HeLa细胞的反式作用因子CTF／NF—1与其顺式作用元件的特异性作用

本文运用凝胶延迟反应和足迹法研究了ＨｅＬａ细胞核蛋白中的反式作用因子ＣＴＦ／ＮＦ－１与其对应的顺式作用元件的特异性作用。研究结果表明ＨｅＬａ细胞的ＣＴＦ／ＮＦ－１包含有不同分子量的组分,它们均能特异性结合于特异位点ＡＴＡＴＴＧＧＣＴＴＣＡＡＧＣＣＡＡＡＡＴＧＧＡ序列,形成至少５种不同分子量形式的因子－元件复合物,这一结果对阐明ＣＴＦ／ＮＦ－１复杂多样的调控机制及其组成种类有重要意义,此外,本文还建     

人基因组YAC克隆DNA的Alu—PCR反应条件的系统研究

在人基因组ＹＡＣ克隆的Ａｌｕ－ＰＣＲ指纹分析中要求ＤＮＡ扩增带具有ＹＡＣ特征性;在Ａｌｕ－ＰＣＲ方法对ＹＡＣ克隆中的人类基因组ＤＮＡ片段进行特异的同位素标记时则要求被增标记的ＤＮＡ序列在插入片段中具有一定弥散性,我们建立了两种不同的Ａｌｕ－ＰＣＲ反应体系以满足这一不同要求,并已得到较为满意的结果,根据不同条件下的Ａｌｕ－ＰＣＲ结果,分析了多引发位点ＰＣＲ中的一些现象,并作了解释。     

诱生型一氧化氮合酶基因启动子的结构及其调控

鼠类ＮＯＳ２基因５′端１．７ｋｂ序列几乎包含了所有的顺式作用元件,其中ＮＦκＢ结合位点,ＩＲＦ－ＲＥ,ＣＡＡＴｂｏｘ和ＧＡＳ４等元件对该在的诱导性转录调控至关重要,人ＮＯＳ２基因５′端３．７ｋｂ范围与鼠类有相似的调控元件,但该区域仅有基础启动子活性,其诱导性调控元件在－３．７ｋｂ的上游,其中ＮＦκＢ结合位点着关键的作用。     

用ribozyme抑制增殖细胞核抗原的表达对HeLa细胞增殖的影响

增殖细胞核抗的（ＰＣＮＡ）是ＤＮＡ聚合酶δ的辅助蛋白,它是细胞染色体ＤＮＡ复制所必需的。人工设计的ｒｉｂｏｚｙｍｅ具有可特异地切割ＰＣＮＡｍＲＮＡ的性质,将此ｒｉｂｏｚｙｍｅ的自剪体内表达质粒导入ＨｅＬａ细胞,从细胞决ＲＮＡ中分离相应部分能在体外切割靶ＲＮＡ片段,证明此表达质粒在细胞内能表达出有活性的ｒｉｂｏｚｙｍｅ分子。与对照相比,导入ｒｉｂｏｚｙｍｅ表达质粒的ＨｅＬａ细胞进入Ｓ期的时间从１２ｈ     

逆转录病毒载体介导诱导型NO合酶在神经细胞中表达

为了深入研究诱导型一氧化氮合酶基因表达产物在阿片耐受和依赖中作用,采用脂质体介导基因转染技术,将ｉＮＯＳ ｃＤＮＡ重组逆转录病毒载体导入ＮＧ１０８－１５神经细胞,获得Ｇ４１８抗性克隆,命名为ＮＧ－ＬＮＣＸｉＮＯＳ细胞。ＤＮＡ印迹杂交,ＰＣＲ扩增及ＲＴ－ＰＣＲ和蛋白质免疫印迹杂交分析,证实ＮＧ－ＬＮＣＸｉＮＯＳ细胞有外源ｉＮＯＳ基因整合,转录和表达;ＮＡＤＰＨ黄递酶（ＮＡＤＰＨ ｄｉａｐｈｏｒａｓｅ     

LDL受体基因cDNA的RT—PCR分离,克隆及其在RFLP中的应用

利用ＲＴ－ＰＣＲ技术分离低密度脂蛋白受体基因ｃＤＮＡ,将长为２６０５ｂｐ的ｃＤＮＡ插入质粒ｐＪＮ６,并经全序列测定证实,该序列与已报道序列相比,存在两个变异碱基,即第７５４位Ｃ→Ｔ,和１６５４位的Ｇ→Ａ,这两个变异碱基并不改变编码的氨基酸,利用ＬＤＬ受体基因ｃＤＮＡ中的ＣｌａＩ片段的作为探针,检测到ＬＤＬ受体基因上外显子８的ＳｔｕＩ位点是个限制性片段长度多态性位点,所克隆的ｃＤＮＡ含有可译框架的全     

r射线诱发大鼠胚胎细胞转化与N—ras的激活

以ｒ射线诱发转化的大鼠胚胎细胞（ＲＥＣ：ｃｙｃ：ｒ３３）的ＤＮＡ构建粘粒基因库,用总基因库ＤＮＡ转染ＮＩＨ／３Ｔ３细胞,产生转化灶的ＤＮＡ作二轮转染,二轮转化的ＮＩＨ３／Ｔ３细胞内有大鼠ＲＥＣ：ｍｙｃ：ｒ３３ＤＮＡ中具转化活性的Ｎ－ｒａｓ基因,用不对称ＰＣＲ和ＤＮＡ序列分析法证明,ＲＥＣ：ｍｙｃ：ｒ３３细胞中鼠Ｎ－ｒａｓ的活化是由于第６１位密码子的Ａ→Ｇ点空为。ＮＩＨ／３Ｔ３转化灶中鼠Ｎ－ｒａｓ也     

人基因组YAC克隆DNA的Alu－PCR反应条件的系统研究

在人基因组ＹＡＣ克隆的Ａｌｕ－ＰＣＲ指纹分析中要求ＤＮＡ且扩增带具有ＹＡＣ特征性;在用ＡｌＵ－ＰＣＲ方法对ＹＡＣ克隆中的人类基因组ＤＮＡ片段进行特异的同位素标记时则要求被扩增标记的ＤＮＡ序列在插入片段中具有一定的弥散性。我们建立了两种不同的Ａｌｕ－ＰＣＲ反应体系以满足这一不同要求,并已得到较为满意的结果。根据不同条件下的Ａｌｕ－ＰＣＲ结果,分析了多引发位点ＰＣＲ中的一些现象,并作出了解释。     

HeLa细胞的反式作用因子CTF／NF－1与其顺式作用元件的特异性作用

本文运用凝胶延迟反应（ＧｅｌＲｅｔａｒｄａｔｉｏｎＡｓｓａｙ）和足迹法（Ｆｏｏｔｐｒｉｎｔｉｎｇ）研究了ＨｅＬａ细胞核蛋白中的反式作用因子ＣＴＦ／ＮＦ－１与其对应的顺式作用元件的特异性作用。研究结果表明ＨｅＬａ细胞的ＣＴＦ／ＮＦ－１包含有不同分子量的组分,它们均能特异性结合于特异位点ＡＴＡＴＴＧＧＣＴＴＣＡＡＧＣＣＡＡＡＡＴＧＧＡ序列,形成至少５种不同分子量形式的因子－元件复合物。这一结果对阐明ＣＴＦ／ＮＦ－１复杂多样的调控机制及其组成种类有重要意义。此外,本文还建立了一种制备核蛋白提取物的新方法,有效地解决了因反式作用因子含量极低带来的研究上的困难。     

肺癌中增殖细胞核抗原表达、DNA含量测定及其与预后的关系

本文采用ＳＰ免疫组织化学方法对６７例肺癌进行增殖细胞核抗原染色、与图像分析技术测定ＤＮＡ含量作相关性分析,探讨其在判断肺癌预后方面的意义。结果：（１）ＰＣＮＡ阳性表达强度与预后明显相关。（２）肺癌组织中ＰＣＮＡ表达强度与ＤＮＡ含量之间存在较好的相关性。（３）肺癌组织中多倍体随ＰＣＮＡ表达增强而增多,二倍体则随ＰＣＮＡ表达增强而减少。说明用简单的免疫组织化学方法检测肺癌组织中ＰＣＮＡ,以此来观察肿瘤细胞增殖活性,可作为判断肺癌患者预后的指标之一,易被广大基层单位推广应用     

FEN—1基因反义阻断细胞株（FL—FEN—1^—）的建立

ＦＥＮ－１是一咱结构特异性核酸酶,它在ＤＮＡ复制和修复过程中都起着重要的作用。将ＦＥＮ－１基因的ＮｃｏＩ－ＢａｍＨＩ片段反向克隆到哺乳动物细胞重组表达质粒ｐＭＡＭｎｅｏＡｍｐ＾－中,得到ＦＥＮ－１反义表达质粒ｐＭＡＭｎｅｏＡｍｐ＾－ＦＮＢ＾－,并转染ＦＬ细胞,经Ｇ４１８筛选后,获得ＦＥＮ－１基因表达被阻断的哺乳动物细胞ＦＬ－ＦＥＮ－１＾－。对细胞生长曲线的测定发现,ＦＬ－ＦＥＮ－１＾－在地塞米松的     

血管内皮细胞生长因子受体Flt—1胞外区基因的克隆及其在中国仓？…

朋原代培养的人脐静脉血管内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）提取细胞总ＲＮＡ,采用逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）方法得到ＶＥＧＦ受体Ｆｌｔ－１胞外区前３个ＩｇＧ样区域ｃＤＮＡ片段（Ｆｌｔ－１ｎ３）。将获得的受体基因克隆到真核表达载体ｐｃＤ－ＮＡ３．１中,得到重组质粒ｐｃＤＮＡ３．１／Ｆｌｔ－１ｎ３,通过南体转染方法将其转入中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）,用Ｇ４１８筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞砍隆。经固相结合实验筛选     

转录协同激活因子p300与增殖细胞核抗原

转录协同激活因子 ｐ30 0与许多转录因子相互作用参与多种生命活动如 :细胞分化、维持内环境稳态、调节生长等。而近年来研究表明增殖细胞核抗原 (ＰＣＮＡ)与ＤＮＡ聚合酶结合参与ＤＮＡ修复合成的许多步骤。但 ｐ30 0是否通过与ＰＣＮＡ相互作用参与ＤＮＡ的修复合成尚不清楚。瑞士苏黎士大学的Ｈａｓａｎ等利用免疫沉淀法、Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交、氚胸腺嘧啶标记与流式细胞术等技术对 ｐ30 0与ＰＣＮＡ的相互作用以及在ＤＮＡ修复合成中的作用进行研究 ,发现二者在细胞核的颗粒结构中形成一复合体 ,该复合体不依赖细胞周期Ｓ期 ,在体外…     

酵母基因组共表达基因簇与其上游顺式作用元件的关系

ＤＮＡ微阵列技术的快速发展开辟了从表达图谱研究基因组功能的新途径。酵母全基因组的测定和基因组表达图谱数据的发表使其成为研究真核基因转录调控机制的首选目标。运用生物信息学的工具研究了酵母基因组中基因上游顺式调控元件与基因组表达图谱的关系。结果表明,表达紧密关系的同一簇基因都具有若干特异的顺式作用元件,其表达受到相应反式调控因子的控制。找到的位点中,一部分与已知顺式作用元件相对应;另一部分可能是新的顺     

中国人r——干扰素cDNA在大肠杆菌中的高效表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从中国人淋巴细胞ｍＲＮＡ反转录产物中克隆了ＩＦＮ－ｒ－ｃＤＮＡ,序列分析证实了分子进化规律对ＩＦＮ－ｒｃＤＮＡ序列存在多态性的推论。在此基础上应用ＤＮＡ重组技术,将去信号肽中国人ＩＦＮ－ｒ ｃＤＮＡ克隆到原核表达质粒ｐＢＶ２２０ ＰＲＰＬ启动子下游,转化大肠杆菌ＤＨ５ａ,通过温度诱导表达,成功地在大肠杆菌中稳定、高效地表达了中国人ＩＦＮ－ｒ ｃＤＮＡ,其表达水平占全菌可溶性总     

肝再生增强因子的cDNA克隆,表达及表达产物的生物活性研究

以肝部分切除后再生肝组织为起始材料,利用ＲＴ－ＰＣＲ扩增出大夺再生增强因子（ＡＬＲ）,亚克隆子于ＰＧＥＭ－Ｔ载体,核苷酸序列测定证实为大鼠ＡＬＲ;将ＡＬＰＣＤＮＡ亚克隆于ＰＢＶ２２０质粒,构建了原核表达载体,并获高效表达菌株,特异表达蛋白占细菌总蛋白的１５％,原核表达的ＡＬＲ在体外缺乏促进大鼠原代培养肝细胞及ＳＭＭＣ－７７２１肝癌细胞ＤＮＡ合成的活性,但天体内１／３肝部分切除模型中可刺激肝细胞ＤＮ     

一种新的免疫—PCR系统的建立和应用研究

把ＰＣＲ技术作为指示系统引入免疫检测中,建立了免疫－ＰＣＲ技术。在本研究中,以ＰＥＩ作交联剂,首次成功地将特异性抗体直接与ＤＮＡ交联,构建了三种Ａｂ－ＤＮＡ基因探针,组成新的免疫－ＰＣＲ检测系统。此三种特异性Ａｂ－ＮＤＡ探针可用于检测三种相应抗原。检测ＨＳＡ抗原的最低含量可达１０＾－１８ｍｇ／ｍｌ,灵敏度比ＥＬＩＳＡ高１０＾６倍。     

r－干扰素对喉癌细胞系HEP－2HLA－DR抗原和增殖细胞核抗原表达的影响

本实验用人重组ｒ－干扰素（ｒｈｕ－ＩＦＮ）作用ＨＥＰ－２细胞后ＨＬＡ－ＤＲ抗原和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达的检测来探讨ｒ－干扰素对ＨＥＰ－２细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达诱导作用及体外抗增殖活性。用单克隆抗体ＣＲ３／４３（抗ＨＬＡ－ＤＲ）和Ｋｉ－６７（抗ＰＣＮＡ）。以链霉素一生物素技术（ＬＳＡＢ）检测ＨＥＰ－２细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原和ＰＣＮＡ表达,结果显示：ｒ－ＩＥＮ诱导ＨＬＡ－ＤＲ抗原和抑制ＰＣＮＡ表达其强弱与ｒ－ＩＦＮ剂量有关。资料提示：ｒ－ＩＦＮ不仅对ＨＥＰ－２细胞有细胞毒作用,同时能调节其细胞膜特性,因而在喉癌的治疗中是有效的。     

人血小板生成素（hTPO）的cDNA克隆,序列测定及其在COS—7细胞中的表达

本文利用反转录ＰＣＲ技术从人胎肝ｍＲＮＡ中分别扩增出ｈＴＰＯ　Ｎ－端和Ｃ－端两个ｃＤＮＡ片段,然后经酶切分别连接重组到质粒ｐＵＣ１９中进行序列分析,在确证其序列与国外文献报道完全一致的基础上,酶切、回收、连接其Ｎ－端、Ｃ端ｃＤＮＡ,并以此为模板,用ＰＣＲ法扩增出全长ＴＰＯｃＤＮＡ片段,并将其重组到穿梭质粒ｐＳＶＫ３中,在ＣＯＳ－７中进行了瞬时表达并检测出表达产物的活性     

丙型肝炎病毒PNA打点杂交检测方法同RT—PCR方法的比较

采用ＨＣＶ基因组结构区Ｃ区ｃＤＮＡ探针和非结构区ＮＳ３－４区ｃＤＮＡ探针,建立了用打点杂交检测血清中ＨＣＶ ＲＮＡ的方法,同采用ＨＣＶ基因组５＇端非编码区的一对寡核苷酸引物通过逆转录－聚合酶链式反应检测血清中ＨＣＶ ＲＮＡ折方法相比较,发现两种方法都能快速早期和特异的检出血清中ＨＣＶ ＲＮＡ,但ＲＴ－ＰＣＲ法敏感性优于ＲＮＡ打点杂交法。对于无血清学指标的慢性ＮＡＮＢ肝炎病人的诊断,可采用这两种方法