杆菌DM8909对阴道上皮细胞粘附现象的初步研究

本文分析了乳杆菌DM8909菌株及自阴道分离的肠杆菌、葡萄球菌、白色念珠菌对阴道上皮细胞的粘附能力。结果显示,在正常阴道酸性条件(pH3.5—4.5)下,DM8909菌株对阴道上皮细胞的粘附能力明显高于肠杆菌(P<0.01)、葡萄球菌(P<0.01)、白色念珠菌(P<0.01);随pH增加,DM8909粘附能力降低,肠杆菌、葡萄球菌、白色念珠菌粘附能力增强;DM8909菌株能较强地抑制肠杆菌、葡萄球菌对阴道上皮细胞的粘附。本文提示,乳杆菌粘附形成的空间占位是防止其他菌对阴道组织附着的一个重要的保护性机制。     

桑螵蛸挥发油对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的体外抑制效应的初步探究

目的研究桑螵蛸挥发油提取物对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的体外抑制效应。方法采用六孔板为载体培养细菌生物被膜,在刚果红平板鉴定使用的金黄色葡萄球菌菌株为生物被膜阳性菌株的基础上,再采用银染后通过倒置显微镜观察法来观察桑螵蛸挥发油提取物及其他药物对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的体外抑制效应。结果空白对照组细菌生物被膜明显,药物实验组细菌生物被膜受到抑制,且桑螵蛸挥发油实验组抑制效果最明显。结论桑螵蛸挥发油提取物对金黄色葡萄球菌生物被膜的形成有明显的抑制效应,为下一步研究其详细有效成分及开发提供基础数据和理论依据。     

桑螵蛸挥发油对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的体外抑制效应的初步探究CSCD

目的研究桑螵蛸挥发油提取物对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的体外抑制效应。方法采用六孔板为载体培养细菌生物被膜,在刚果红平板鉴定使用的金黄色葡萄球菌菌株为生物被膜阳性菌株的基础上,再采用银染后通过倒置显微镜观察法来观察桑螵蛸挥发油提取物及其他药物对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的体外抑制效应。结果空白对照组细菌生物被膜明显,药物实验组细菌生物被膜受到抑制,且桑螵蛸挥发油实验组抑制效果最明显。结论桑螵蛸挥发油提取物对金黄色葡萄球菌生物被膜的形成有明显的抑制效应,为下一步研究其详细有效成分及开发提供基础数据和理论依据。