补料培养与溶氧控制联合应用对红豆杉细胞培养的影响

为进一步提高红豆杉 (Taxuschinensis (Pilg.)Rehd .)细胞培养过程中紫杉醇的产量 ,采用细胞悬浮培养方法研究了补料培养与溶氧控制联合应用对紫杉醇产量的影响。 5L反应器中补料培养研究表明 ,培养过程中第 16天添加含 2 0g/L蔗糖的补料培养液有利于细胞的生长及紫杉醇的合成。 2 0L反应器中补料培养的研究结果表明 :2 0 %饱和度培养时紫杉醇含量最高 (0 .98mg/gDW) ,但 4 0 %～ 6 0 %溶氧饱和度能提高紫杉醇的产量。进一步研究表明 ,细胞在 6 0 %溶氧饱和度培养 2 0d后转入 2 0 %溶氧饱和度继续培养 12d ,能显著提高紫杉醇产量。补料培养与溶氧控制联合应用时 ,2 0L反应器中红豆杉细胞培养紫杉醇产量可达 18.7mg/L。     

高效液相色谱法测定毛豆中吡虫啉残留量

采用高效液相色谱法测定毛豆中吡虫啉农药残留。试样用二氯甲烷超声波提取,中性氧化铝柱净化,石油醚去除脂类杂质,以0.2%冰乙酸水溶液-乙腈(70:30,体积比)为流动相,配备Agilent TC-c18柱、高效液相色谱紫外检测器检测(HPLC-UV),外标法定量。实验表明,毛豆样品中吡虫啉添加回收率为84.0%~102.8%,相对标准偏差(n=6)为6.8%~10.9%,样品中吡虫啉最低检测浓度为0.003 mg/kg。     

补料培养与溶氧控制联合应用对红豆杉细胞培养的影响

为进一步提高红豆杉(Taxus chinensis (Pilg.) Rehd.)细胞培养过程中紫杉醇的产量,采用细胞悬浮培养方法研究了补料培养与溶氧控制联合应用对紫杉醇产量的影响.5 L反应器中补料培养研究表明,培养过程中第16天添加含20 g/L蔗糖的补料培养液有利于细胞的生长及紫杉醇的合成.20 L反应器中补料培养的研究结果表明:20%饱和度培养时紫杉醇含量最高(0.98 mg/g DW),但40%～60%溶氧饱和度能提高紫杉醇的产量.进一步研究表明,细胞在60%溶氧饱和度培养20 d后转入20%溶氧饱和度继续培养12 d,能显著提高紫杉醇产量.补料培养与溶氧控制联合应用时,20 L反应器中红豆杉细胞培养紫杉醇产量可达18.7 mg/L.     

聚乙二醇对东北红豆杉培养细胞的生长及紫杉醇生产的影响

在改良的B5培养基中加入不同浓度的聚乙二醇对东北红豆杉培养细胞进行摇瓶培养,通过不同时期取样并测定细胞鲜,干重及用HPLC测定紫杉醇的含量,发现聚乙二醇对东北红豆杉培养细胞的生长及紫杉醇生产均有明显的促进作用,聚乙二醇为10g/L时,对细胞生长最为有利,细胞培养16d可达到最大生物量,其平均鲜重为28．73g/瓶,增重3．8倍,平均干重为2．14g/瓶,增重3．1倍,聚乙二醇为20g/L,对紫杉醇的生产最有利;细胞培养25d时,培养基中紫杉醇的含量达到最高水平,其含量为2350ug/L,是不加聚乙二醇的11倍。     

保健食品中番茄红素测定方法的建立

本实验对保健品中番茄红素的提取净化及液相色谱检测方法进行研究。样品用没食子酸叔丁酯（TBG）-二氯甲烷溶液溶解,超声波辅助提取,用PTFE滤膜过滤。采用C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,以乙腈和甲醇溶液洗脱测定,外标法定量。番茄红素在5.00-200 μg/mL浓度范围的相关系数为0.993,检出限为0.5μg/mL,方法的回收率为81%-96%,相对标准偏差为3.1%-5.9%。该方法简便、准确,适用于保健品中番茄红素的检测。     

红豆杉高产细胞系快速建立和更新的新方法

目的：通过优化培养基和培养条件,建立太行红豆杉速生细胞系,为红豆杉细胞工厂化生产提供原种细胞系和繁殖技术。方法：以太行红豆杉为材料,筛选B5、WPS、MS等3种培养基和6-卞基嘌呤（6-BA）、萘乙酸（NAA）、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）等3种激素组合,采用液体、半固体、纸桥共3种培养方法继代培养并筛选高产细胞系。结果：B5＋NAA（1.0mg/L）＋6-BA（0.5mg/L）＋2,4-D（1.0mg/L）为最适愈伤组织诱导培养基,诱导率达100%;B5＋NAA（1.0～1.5mg/L）＋2,4-D（1.5～2.0mg/L）＋6-BA（0.5mg/L）为最佳继代培养基,生长量最高可达0.30g/（g·d）（鲜重）。结论：初步建立了红豆杉细胞系快速建立和繁殖新方法,用半固体培养产生初代细胞系、液体培养将细胞系同步化、纸桥培养快速繁殖细胞系,并通过检测紫杉醇含量不断更新细胞系。该细胞系体系建立方法简单,纯化速度快,易更新,产物细胞系可作为工厂化生产的原种细胞系。     

气相色谱-质谱法测定湿巾中苯氧乙醇等6种防腐剂

文章采用气相色谱-质谱分析法对湿巾中的苯氧乙醇、1,2-辛二醇、1,2-己二醇、1,2-戊二醇、1,3-丁二醇和1,10-癸二醇等6种防腐剂进行检测。该方法的检出限为0.6 mg/L，定量检出限为2 mg/L，加标回收率在90.5%～103.5%(S_RSD<5%)。     

高效液相色谱法测定17AA氨基酸注射液中N-乙酰-L-半胱氨酸和N-乙酰-L-酪氨酸

建立了一种用高效液相色谱测定 17AA氨基酸注射液中N 乙酰 L 半胱氨酸和N 乙酰 L 酪氨酸含量的方法。样品经稀释后 ,直接上机测定 ,其色谱条件为 :WatersSymmetryC18色谱柱 ,流动相为 8.5mmol/LNaAc - 5 %CH3 OH (pH =4.0 ) ,柱温36℃ ,流速 1.0ml/min ,检测波长 195nm ,N 乙酰 L 半胱氨酸在 5 .4mg/L到 5 40mg/L、N 乙酰 L 酪氨酸在 4.9mg/L到 490mg/L之间 ,标准曲线呈良好的线性关系 (r2 >0 .9999)。该方法具有良好的重现性 ,日内相对标准偏差小于 3% ,日间相对平均误差小于 7% ,样品回收率在 90 %～ 110 %之间。该方法与测定氨基酸注射液的其它高效液相色谱法相结合 ,能够对 17AA氨基酸注射液中所有氨基酸成分进行全面检测。     

组织培养和HPLC法研究红豆杉生物合成紫杉醇的组织化学定位

为了探索用组织培养法和高效液相色谱(HPLC)法研究红豆杉植物生物合成紫杉醇的组织化学定位,对南方红豆杉[Taxuschinensis(Pilger)Rehd.var.mairei(LemeeetL啨vl.)ChengetL.K.Fu]和曼地亚红豆杉(Taxusmediacv.Hicksii)各种组织进行了愈伤组织诱导培养,用HPLC法(检测条件:色谱柱为DiamonsilTMC18,5μm,4.60×250mm柱,检测波长为227nm,流动相为甲醇∶水∶乙腈=1∶2∶2,流速为1.2mlmin,柱温为35℃,灵敏度为0.16AuFs,进样量10μL)对组织培养物中紫杉醇含量进行检测,结果显示:红豆杉幼茎、幼茎皮、茎形成层、幼叶和顶端分生组织的组织培养物中紫杉醇含多以由分生组织细胞诱导培养所形成的愈伤组织为高。南方红豆杉以幼茎皮和茎形成层愈伤组织培养物中为高,分别为0.0409%(干重)和0.0407%(干重),曼地亚红豆杉则以茎形成层和顶端分生组织的愈伤组织培养物中为高,分别为0.025%(干重)和0.016%(干重),均是它们天然材料中含量的2.3～8倍。     

苯酚消毒剂中邻苯基苯酚和对叔戊基苯酚的高效液相色谱测定法

目的建立同时测定苯酚消毒剂中的邻苯基苯酚和对叔戊基苯酚2种杀菌有效成分的高效液相色谱法。方法采用安捷伦ZorbaxODS,25cmx4.6mm,粒径5μm的反相色谱柱,流动相为乙腈-1%醋酸溶液(60:40),流速1.5mL/min,检测波长278nm,柱温为25℃下进行检测。结果邻苯基苯酚和对叔戊基苯酚的线性范围为5~150mg/L,相关系数为0.9999,检出限为5mg/L,相对标准偏差小于1.02%,加标回收率为93.6%~98.5%。结论该方法操作简便、快速、灵敏度高,适合消毒剂中的邻苯基苯酚和对叔戊基苯酚的同时测定。     

几种促进剂的添加时间对中国红豆杉细胞悬浮培养紫杉醇合成的影响

采用正交实验检测中国红豆杉[Taxus chinensis(Pilger)Rehd.]细胞悬浮培养中水杨酸、硝酸银、氨基酸前体、D-果糖和硫酸镧的添加时间对细胞生长和紫杉醇(taxol)积累的影响.这些促进剂的添加时间对中国红豆杉细胞悬浮培养的生长没有明显的影响,但能明显促进紫杉醇的合成,当在细胞培养的第14 d添加1.67 mg/L硝酸银,第18 d添加0.1 mg/L水杨酸,第21 d添加氨基酸前体,第21 d添加10 g/L D-果糖和2 mg/L硫酸镧时对紫杉醇的促进作用最明显,在此最优组合处理时紫杉醇含量达到10.05 mg/L,相对于最差组合处理时紫杉醇含量仅有1.77 mg/L,紫杉醇含量提高5.7倍,这些因素的添加时间对紫杉醇合成的相互作用达不到显著水平.     

三种不同颜色果实的红豆杉树皮中紫杉醇含量比较研究

本研究比较了三种安徽宣城采集的不同颜色果实的红豆杉树皮中紫杉醇的含量。利用三氯甲烷料液比1:5,回流提取2 h,活性炭脱色后制备供试品溶液。采用HPLC法,Agilent HC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水-乙腈(24:30:36)为流动相,在227 nm波长下检测紫杉醇含量。检测发现红豆杉树皮中紫杉醇含量为0.000 564 mg/g,黄色果实红豆杉树皮中紫杉醇含量为0.000 785 mg/g,金黄色果实红豆杉树皮中紫杉醇含量为0.000 703 mg/g。安徽宣城发现的黄色果实红豆杉和金黄色果实红豆杉树皮中的紫杉醇含量比红豆杉高,初步明确了黄色果实红豆杉的药用价值,为进一步发掘其产品价值提供了依据。     

气相色谱法测定液相合成蛋氨酸脑啡肽中杂质残留量

测定液相法合成蛋氨酸脑啡肽中三氟乙酸和醋酸的残留含量。应用气相色谱法,程序升温,离子火焰反应检测器,定量测定。结果可见,该法线性范围为0.001～0.08 mg/L,在此浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,方法的检出限为0.0003～0.012 mg/L,测定的回收率为97.2%～101.7%,相对标准偏差<1.09%。所建立的检测方法简便,快速,灵敏度高,重复性好,可应用于检测蛋氨酸脑啡肽中残留醋酸的含量。     

一种快速测定植物油中的草铵膦、草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸残留的方法

笔者建立了分散液液萃取非衍生-超高液相色谱-串联质谱快速检测植物油中的草铵膦、草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸残留的方法。样品用正己烷溶解分散,再通过乙腈-水(体积比1∶1)液液萃取,以5 mmol/L、p H为12. 0的乙酸铵-氨水溶液和乙腈为流动相,梯度洗脱,Dikma Polyamino氨基柱(2. 0 mm×150 mm,5μm)色谱分离,采用电喷雾离子源负离子模式多反应监测(MRM)模式进行质谱测定。通过基质外标法定量,进而降低样品基质效应的影响。结果表明:在去除样品基质干扰方面取得良好的效果,草铵膦、草甘膦、氨甲基膦酸的线性范围分别为0. 005～0. 1、0. 01～0. 2、0. 01～0. 2 mg/L,相关系数(R2)均大于0. 999;检出限分别为0. 01、0. 02、0. 02 mg/kg,定量限为0. 02、0. 04、0. 04 mg/kg;草铵膦、草甘膦、氨甲基膦酸在3档加标水平下的回收率在73. 2%～89. 6%,相对标准偏差(RSD)在4. 86%～9. 24%。本方法的前处理样品无需衍生,简便、快捷、高效、准确可靠,可用于植物油中草铵膦、草甘膦及氨甲基膦酸的快速检测。     

高效液相色谱法测定大鼠血清染料木素浓度

目的:建立大鼠血清中染料木素浓度的HPLC测定方法.方法:大鼠血清以叔丁基甲醚萃取,萃取物用氮气吹干后,用甲醇溶解用于色谱分析.色谱条件:采用Thermo C18柱(250ram×4.6mm,5μm);以乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾(35:65,pH=4.3)为流动相;流速为1.0mL/min;检测波长为260hm;柱温为40℃;进样量为10μL.结果:染料木素最低检测浓度为0.01mg/L;标准曲线线性范围为0.01～10.00μg/mL(r=0.9998);相对回收率为(101.31±3.47)%;日内RSD与日间RSD均小于10.00%.结论:该方法简便、快速、灵敏度高,重现性及稳定性较好,适用于大鼠血清染料木素浓度测定和药代动力学的研究.     

高效液相色谱法测定紫色疣石磺中的胆甾醇

本文建立了一种用高效液相色谱(HPLC)测定紫色疣石磺中胆甾醇含量的方法。采用COSMOSIL 5C18-MS-Ⅱ,(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以甲醇为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长204nm,柱温35℃,进样量20μL;检测得到胆甾醇含量在0.102~0.510mg/mL范围内与峰面积值的线性关系良好,相关系数R2为0.9998,回收率范围在96.08%~100.98%,RSD为1.72%;胆甾醇出峰时间为13min。本方法灵敏度和精密度高,分析时间短,可快速检测紫色疣石磺中的胆甾醇。紫色疣石磺样品中胆甾醇的平均质量浓度为503.7mg/kg。     

离子色谱法测定ACYW135群脑膜炎球菌结合物中Y群及W135群多糖含量

目的利用离子色谱法即高效阴离子交换柱层析—脉冲安培检测法(HPAEC-PAD),测定ACYW135脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群多糖含量的方法,并加以验证。方法将ACYW135脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群多糖用三氟乙酸(TFA)水解为特异性单糖(葡萄糖、半乳糖),并去除水解液中残留的TFA,用HPAEC-PAD分析检测,用PA10糖分析柱分离单糖,电化学检测器测定葡萄糖及半乳糖含量,用Chromeleon色谱工作站记录并分析数据。对上述方法进行专属性、准确性、重复性验证,确定该方法的检出限和定量限。结果 Y群和W135群多糖在TFA2.5 mol/L(终浓度)、90℃、4 h可完全水解为葡萄糖、半乳糖。对照品葡萄糖及半乳糖在0.10~60.00μg/m L范围内,质量浓度和色谱峰面积呈较好的线性关系,r均大于0.99,回收率为87.94%~109.80%,相对标准偏差(RSD)为1.00%~2.00%,检出限为0.05μg/m L(信噪比3∶1),定量限为0.10μg/m L(信噪比10∶1)。结论离子色谱法可同时检测脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群糖含量,该方法操作简便、灵敏、快速,干扰小,重现性好,适用于对相关疫苗生产过程中的质量控制。     

UPLC-MS/MS法同时测定益气养血口服液中的5种有效成分

建立了同时测定益气养血口服液中的淫羊藿苷、黄芪甲苷、黄芪皂苷域、五味子醇甲和麦冬皂苷D5种有效成分含量的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法,用Agilent Zorbax RRHD Eclipse Plus C18(50 mm×2.1 mm,1.8滋m)色谱柱,流动相：A相为乙腈溶液,B相为含0.2%甲酸的水溶液,流速为0.35 mL/min。在电喷雾电离(ESI)正离子模式下,采用的是多重反应监测模式(MRM)进行检测。结果表明,黄芪甲苷、黄芪皂苷域、淫羊藿苷、五味子醇甲和麦冬皂苷D的线性范围分别为0.003~12 mg/L、0.3~12 mg/L、0.009~18 mg/L、0.006~1.2 mg/L、0.003~3.0 mg/L;检出限分别为1滋g/L、1滋g/L、3滋g/L、2滋g/L、1滋g/L;5种成分的加样回收率为75.9%~104%;相对标准偏差均不大于3.8%。该方法简便、准确、快速、高灵敏度,已成功地用于实际的样品分析。     

螺旋藻中β-胡萝卜素高效液相色谱测定方法的研究

采用高效液相色谱法直接测定螺旋藻中β-胡萝卜素组分的含量.色谱柱为YMC-pack ODS(4.6mm i.dx 150 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-二氯甲烷(体积比60:30:10),在435nm波长处检测.研究结果表明:β-胡萝卜素的检测限为20ng,线性范围在4.60～36.80 mg/L,相关系数为0.9996,加样平均回收率为96.61%.方法准确、简便、快速,适用于螺旋藻及螺旋藻制品中β-胡萝卜素组分的检测.     

韭菜上五种有机磷农药的残留监测与安全性评价

【目的】2013—2016年,在北京、天津、河北和山东采集韭菜样品,采用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法检测甲胺磷、甲拌磷、甲基对硫磷、对硫磷和毒死蜱的残留量,并对其残留安全性进行评价。【方法】韭菜样品用乙腈提取,石墨碳固相萃取小柱净化,超高效反相液相色谱分离,三重四级杆质谱检测,基质匹配标准溶液的外标法定量,在添加浓度为0.01~5.0 mg/kg时,方法的准确度、灵敏度和精密度满足农药残留检测的要求。【结果】甲胺磷的最高检出浓度由70.51 mg/kg降低到0.03 mg/kg,超标率由38.10%降到2.03%;甲拌磷的最高检出浓度由6.45 mg/kg降低到0.04 mg/kg,超标率由23.81%降到1.35%;甲基对硫磷的最高检出浓度由6.62 mg/kg降低到0.13 mg/kg,超标率由25.40%降到2.70%;毒死蜱的最高检出浓度由3.95 mg/kg降低到0.47 mg/kg,超标率由15.87%降到4.73%;对硫磷的最高检出浓度由22.69mg/kg降低到0.03 mg/kg,超标率由15.08%降到1.35%。【结论】上述农药的最高残留检出浓度和超标率大幅降低,但是韭菜中仍能检出少量残留。应加强安全综合防治技术的研发,加强安全用药的宣传和指导,保障韭菜产品安全。