马铃薯无菌苗叶肉原生质体再生植株

商用马铃薯叶肉原生质体,在不同的液体培养基中浅层培养,耳生细胞分裂,并获得愈伤组织。将愈伤组织转到固体培养基上诱导分化,已从克新四号和68—62两个马铃薯品种的原生质体得到再生的完整植株。再生细胞的分裂频率受原生质体培养密度的影响。细胞团的生氏对液体培养基中的蔗糖浓度敏感。不同的原生质体培养基对愈伤组织的分化频率的影响非常显著。在分比培养基中加入3％的甘露醇,能提高愈伤组织的分化频率,并缩短分化期。     

水稻原生质体培养再生植株程序化的初步研究

从12个品种水稻成熟种子诱发愈伤组织并继代培养,通过MS培养基中2,4-D浓度的变换,研究了2,4-D对水稻愈伤组织生长的影响。用AA培养基建立适合原生质体培养的胚性细胞悬浮系仅需3个月。由悬浮细胞系游离的原生质体在改良的KPR培养基中进行液体浅层培养,有10个品种获得高植板率的细胞团。变换使用不同的分化培养基,从7个品种得到再生植株。实验重复性达到80%,初步实现了水稻原生质体培养的程序化。     

水稻原生质体培养再生植株程序化的初步研究

从１２个品种水稻成熟种子诱发愈伤组织并继代培养,通过ＭＳ培养基中２,４－Ｄ浓度的变换,研究了２,４－Ｄ对水稻愈伤组织生长的影响。用ＡＡ培养基建立适合原生质体培养的胚性细胞悬浮系仅需３个月。由悬浮细胞系游离的原和一质体在改良的ＫＰＲ培养基中进行液体浅层培养,有１０个品种获得高植板率的细胞团。变换使用不同的分化培养基,从７个品种得到再生植株。实验重复性达到８０％,初步实现了水稻原生质体培养的程序化。     

影响花椰菜下胚轴原生质体培养和植株再生的因素

从花椰菜的无菌苗下胚轴游离原生质体经纯化后的得率为1.5～2×10~6/g FW。通过液体浅层培养、平板固体培养、双层培养和gelrlte包埋培养方法的比较,发现gelrite包埋培养法,最有利于花椰菜下胚轴的原生质体培养。纯化的原生质体用MS-1培养基培养,再生细胞的分裂频率为24％。再生的愈伤组织转到分化培养基MS-5A或MS-5B上迅速分化出苗。共获得再生植株78株,移栽到盆中生长正常,结出正常的菜花。     

附地菜叶肉原生质体的分离、培养和分化

研究了附地菜叶肉原生质体的分离条件,得到了大量的有活力的原生质体。用改良的NT培养基做液体静置培养,41.7％的原生质体可以分裂,进而形成细胞团,转移到MS固体培养基后形成愈伤组织。最后在MS分化培养基上分化出芽和根。经一年继代培养的愈伤组织,分化能力无明显减弱。     

甘蓝型油菜下胚轴原生质体培养的研究

从甘蓝型油菜下胚轴分离纯化原生质体。种子萌发时进行光照处理对原生质体产率影响不大,但可提高其活力。对液体浅层、固体平板和“琼脂岛”3种培养方法进行比较,结果“琼脂岛”法效果最好,不但细胞分裂速度快,而且克隆形成频率高。再生的愈伤组织转到分化培养基上后迅速分化出芽。诱导生根后进行移栽,生长状况良好。     

新疆甜瓜子叶原生质体的培养和植株再生

从新疆甜瓜(Cucumts melo L.)的无菌苗子叶游离原生质体,用改良的 Miller 培养基(Ma)培养,得到了再生细胞的高频率分裂。比较了液体浅层培养、双层培养与琼脂糖珠看护培养等方法,发现由烟草瘤细胞 B_6S_3看护的琼脂培珠培养,最宜于新疆甜瓜子叶的原生质体。再生的愈伤组织经液体与固体两步培养程序分化出完整的小植株。     

大白菜无菌苗叶肉原生质体植株再生

商用大白菜叶肉原生质体,经液体培养基浅层培养,再生细胞分裂．并获得愈伤组织。愈伤组织转到分化培养基上诱导分化,已从城青2号大白菜叶肉原生质体得到再生的完整植株。再生细胞的分裂额率与培养基中的激素种类和浓度有关,受原生质体培养浓度的影响。多胺类物质[亚精胺(SPD)]的加入,可促进细胞分裂,井有益于以后植株的再生。通过提高新鲜培养液的pH值(6．5)可使细胞团的褐化得到明显的控制。在植株分化过程中,培养基中低浓度(1．1％)的蔗糖与植株分化有关。     

小偃麦原生质体培养及植株再生

硬粒小麦(Triticum durum Desf.AABB)和中间偃麦革[Elytrigia intermedium(Host)Nevski BBEEFF]的杂种 F_1——小偃麦的幼穗诱导的胚性愈伤组织继代培养近两年后,转入修改的 MS 液体培养基建成胚性细胞悬浮系。从此悬浮系分离的原生质体在修改的 KM_(8p)培养基中培养48小时后出现第一次分裂。15天后,在液体浅层培养条件下的细胞分裂频率为2%;而用1.2%琼脂糖固化进行固体平板培养时,细胞的分裂频率则为12.14%。20—30天后,添加渗透压降低的原生质体培养液。当从原生质体再生的愈伤组织长至2—4mm 大小时,逐步转至生长及分化培养基上再生出完整植株。     

甘蔗原生质体的体细胞胚胎发生

用甘蔗(台糖134)花粉植株叶外植体产生的愈伤组织,作为分离原生质体的材料。原生质体以液体浅层培养的方式培养在修改的 MS 培养基上,经培养后一周内,观察到第一次细胞分裂,约5—6周后,形成了愈伤组织。将胚性细胞团组成的愈伤组织转移到除去或降低2,4-D浓度,但含有 BA 的分化培养基上,约2—3周后,有的愈伤组织发育了胚芽鞘,另一些愈伤组织分化出胚根或根。系统观察了这些原生质体在分裂和愈伤组织形成过程中的体细胞胚胎发生。     

番茄子叶原生质体再生植株

从番茄2—3周苗龄的子叶游离原生质体,在 MS 液体培养基中(附加2,4-D 1,6-BA 0.1mg/l)培养;在培养过程中经常不断添加新鲜培养液。6周后将细胞团移到半固体 MS 培养基上(附加成份同上,琼脂0.3%)。然后将肉眼可见的愈伤组织再移入 MS 固体培养基上,愈伤组织长到直径为5 mm 大小时,转到 MS 分化培养基上(附加6-BA 2 mg/1,[AA 0.2 mg/l)诱导分化,得到了再生植株。比较了固体培养、悬浮培养和双层培养三种方法,观察原生质体生长情况,以双层培养为好。     

向日葵Ti T—DNA转化系的原生质体培养和细胞培养

根癌农杆菌离体感染向日葵子叶、下胚轴外植体形成的Ti T-DNA转化组织在激素条件下长期继代培养后,用来进行原生质体培养和细胞培养。适于B6S3转化系和T37转化系原生质体培养的培养基分别为附加不同激素和糖类的C81V和DPD培养基。用液体浅层法培养3～5天时,原生质体开始分裂。10天后形成细胞团。B6S3转化系还可直接从原生质体产生原胚状结构。转化系的细胞克隆均保持着激素自主型生长特性和冠瘿碱合成酶合成特性。     

甘蓝下胚轴原生质体高效成株系统的建立

本文采用萌发六天的甘蓝(Brassica oleracea)下胚轴材料游离原生质体,经纯化后的原生质体产量为1.45×10~6g~(-1)FW,于含有1.5mg/L BA,0.5mg/L NAA和0.5mg/L 2,4-D的KM 8p的培养基中进行液体浅层培养。原生质体培养3—4天后出现一次分裂,七天时统计分裂频率为50.3%,培养15天左右可形成细胞团,3—4周后即可形成肉眼可见的小愈伤组织,统计形成愈伤组织的植板率为1.25%。将愈伤组织转至含有1.5mg/L BA和0.2mg/L 2,4-D的MS固体扩增培养基上进行扩增,其后可在含有2mg/L BA和0.5mg/L ZT的MS分化培养基上分化出芽,其分化率为54.17%,分化芽可于生根培养基中生根形成完整植株,移栽后,在人工气候室中生长良好。在试验过程中,对取材的不同时间,酶解液的不同配比对原生质体产量的影响,以及不同培养基、不同培养密度、不同的激素配比和不同培养方法等方面对原生质体的再生和持续分裂的影响进行了讨论。     

疣粒野生稻胚性悬浮细胞系的建立及其原生质体的培养和植株再生

云南疣粒野生稻的成熟种子经55℃温度处理3d打破休眠后,在诱导培养基上诱导出愈伤组织。挑选胚性愈伤组织置于液体培养基中振荡培养,经3个月的继代培养,建立胚性细胞悬浮系。悬浮细胞经酶解、去壁后获得大量原生质体,固体包埋后添加液体培养基进行原生质体培养。在培养过程中调节培养体系的渗透压,获得小愈伤组织;经增殖后在分化培养基上诱导产生胚状体,成功得到疣粒野生稻的原生质体再生植株。     

培养基对烟草叶肉原生质体再生细胞的分裂及植株再生的影响

以普通烟草的一种香料烟品种为材料,用国产酶一步法游离叶肉原生质体。以液体浅层静置培养的方法培养原生质体,14天左右添加一次新鲜的不含甘露醇的培养液,使渗透压减半。以后转入完全没有甘露醇的固体培养基里。将形成的直径为1—2毫米的小愈伤组织转至分化培养基,再生了完整植株。而后将苗转至花盆里能正常生长。 比较了原生质体培养基的不同成分,发现将大量元素中两个成分的量略作改变,并增加水解乳蛋白及一些有机成分能加速分裂速度,分裂频率由对照NT培养基的50％左右提高到80％以上。讨论了出芽现象及培养条件对培养的影响。     

南蛇藤原生质体培养及植株再生

以4℃低温暗处理24 h的南蛇藤胚性愈伤组织为分离原生质体的原材料,用MS培养基进行液体浅层静置、固液双层以及琼脂糖包埋培养原生质体,获得再生愈伤组织并分化成苗,建立了原生质体培养体系。结果表明,低温暗处理利于高产率高质量原生质体的获得;0.5%纤维素酶+0.5%果胶酶+5 mmol.L-1MES为酶的最佳配方;12 h为最佳酶解时间;13%为甘露醇最佳浓度;静置12 h+振荡0.5 h为最佳酶解方式;液体浅层静置培养取得了较好的原生质体培养效果;MS+6-BA2.0 mg.L-1+IBA 0.1 mg.L-1为愈伤组织最佳分化培养基;1/2MS+NAA0.1 mg.L-1为最佳生根培养基。     

从胡萝卜根木质部愈伤组织分离的原生质体培养成再生植株

以胡萝卜(Daucus L.var.sativa DC.)根的中央木质部切段为外植体诱导了松软的愈伤组织。用酶法从这种愈伤组织分离出大量有活力的原生质体。当在补加有0.11毫克/升玉米素和0.18毫克/升萘乙酸的C81V培养基中进行液体浅层培养时,原生质体能再生新细胞壁,进行连续分裂,产生大量小愈伤组织。再转移到含有1毫克/升的激动素和0.2毫克/升萘乙酸的MS固体培养基上后,愈伤组织继续长大,并分化出小植株。从原生质体开始培养到形成再生植株的时间为1个半月至2个月。     

诸葛菜(Orychopheagmus violaceus)叶肉原生质体培养再生植株

由诸葛菜无菌苗的叶肉组织分离原生质体,在附加0.5 mg/L BA,1.0 mg/L 2,4—D(或NAA)和9％甘露醇的MS液体培养基中作浅层培养,10d后分裂频率约45％,两周时形成大量细胞团,随后直接转到分化培养基上或逐步降低原生质体培养基的渗透压及生长素浓度,均可诱导形成大量苗或胚状体结构。转移到无激素的培养基上即可形成完整植株。     

甘蔗组织培养新方法研究

根据植物细胞全能性和调节激素理论,经大量试验,研究总结出3种甘蔗组培快繁方法:液体微繁殖法、固培及早诱根法和固液双层培养法。试验选用了10多个我省自育甘蔗新品系,川糖系列材料.在固体培养及根的早期诱导研究中,以甘蔗心叶为外植体,根据不同材料筛选了培养基配方,易褐变的材料不仅除去细胞分裂素类,而且降低了生长素2,4-D 浓度,再分化期间试验了不同激素配比对再分化的影响,尤其是调整了根系发生时间,将再分化的小苗(高约1cm 时)及时转入附加活性炭、高     

紫云英叶片及叶肉原生质体的培养

本工作研究了豆科植物紫云英的叶片及叶肉原生质体的培养。叶片培养实验表明,诱导愈伤组织的最适培养基为MS加1.0-2.0毫克/升2,4-D和0.25毫克/升KT;诱导根分化需加1.0—5.0毫克/升NAA和0.5毫克/升BA;而苗分化则以0—0.5毫克/升IAA和0.5毫克/升BA为好。高浓度的NAA有利于根分化而抑制茎芽形成;高浓度的IAA对根和芽分化都有抑制作用。叶肉原生质体分离和培养试验表明,紫云英叶肉原生质体的释放及其培养活力受叶龄、植株生理状态和酶浓度的影响。叶肉原生质体在改良的KM8P培养基中能分裂。用改良KM8细胞培养基定期稀释,可使分裂持续进行而得到细胞团。BA和2,4-D为诱导紫云英叶肉原生质体分裂所必需。其最佳组合激素为BA 0.21毫克/升和2,4-D 1.13毫克/升。葡萄糖作为渗透压稳定剂时,其浓度明显影响原生质体的存活率。弱光条件下培养比黑暗培养有利于叶肉原生质体分裂。由叶肉原生质体形成的愈伤组织能形成瘤状结构和根。